免疫细胞分离与功能检测课件.ppt
《免疫细胞分离与功能检测课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《免疫细胞分离与功能检测课件.ppt(57页珍藏版)》请在三一办公上搜索。
1、目的要求,掌握:Ficoll-hypaque分层液分离PBMC的原理、方法,淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用,T细胞增殖试验的方法,B细胞的数量及功能的检测;熟悉:T细胞功能的体内试验,T细胞介导的细胞毒检测的方法;了解:淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。,目的要求掌握:Ficoll-hypaque分层液分离PBM,第一节 免疫细胞的分离,第一节 免疫细胞的分离,免疫细胞的分离及检测,检测:各类免疫细胞及其亚群的数量和功能测定方法:体外法为主目的:判断机体免疫状态意义:探讨疾病的发病机制、发展、预后、疗效,免疫细胞的分离 是指将各种参与免疫反应的 细胞从血液或
2、组织中分离出来,3,免疫细胞的分离及检测检测:各类免疫细胞及其亚群的数量和功能,免疫细胞的起源与分化 红细胞 血小板 肥,免疫细胞种类,免疫细胞种类,免疫细胞的分离流程,免疫细胞的分离流程外周血PBMC纯淋巴细胞T、B细胞TC亚群,PBMC包括:淋巴细胞、单核细胞各种血细胞比重不同,利用密度梯度离心进行分离常用分层液:ficollhypaque,percoll,一、 外周血单个核细胞的分离和纯化,PBMC包括:淋巴细胞、单核细胞一、 外周血单个核细胞的分,外周血各细胞成分的密度,细胞比重血小板1.0301.035PBMC1.0751.,Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心的分离法,主
3、要用于分离外周血中的单个核细胞。Ficoll分层液:密度1.0770.001离心:密度梯度离心分离:各类细胞按其相应密度重新分布,一、Ficoll分离法,Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心,Ficoll分层液分离单个核细胞示意图,Ficoll分层液分离单个核细胞示意图,二、淋巴细胞的分离 纯淋巴细胞群的采集 原理:利用单核细胞在37和Ca离子存在条件下,能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,据此建立许多从单个核细胞中除去单核细胞的方法,以获得高纯度的淋巴细胞群。,二、淋巴细胞的分离,(一)粘附贴壁法因B细胞也有贴壁现象,因此,本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所损
4、失。(二)吸附柱过滤法 将单核 细胞吸附于玻璃柱中,洗脱下来的主要是淋巴细胞,(一)粘附贴壁法,(三)磁铁吸引法利用单核细胞具有吞噬的特性,在悬液中加入羰基铁颗粒,待单核细胞吞噬铁颗粒后,用磁铁将细胞吸至管底,上层液中含较纯的淋巴细胞群。,(三)磁铁吸引法,(四)Percoll分离法,返回章目录,7898(四)Percoll分离法返回章目录,三、T、B细胞和T细胞亚群的分离,免疫磁珠分离法流式细胞术分离法 其他方法,三、T、B细胞和T细胞亚群的分离免疫磁珠分离法,(一)免疫磁珠分离法,(一)免疫磁珠分离法,488 nm 激光,+,-,前向散射光检测器,荧光检测器,电磁场,单个细胞被分类进入检测
5、管,流式细胞术分离原理示意图,488 nm 激光+-前向散射光荧光检测器电磁场单个细胞被分,第二节 淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类,第二节 淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类,一、T细胞表面标志及亚群,CD4+TCD8+T,CD3+CD4+CD8-,CD3+CD4-CD8+,主要为Th(help T cell)辅助性T细胞,主要为Tc(cytotoxic T cell)细胞毒性T细胞,一、T细胞表面标志及亚群CD4+TCD3+CD4+CD8-C,二、B细胞表面标志及亚群亚群,二、B细胞表面标志及亚群亚群,NK细胞典型标志:CD56和CD16,三、 NK细胞表面标志,NK细胞典型标志:CD56和
6、CD16三、 NK细胞表面标志,第三节 抗原提呈细胞表面标志,抗原提呈细胞(APC):是指能摄取、加工、处理抗原,并将抗原信息提呈给抗原特异性淋巴细胞的一类免疫细胞。,单核-巨噬细胞,树突状细胞,第三节 抗原提呈细胞表面标志抗原提呈细胞(APC):单核-巨,(1)分泌TNF-、NO、反应氧中间产物及蛋白水解酶等(2)ADCC效应(3)激活T细胞产生细胞因子等活化巨噬细胞协同杀伤肿瘤细胞。,(一)单核吞噬细胞(CD14),1.吞噬和杀伤作用 2.杀伤肿瘤细胞,(1)分泌TNF-、NO、反应氧中间产物及蛋白水解酶等(一,形态呈树突样具有一些相对特征性表面标志抗原提呈能力强能激活初始T细胞免疫应答的
7、始动者,二、树突状细胞 (dendritic cells,DC),特征:,形态呈树突样二、树突状细胞 特征:,1.起源于造血干细胞 由髓样干细胞(多数)、淋巴干细胞分化。2.表面标志丰富 如:MHC类分子及类分子、B7-1和B7-2、CD40、CD1以及粘附分子等。3.分泌多种细胞因子 IL-1、IL-6、IL-12、TNF-、IFN-等。,DC主要标志:CD1a、CD11c、CD83,1.起源于造血干细胞DC主要标志:CD1a、CD11c、CD,第四节 T细胞功能检测,一、T细胞功能检测,第四节 T细胞功能检测一、T细胞功能检测,淋巴细胞DNA合成分化母细胞刺激物细胞变大(一)T淋巴细胞增,
8、形态学检查法 3H-TdR掺入法 MTT比色法,淋巴细胞转化的检测方法,形态学检查法 淋巴细胞转化的检测方法,形态学检查法,形态学检查法,未转化和转化淋巴细胞的形态特征,转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞,原理:,刺激物,3756h,G1期 S1期,合成DNA,3H-TdR,3716h,DNA- 3H-TdR,测淋巴细胞内放射量(cpm),计算SI,判断淋巴细胞转化程度,外周血(T)G0期,3H-TdR掺入法,原理:刺激物3756hG1期 S1期 合成DNA 3H,评价:该方法敏感性高、客观性强、重复性好、可自动操作;设备昂贵、放射污染。,刺激指数(stimulating index,S
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 免疫 细胞 分离 功能 检测 课件
链接地址:https://www.31ppt.com/p-1987383.html