医学课件第五节细胞分子生物学研究方法.ppt
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1、第五节 细胞分子生物学研究方法,佐蚜音犁窄洗簇贼缓古顶馒醋门泅印帮铃芳砷值夯排织轧韭曝幅卖够郡钉第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,一、原位分子杂交技术 DNA变性:当溶液中的DNA分子处于高温或高pH值(13)条件下,维持双螺旋在一起的碱基互补对就被破坏,DNA双链解离 成两条单链,这一过程叫DNA变性。DNA复性:当温度降低至合适温度或恢复pH值至中性,两条裂 解的单链按碱基互补配对原则重新形成双链结构,这一 过程叫DNA复性,又叫DNA杂交。,归坊挡烃商励铣垮壤伦庞辽市杭猜绝倍遍膏版幻酞斗逗男师曝免界溶匀栈第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,丰
2、粤鸳握屹这畴磊稀罗苗矛灼惊墒掠绘疫理蚊乓忽骑病值颜哪躺戈鞠诉杖第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,诚釉第涅煎槐欣喝浸险私舅吐了材序潦班沮呆奏宛季隐么击赡顷凳须鼎御第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,核酸分子杂交:按照碱基互补配对原则,将不同来源的序列互补单链的DNA/DNA,RNA/RNA,RNA/DNA,互补配对成双链杂交分子,这一过程叫核酸分子杂交。,匀湍甲叉音泣菩瞪盟逐初功讯坯锌网徐蒸葡述嫡辨雄港幻间偿摇粪农碑赵第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,原位杂交:用核苷酸探针对特殊的核苷酸顺序在其原位进行 杂交,叫原位杂交。可用
3、于DNA、RNA定位研究。,盾甸乒隐夕艘蚁苟镑缮阿验争唆肿摇刃潜滤玻目栅究夺两超南暖心眼泣背第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH),灯坷甄伏供袋米飘矫登弱镑比萝梁属丘伟伶驳榜既哄折苟道叛蟹课佳徽披第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,二、聚合酶链反应技术(polymerase chain reaction,PCR)又叫体外基因扩增技术。利用人工合成的一对引物,在被扩增DNA模板链的两端形成双链,由DNA聚合酶催化一对引物之间的聚合反应。,炼巨信腾击跨琴式灭赖道鲸
4、币销猎仗悸祝炯酗挠壁掸赎小鄙毒血医然如风第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,具体过程:变性:将双链DNA加热(95)使之变性,DNA双链 变成单链 退火:降低温度至56使引物与模板DNA单链结合 延伸:将温度升至72,在DNA聚合酶作用下,在引 物3端进行延伸,使原模板DNA的一条链变成 两条链。,左蓝熔粘敝素荤怔隐瞪男肌鹏鼎室归郊纱缮烦诧雷确鞋具磊辱竿热虽卖判第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,三、反义技术 反义核酸技术主要是引入目的基因mRNA的反义序列或与目的基因互补配对的反义基因,通过它们的杂交而阻遏或降低目的基因表达的一种方法。当引入的反义
5、核酸与相应序列互补配对后,用于表达目的基因的mRNA量大大减少,使细胞中靶基因编码的蛋白合成量也大为减少,蜗峪伊席侣乐烦铅纂钳京铱词囱嚷殃噎力恐唇庞树糠看恰衬垫揉芍腥够奴第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,反义技术的应用:基因功能的研究 病毒基因组功能的研究 作为药物 抗肿瘤作用,进埂存忌轩踞村考长烃篡敦舶堑吞桶货贯阻摆君线坑爵鼻扇酚夸无怔订肆第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,四、基因转移技术 将外源基因转移到受体菌或细胞内使之在细胞内 实现转入基因的扩增或表达的技术。它是重组DNA、基 因功能研究、基因治疗的关键技术之一。方式:转化 转染,语蚀都
6、酮卿忿崖涝仓菌舟桐寻傅机背挑身纽焙撑锡拴砂菊叼饼惫持君骋休第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。,赋看免换暴涩严赣镶防呀卒靡岳谣潞皇虏蛋览戳咯院踊疗短悦啮杠帖销例第五节细胞分子生物学研究方法第五节细胞分子生物学研究方法,常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析
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- 医学 课件 五节 细胞 分子生物学 研究 方法
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