《临床检验基础》PPT课件.ppt
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1、,临床检验基础,第一章 血液一般检验,皖北卫生职业学院王玲玲,第一节 血液标本采集与处理,一,血液标本类型,二,血液标本抗凝剂与添加剂,三,血液标本采集,四,血液标本运送、保存与处理,1全血2血浆 主要用于化学和凝血项目检测等。3血清 主要用于化学和免疫学等项目检测。血清与血浆比较,主要是前者缺乏纤维蛋白原及某些凝血因子。4血细胞,静脉全血动脉全血末梢全血,一、血液标本类型,静脉全血动脉全血末梢全血,血液标本添加剂,抗凝剂,分离胶,促凝剂,二、血液标本抗凝剂与添加剂,我是血浆,还是血清呢?,抗凝:采用物理或化学的方法去除或抑制某种凝血因子的活性,以阻止血液凝固的方法称为抗凝。抗凝剂:能够阻止血
2、液凝固的化学物质称为抗凝剂(anticoagulant)或抗凝物质。,(一)抗凝剂,血细胞,(一)抗凝剂,常 用 抗 凝 剂,(二)添加剂,其 它 常 用 添 加 剂,静脉采血法,皮肤采血法,动脉采血法,三、血液标本采集,(一)皮肤采血法,皮肤采血法,又称毛细血管采血法,主要用于需要微量血液检验项目和婴幼儿血常规检验。,1、采血针皮肤采血法(1)主要器材:一次性采血针、微量吸管、消毒用品等。,(一)皮肤采血法,(2)采血部位:一般采用手指指端或耳垂,婴幼儿可选择趾或足跟内外侧缘。世界卫生组织(WHO)推荐采血部位为左手中指或无名指指端内侧。选择皮肤完好处采血。,(一)皮肤采血法,材料准备,选择
3、采血部位,按摩,消毒,针刺,吸血,止血,(一)皮肤采血法,(4)注意事项:采血时必须注意严格消毒和生物安全防范。采血针应为一次性使用的“专用采血针”,针刺深度以23mm为宜。取血时可稍加挤压,但切忌用力过大,以免使过多组织液混入血液中。采血要迅速,防止流出的血液发生凝固。手工法血液标本采集顺序为:血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数及白细胞分类计数、血型鉴定等。其他,激光皮肤采血法,(二)静脉采血法,静脉采血法临床应用广泛,所采集的静脉血能准确反映全身血液的真实情况,因其不易受气温和末梢循环变化的影响,更具有代表性。,普通采血法负压采血法,1、普通采血法 即传统的静脉采血方法。(1
4、)主要器材:注射器、试管、消毒用品等。,普通采血法负压采血法,(二)静脉采血法,(2)采血部位:通常采用肘部静脉。当肘部静脉不明显时,可采用手背部、手腕部和外踝部静脉。幼儿可采用颈外静脉采血,其它:股静脉、大隐静脉及锁骨下静脉等。,肘部静脉,(二)静脉采血法,材料准备,(3)简要操作,选择静脉,扎压脉带,消毒,穿刺,抽血,止血,放血与混匀,(二)静脉采血法,(4)注意事项:根据检验项目判断所需采血量,选择注射器。严格执行无菌操作。采血时切忌将针栓往回推,以免注射器中的空气进入血循环形成气栓。为避免溶血,注射器和容器必须干燥,抽血时应避免产生大量气泡,抽血完毕后应先拔下针头,然后将血液沿管壁徐徐
5、注入容器,需要抗凝时应与抗凝剂轻轻混匀,切忌用力振荡试管。进行血小板功能试验,为了防止血小板激活,须使用塑料注射器或经硅化处理后的玻璃试管或塑料试管。采血一般取坐位或卧位,不能立位采血,因为体位影响水分在血管内外的分布,影响被测血液成分的浓度。压脉带捆扎时间不应超过1分钟,否则会使血液成分浓度发生改变。,(二)静脉采血法,2、负压采血法 又称为真空采血法。(1)主要器材:负压采血系统 双向采血针 真空采血管,套管式一次性采血针,头皮静脉式一次性采血针,(2)采血部位:同普通采血法。,(二)静脉采血法,材料准备,(3)简要操作,选择静脉,扎压脉带,消毒,穿刺针端穿刺,混匀或不混匀血液,退出刺塞针
