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1、参桂胶囊防治心功能不全研究报告研究单位:中国中医研究院西苑医院委托单位:(加拿大)上海玉丹药业公司参桂胶囊对大鼠实验性心肌梗死后心功能影响的研究刘颖,徐慧,缪宇,张颖,殷惠军,蒋跃绒(中国中医研究院西苑医院心血管病研究室,北京,100091)1.材料与方法 1.1 实验材料1.1.1实验动物:选用健康Wistar大鼠(180220g)70只,雄性。由中国科学院动物研究所提供,合格证号:京动许字,2000-013-058。1.1.2实验药物:参桂胶囊由(加拿大)上海玉丹药业公司提供,产品批号:20030801,规格:0.3g/粒。1.2 实验方法1.2.1 动物模型建立与分组:大鼠乙醚麻醉,然后
2、经左边第四肋间剪开皮肤,钝性分离肌肉组织,打开胸腔,剪开心包膜,挤压出心脏,在左心耳与肺动脉圆锥之间穿线,结扎左冠状动脉前降支(于分支起点处约1-2mm)造成AMI模型,然后迅速将心脏放回胸腔,随即缝合胸腔及皮肤。假手术组除不结扎冠状动脉外,其余操作与AMI模型组动物相同。术后给予青霉素4万单位,并记录标准肢导联导(纸速50/s)心电图,ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后,大鼠随机分为7组:即正常对照组10只,常规饲养;模型对照组10只,常规饲养;假手术组10只:常规饲养;阳性药开搏通对照组10只,5mg/Kg/d开搏通溶液;参桂胶囊大剂量组10只,参桂胶囊1.8g/Kg/d;参桂胶囊中剂
3、量组10只,参桂胶囊0.9g/Kg/d;参桂胶囊小剂量组10只,参桂胶囊0.45g/Kg/d。术后第二天,开始灌胃给药,连续8周。1.2.2血液动力学及心功能的测定:连续灌胃8周后,大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯溶液(0.07ml/Kg)进行麻醉,分离右颈总动脉,插入充满37肝素生理盐水溶液的导管,用NIHON KOHOEN RM06018型多导生理记录仪描记动脉收缩压(SBP)及舒张压(DBP)。将导管进一步插入左心室,记录左室收缩末压(LVESP)和左室舒张末压(LVEDP),观察左室心脏功能的改变。1.2.3 左室重量及心脏指数的测定:多导生理记录仪描记各项参数完毕,立即开胸取出心脏称重
4、。用电子天平称心脏重量 及左心室重量,并计算心脏指数(体重与心脏重量之比,mg/g)。1.3 统计学处理:所有计量资料以均数!标准差()表示,用PHS软件进行F检验。2 结果2.1 参桂胶囊对大鼠左室重量及与心脏指数的影响手术前及手术后8周后各组大鼠体重均无明显差别(P0.05),模型组大鼠左室重量及心脏指数(心脏重mg/体重g)大于假手术组(P0.01);参桂胶囊大、中剂量组及开搏通组左室重量和心脏指数较模型组明显减小(P0.05和P0.01)。结果见表1。表1. 参桂胶囊对大鼠左室重量及与心脏指数的影响 ()组 别 剂 量 体 重(g) 左室重量(g) 心脏指数 (mg/g)空白对照组 1
5、0ml/Kg 338.4217.71 0.810.11* 2.800.21*假手术组 10ml/Kg 333.2314.55 0.820.09* 2.810.19*模型组 10ml/Kg 330.9016.08 1.140.20 3.000.22参桂胶囊组 30g生药/Kg 345.5713.66 0.860.15* 2.800.17*15g生药/Kg 346.6920.52 0.910.10* 2.900.22* 7.5g生药/Kg 331.7119.23 1.030.12 3.010.25开搏通组 5mg/Kg 349.1920.31 0.840.13* 2.490.23* 注:与模型组相
6、比,*P0.05,*P0.01 2.2 参桂胶囊对AMI大鼠左室功能的影响 与模型组相比较,参桂胶囊大、中剂量组和开搏通组LVEDP明显降低(P0.05和 P0.01);参桂胶囊大剂量组和开搏通组LVESP和模型组相比亦有显著增加(P0.01), 参桂胶囊各组+dp/dtMax与模型组相对比较均有增加(P0.01,P0.05)。结果见表3。 表2. 参桂胶囊对大鼠左室心功能的影响 (xs)组 别 剂 量 SBP DBP LVESP LVEDP +dp/dtMax Kpa Kpa Kpa Kpa Kpa/s空白对照组 10ml/Kg 17.842.41 9.99 2.09* 19.111.60*