6、端针头,刺塞针端刺入采血管,止血,退出穿刺针端针头,(二)静脉采血法,(4)注意事项:使用前切勿松动或拔除采血管的胶塞头盖。刺塞针端的乳胶套能防止拔除采血试管后继续流血污染周围环境,达到封闭采血防止污染环境的作用,因此不可取下乳胶套。采血完毕后,先拔下刺塞针端的采血试管,后拔穿刺针端。一次采血,使用玻璃采血管多管采集血液标本的分配顺序为:血培养管、无抗凝剂血清管、枸橼酸钠抗凝管、其他抗凝剂管;使用塑料采血管分配顺序:血培养管(黄色)、枸橼酸钠抗凝管(蓝色)、加或未加促凝剂或分离胶的血清管、加或未加分离胶的肝素管(绿色)、EDTA抗凝管(紫色)、加葡萄糖分解抑制剂管(灰色)。,(三)动脉采血法,
7、1主要器材:2ml或5ml注射器(准备l000U/ml无菌肝素生理盐水溶液,以湿润注射器内腔、橡皮塞),或一次性动脉采血针、消毒用品等。2采血部位 多选用桡动脉(最方便)股动脉、肱动脉。3简要操作,桡动脉采血,(三)动脉采血法,4.注意事项:隔绝空气:用于血气分析的标本,采集后先立即封闭针头斜面,再混匀标本。立即送检:标本采集后应立即送检,否则应将标本置于26保存,但保存时间不应超过2小时。防止血肿:采血完毕,拔出针头后,用消毒干棉签用力按压采血处止血,以防形成血肿。,血液标本,预处理与保存,检验后保存与处理,运送,接受与拒收,四、血液标本运送、保存与处理,生物安全原则,唯一标识原则,及时运送
8、原则,四、血液标本运送、保存与处理,抗凝标本凝固,(二)血液标本拒收,采集容器不当,标本污染、容器破损,申请单和标本标识不一致,采血量不足或错误,溶血,转运条件不当,抗凝剂使用错误,四、血液标本运送、保存与处理,预处理:血常规检测:室温存放 血浆:可通过离心抗凝血获得血浆;血清:对未含促凝剂或分离胶采血管的血液标本置于37孵育,待血液完全凝固后离心分离血清;含促凝剂或分离胶采血管的血液标本可直接离心分离血清;对于需要特定细胞的实验,应根据要求采用不同的细胞分离液 或分离技术分离细胞,同时尽量避免混入其他细胞。,四、血液标本运送、保存与处理,(三)血液标本预处理与保存,保存:1分离后标本 不能及
9、时检验或需保留标本,一般应将标本置于4冰箱内保存。标本需保存至少1个月时,放置于-20冰箱内保存。标本需保存至少3个月时,分离后置于-70冰箱保存。标本存放时需要密封,以免水分挥发而使标本浓缩。标本应避免反复冻融。2立即送检标本 如血氨(密封送检)、红细胞沉降率、血气分析(密封送检)、酸性磷酸酶、乳酸等标本。,四、血液标本运送、保存与处理,四、血液标本运送、保存与处理,(四)血液标本检验后保存与处理,血液一般分析标本:室温24小时后处理,一般生化检验项目:4存放7天后处理,特殊检验项目:吸出血清或血浆-20冰箱内保存1个月以上。保存检验标本时应包括标本信息的保存,且与分离的血浆或血清标本相对应
10、。保存原则是在有效的保存期内确保被检测物质不会发生明显改变。,检验后废弃的血液标本处理严格按照国家标准实验室生物安全通用要求(GB19489-2004),由专人负责处理,根据医疗废物管理条例规定使用专用的容器或袋子包装,由专人送到指定的地点集中处理。检验后废弃的血液标本一般由专门机构采用焚烧的办法处理。,处 理,保 存,(一)检验申请,(二)患者准备,五、血液标本采集、运送与保存质量保证,(三)标本采集,(四)标本运送,第二节 血涂片的制备与染色,一,血涂片制备,二,血涂片染色,第二节 血涂片的制备与染色,推片,载玻片,血液,将推片匀速向前,勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度:快、大(厚)。慢
11、、小(薄),一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号,李四,B 1 2 3,第二节 血涂片的制备与染色,良好血液涂片标准厚薄要适宜,头体尾要明显,细胞分布要均匀,血膜边缘要整齐,并留有一定的空隙。,引起血涂片分布不均的主要原因:推片边缘不整齐用力不均匀载片不清洁,第二节 血涂片的制备与染色,二、血涂片染色(一)瑞氏染色法(Wrights stain)1.瑞氏染料(复合染料)酸性染料伊红(E-)碱性染料亚甲蓝(M+,又名美蓝)美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青),甲醇的作用:溶解美蓝和伊红,解离为 M+和E-;脱水作用,固定细胞形态
12、,增强染色效果,第二节 血涂片的制备与染色,第二节 血涂片的制备与染色,2 染色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。物理的吸附作用化学的亲和作用 嗜酸性颗粒碱性与酸性染料粉红色;细胞核蛋白酸性与碱性染料紫蓝色或蓝色;中性颗粒等电状态与伊红和美蓝染淡紫红色。,第二节 血涂片的制备与染色,勿冲洗再加瑞氏染色液5-8滴后将液和液充分混匀静置10分钟,直接流水冲洗3-5分钟(切勿先倒掉染液),涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆盖整个血膜1分钟,3.pH值的影响 细胞各种成分均属蛋白质(两性电解质),第二节 血涂片的制备与染色,第二节 血
13、涂片的制备与染色,染色所用玻片必须清洁,无酸碱污染。配制瑞氏染液必须用优质甲醇。稀释染液必须用缓冲液。冲洗用水应近中性。新鲜配制的染料偏碱,须在室温贮存一定时间,贮存时间愈久,染色效果愈好。DeamGilliland 等采用吸光度比值 作为瑞氏染液的质量规格。,第三节 白细胞显微镜检查,一,白细胞计数,二,白细胞分类计数,三,白细胞形态检查,四,嗜酸性粒细胞计数,五,红斑狼疮细胞检查,血液,血浆,血细胞,红细胞,白细胞,血小板,第三节 白细胞显微镜检查,白细胞计数(white blood cell count)是指测定单位体积外周血中各种白细胞的总数。白细胞计数结果仅反映循环池中的细胞数量。,
14、一、白细胞计数,1原理 白细胞显微镜计数法是将全血用稀酸溶液稀释一定倍数,使红细胞破坏后,充入改良牛鲍(Neubauer)计数板内,在普通光学显微镜下计数一定范围内的白细胞数,经换算求出每升血液内的白细胞总数。2白细胞稀释液 冰乙酸 破坏红细胞,且使白细胞核固定清晰 亚甲蓝或结晶紫 使白细胞核略着色,便于识别 蒸馏水,(一)方法,3器材,(1)改良牛鲍计数板(2)改良牛鲍计数板专用盖玻片(血盖片)(3)微量吸管(4)显微镜,一、白细胞计数,Neubauer计数盘(牛鲍氏计数盘),盖玻片,液面高度为 0.1 mm,一、白细胞计数,大方格中方格小方格,每个大方格体积=1X1x0.1=0.1mm3=
15、0.1 L,0.38ml稀释液 混匀 20ul血液 充池、静置 镜下计数、计算,一、白细胞计数,计数:用低倍镜计数四个大方格内的白细胞数(N)。计算:WBC/L=N/4 10 106 20=N/20 X 109/L,0.1L 1L 1L,稀释倍数,一、白细胞计数,1采血时间的影响 2计数误差(1)技术误差(technical errors)器材误差 采血与取血不当 稀释倍数不准 充池不当 白细胞计数不准确(2)固有误差(inherent errors)又叫计数域误差有核红细胞的影响校正公式:,(二)质量保证,x:校正前白细胞数y:在白细胞分类计数时,计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数