7、 0.300.19* 559.7669.69* 假手术组 10ml/Kg 18.094.02* 10.251.34* 18.081.58* 0.390.28* 556.2860.75* 模型组 10ml/Kg 15.791.93 9.091.46 14.091.36 1.240.57 311.1045.97参桂胶囊组 30g生药/Kg 18.101.37 9.591.64 17.291.72* 0.600.47* 509.7873.45* 15g生药/Kg 17.191.85 10.191.89 15.901.49 0.860.54* 459.3654.09* 7.5g生药/Kg 16.532
8、.56 10.011.53 15.871.78 1.090.52 422.5247.52*开搏通组 5mg/Kg 15.662.84 8.891.36 16.551.73* 0.460.31* 469.5445.38* 注: 与模型组比较: *P0.05 , * * P0.01 3.结论31参桂胶囊对心肌梗死范围的影响:参桂胶囊大、中剂量组及开搏通组左室重量和心脏指数较模型组明显减小,表明参桂胶囊有较好的抑制AMI大鼠心肌代偿性肥厚增生的作用。32参桂胶囊对血液动力学的影响:LVEDP、LVESP和+dp/dtMax是反映心脏收缩和舒张功能的敏感参数,是判断AMI后患者预后的重要指标。结果表明
9、,参桂胶囊和开博通皆有一定的降低AMI大鼠LVEDP和升高LVESP、+dp/dtMax的作用。说明参桂胶囊的益气通阳、活血化瘀作用可干预AMI大鼠心室重构的病理过程,防止AMI后心室的进一步扩大和心力衰竭的发生。参桂胶囊对心肌梗死后心功能不全大鼠ET、Ang的影响的研究刘颖,张颖,殷惠军,蒋跃绒(中国中医研究院西苑医院心血管病研究室,北京,100091)1.材料与方法 1.1 实验材料1.1.1实验动物:选用健康Wistar大鼠(180220g)70只,雄性。由中国科学院动物研究所提供,合格证号:京动许字,2000-013-058。1.1.2实验药物:参桂胶囊由(加拿大)上海玉丹药业公司提供
10、,产品批号:20030801,规格:0.3g/粒。1.2 实验方法1.2.1 动物模型建立与分组:大鼠乙醚麻醉,然后经左边第四肋间剪开皮肤,钝性分离肌肉组织,打开胸腔,剪开心包膜,挤压出心脏,在左心耳与肺动脉圆锥之间穿线,结扎左冠状动脉前降支(于分支起点处约1-2mm)造成AMI模型,然后迅速将心脏放回胸腔,随即缝合胸腔及皮肤。假手术组除不结扎冠状动脉外,其余操作与AMI模型组动物相同。术后给予青霉素4万单位,并记录标准肢导联导(纸速50/s)心电图,ST段弓背抬高示AMI形成。造模成功后,大鼠随机分为7组:即正常对照组10只,常规饲养;模型对照组10只,常规饲养;假手术组10只:常规饲养;阳
11、性药开搏通对照组10只,5mg/Kg/d开搏通溶液;参桂胶囊大剂量组10只,参桂胶囊1.8g/Kg/d;参桂胶囊中剂量组10只,参桂胶囊0.9g/Kg/d;参桂胶囊小剂量组10只,参桂胶囊0.45g/Kg/d。术后第二天,开始灌胃给药,连续8周1.2.2内皮素(ET)、Ang的测量: 经右总颈动脉取血,用放射免疫法检测ET、Ang含量,试剂药盒由中国人民解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。1.3 统计学处理:所有计量资料以均数!标准差()表示,用PHS软件进行F检验。2结果:21 参桂胶囊对AMI大鼠血浆ET、Ang含量的影响手术后8周,模型组大鼠血浆ET、Ang含量明显上升,与空白对照组和假
12、手术组比较差异显著(P0.01),参桂胶囊大、中剂量组和开搏通组血浆ET含量皆较模型组明显减少(P0.01)。参桂胶囊大剂量组和开搏通组血浆Ang含量亦较模型组明显减少(P0.05和P0.01)。结果见表1: 表1. 参桂胶囊对大鼠ET、Ang的影响 ()组 别 剂 量 ET(pg/ml) Ang(pg/ml)空白对照组 10ml/Kg 283.3456.07* 690.0330.91 假手术组 10ml/Kg 309.0945.61 709.9043.33 模型组 10ml/Kg 329.6766.10 692.2333.65 参桂胶囊组 30g生药/Kg 244.4435.21* 595.