16、。,一、白细胞计数,例:校正前白细胞数为12109/L,在作白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个,则校正后白细胞数L=12109/L=8.6109/L,例:校正前白细胞数为12109/L,在作白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个,则校正后白细胞数L=12109/L=8.6109/L,一、白细胞计数,4经验控制 以血涂片中所见白细胞的多少粗略核对白细胞计数结果有无大的误差。表 血涂片白细胞密度与白细胞总数的关系,一、白细胞计数,(三)方法学评价 白细胞计数的方法学评价,一、白细胞计数,白细胞总数高于参考区间的上限称白细胞增多,低于参考区
17、间的下限称白细胞减少。白细胞总数增多或减少主要受中性粒细胞数量的影响,其临床意义见白细胞分类计数。,(五)临床意义,(四)参考区间,成人:(3.59.5)109/L;儿童:(512)109/L;6个月2岁:(1112)109/L;新生儿:(1520)109/L,一、白细胞计数,二、白细胞分类计数,对各种白细胞分别计数,即白细胞分类计数(differential count,DC)。白细胞分类计数的方法有 显微镜分类计数法 血细胞分析仪分类计数法,(一)方法显微镜分类计数主要是将染色好的血涂片在油镜下根据白细胞形态学特征逐个分别计数(一般计数100200个白细胞),得出各种白细胞的相对比值或百分
18、率,并注意观察其形态的变化。,1简要操作,二、白细胞分类计数,最佳观察部位:体 尾 交 界 处,头,体,尾,体尾交界,2报告方式(1)白细胞分类计数结果:以各种白细胞所占的比值或百分率表示,或者根据白细胞总数计算出各种白细胞的绝对值报告。(2)幼稚或异常白细胞:发现幼稚或异常白细胞,应计算在白细胞 分类比值或百分率中。(3)有核红细胞:血涂片中如见到有核红细胞,应逐个计数,但 不列入白细胞总数之内,而是报告分类计数100个白细胞的同时 见到的有核红细胞个数。(4)寄生虫:如发现疟原虫等应报告。(5)红细胞、血小板的形态:如有异常改变应报告。,二、白细胞分类计数,(二)方法学评价 白细胞分类计数
19、方法学评价,二、白细胞分类计数,(三)参考区间 白细胞分类计数参考区间(成人),注:本参考区间适用于静脉血的仪器检测方法。此参考区间来源于中华人民共和国卫生行业标准WS/T 405-2012。,二、白细胞分类计数,(四)临床意义,二者的临床意义基本一致。(1)中性粒细胞生理性增多:一天之内一般下午较上午高。剧烈运动、情绪激动、严寒、暴热。新生儿。妊娠5个月以上及分娩时。以上常为一过性增多吸烟者平均白细胞总数比不吸烟者高。,1.白细胞总数与中性粒细胞,二、白细胞分类计数,中性粒细胞病理性增高,严重的组织损伤大量血细胞破坏,急性感染,急性大出血,恶性肿瘤,急性中毒,白血病,(2)中性粒细胞病理性增
20、高,二、白细胞分类计数,中性粒细胞病理性减少,某些血液病:如再生障碍性贫血,某些感染:伤寒、副伤寒沙门菌,慢性理化损伤,自身免疫性疾病:如系统性红斑狼疮,脾功能亢进,(3)中性粒细胞病理性减少,二、白细胞分类计数,1生理变化 白天较低,夜间较高,上午波动大,下午较恒定。2病理变化(1)嗜酸性粒细胞增多:超敏反应性疾病:如支气管哮喘、荨麻疹、过敏等。寄生虫病:如蛔虫、钩虫等。某些皮肤病:如银屑病、湿疹等。某些血液病:如慢性粒细胞白血病。某些恶性肿瘤,如霍奇金病。某些传染病:如猩红热。某些内分泌疾病,如脑垂体功能低下。,2.嗜酸性粒细胞,二、白细胞分类计数,2.病理变化(2)嗜酸性粒细胞减少:伤寒
21、、副伤寒、大手术后。长期使用肾上腺皮质激素。3嗜酸性粒细胞计数的其它应用(1)观察急性传染病的预后。(2)观察大手术和烧伤病人的预后。(3)肾上腺皮质功能测定。,2.嗜酸性粒细胞,二、白细胞分类计数,(1)嗜碱性粒细胞增多慢性粒细胞性白血病:常伴嗜碱性粒细胞增多,可达10%或更多。嗜碱性粒细胞性白血病:嗜碱性粒细胞异常增多,可达20%以上,多为幼稚型。过敏性疾病:溃疡性结肠炎、超敏反应等。骨髓纤维化和某些转移癌。(2)嗜碱性粒细胞减少多无临床意义。,3.嗜碱性粒细胞,二、白细胞分类计数,(1)淋巴细胞病理性增多绝对增多:某些病毒或细菌所致的传染病,如风疹、流行性腮腺炎、传单等;某些慢性感染,如
22、结核病恢复期也可见淋巴细胞增多,但白细胞总数多正常;急、慢性淋巴细胞性白血病淋巴细胞增多明显,且可导致白细胞总数增高。相对增多:再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等淋巴细胞百分率相对增高。(2)淋巴细胞减少主要见于长期接触放射线或应用肾上腺皮质激素之后,在急性化脓性感染时由于中性粒细胞明显增高可导致淋巴细胞相对减少。,4淋巴细胞,二、白细胞分类计数,(1)单核细胞增多 正常儿童单核细胞较成人稍高病理性增多见于:某些感染:如亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑热病、急性感染的恢复期、活动性肺结核等。某些血液病:单核细胞性白血病、粒缺恢复期、恶性组织细胞病、淋巴瘤及骨髓增生异常综合征(MDS)等。(2)单核细
23、胞减少 意义不大。,5单核细胞,二、白细胞分类计数,胞体:1015m,圆形。胞核:分25叶,以3叶核为主。核染色质:粗糙,深紫红色。胞浆:粉红色,颗粒量多、细小、均匀、紫红色。,三、白细胞形态检查(一)外周血正常白细胞形态,1.中性分叶核粒细胞,胞体:1015m,圆形。胞核:弯曲呈杆状、带状、腊肠样。核染色质:粗糙,深紫红色。胞浆:粉红色,颗粒量多、细小、均匀、紫红色。,2.中性杆状核粒细胞,三、白细胞形态检查(一)外周血正常白细胞形态,三、白细胞形态检查(一)外周血正常白细胞形态,中性粒细胞,(1)胞体:1315m,圆形。(2)胞核:多分为两叶。(3)核染色质:粗糙,深紫红色。(4)胞浆:着
24、色不清,橘黄色颗粒、粗大、整齐排列、均匀充满胞质。,3.嗜酸性粒细胞,三、白细胞形态检查,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,三、白细胞形态检查,(1)胞体:1012m,圆形。(2)胞核:因颗粒遮盖而胞核不清晰。(3)核染色质:粗糙,深紫红色。(4)胞浆:着色不清,紫黑色颗粒、量少、大小不均、排列杂乱、可盖于核上。,4.嗜碱性粒细胞,三、白细胞形态检查,胞体:615m,圆形或椭圆形。胞核:圆形、椭圆形、肾形。核染色质:深紫红色,粗糙成块,核外缘光滑。胞浆:透明、淡蓝色、多无颗粒,大淋巴细胞可有少量粗大、不均匀紫红色颗粒。,5.淋巴细胞,大淋巴细胞,小淋巴细胞,三、白细胞形态检查,都是什么细胞?,三、白细
25、胞形态检查,6.单核细胞,胞体:1220m,圆形、椭圆形或不规则形。胞核:肾形、山字形、马蹄形、扭曲折叠不规则形。核染色质:疏松网状,淡紫红色,有膨胀和立体起伏感。胞浆:半透明、灰蓝色或灰红色。颗粒细小、尘土样紫红色。,三、白细胞形态检查,三、白细胞形态检查(二)外周血异常白细胞形态,1.中性粒细胞的毒性变化在严重传染病、各种化脓性感染、败血症、恶性肿瘤、中毒、大面积烧伤等病理情况下,中性粒细胞可发生下列形态改变,大小不均,中毒颗粒,空泡,杜勒体,核变性,即中性粒细胞体积大小悬殊。可能是在内毒素等因素作用下骨髓内幼稚中性粒细胞发生不规则分裂的结果。常见于一些病程较长的化脓性感染。,(1)大小不
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