13、9230.65* 15g生药/Kg 263.7043.26* 629.4738.58 75g生药/Kg 295.1134.51 690.3940.12开搏通组 5mg/Kg 231.4141.72* 567.2034.66* 注:与模型组相比,*P0.05,*P0.01 3讨论:是引起心肌缺血坏死重要的细胞因子之一。缺血、缺氧、血管剪切力、凝血酶原激活、转化生长因子、肾上腺素和血管紧张素等理化因子作用于局部血管,能促进释放。浓度的增高一方面使心肌耗氧量增加,另一方面使冠脉痉挛,血流减少,心肌缺血缺氧加剧。缺血导致释放,释放又进一步加重缺血损伤1。Ang可以促进蛋白质合成、促进原癌基因表达,是一
14、种高效的生长因子,研究发现心血管组织Ang参与心衰等所致心肌细胞肥大的发生2。本项研究通过结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支复制心功能不全模型,观察了参桂胶囊对AMI后心功能不全大鼠血清ET 、Ang的影响,实验表明,AMI后大鼠循环Ang、ET水平上升,参桂胶囊可明显降低血清ET、Ang水平,说明改药能够减弱循环及局部RAS对AMI后VR的刺激作用;降低循环中ET含量,减少其促进心肌细胞肥大的作用;增加ANP的表达从而抑制心室重构的发展。参考文献:1.Breich EA,et al.Exercise induced cardiac hypertrophy:a correlation of
15、blood flow and microvasculature.J AppI physiol 1998;60:1259.2.George KP,et al.The athletic heart syndrome.Sports Medicine.2001;11:300.参桂胶囊对心肌梗死后心功能不全大鼠心肌细胞膜Na+ -K+ATPase、Ca2+ -Mg2+ATPase活性及膜脂质过氧化作用的影响刘颖,张颖,殷惠军,蒋跃绒(中国中医研究院西苑医院心血管病研究室,北京,100091) 1.材料与方法 1.1 实验材料1.1.1实验动物:选用健康Wistar大鼠(180-220g)70只,雄性。由
16、中国科学院动物研究所提供,合格证号:京动许字,2000-013-058。1.1.2实验药物:参桂胶囊由(加拿大)上海玉丹药业公司提供,产品批号:20030801,规格:0.3g/粒。1.2 实验方法1.2.1 动物模型建立与分组:大鼠乙醚麻醉,然后经左边第四肋间剪开皮肤,钝性分离肌肉组织,打开胸腔,剪开心包膜,挤压出心脏,在左心耳与肺动脉圆锥之间穿线,结扎左冠状动脉前降支(于分支起点处约1-2mm)造成AMI模型,然后迅速将心脏放回胸腔,随即缝合胸腔及皮肤。假手术组除不结扎冠状动脉外,其余操作与AMI模型组动物相同。术后给予青霉素4万单位,并记录标准肢导联导(纸速50/s)心电图,ST段弓背抬
17、高示AMI形成。造摸成功后,大鼠随机分为7组:即正常对照组10只,常规饲养;模型对照组10只,常规饲养;假手术组10只:常规饲养;阳性药开搏通对照组10只,5mg/Kg/d开搏通溶液;参桂胶囊大剂量组10只,参桂胶囊1.8g/Kg/d;参桂胶囊中剂量组10只,参桂胶囊0.9g/Kg/d;参桂胶囊小剂量组10只,参桂胶囊0.45g/Kg/d。术后第二天,开始灌胃给药,连续8周。1.2.2取材20%氨基甲酸乙酯麻醉大鼠,仰卧固定,0.9%盐水心脏灌流至流出液肉眼为清液,迅速截取心脏盐水冲洗,迅速截取左室游离壁和心尖部,放入冻存管内,置入液氮内保存,备用。1.2.3心肌线粒体制备称取大鼠左心室心肌0
18、.5g,用Tris-HCl缓冲液(20mmol-,PH=7.0)制成10%的组织匀浆,低温高速离心10min(8000min-)。取上清液再离心15min(14000min-),粗线粒体沉淀,重复超速离心次,得到较纯线粒体沉淀。以Lowrry法进行蛋白定量。1.2.4心肌线粒体酶活性的测定取少量线粒体沉淀用于测定Na+ -K+ATPase、Ca2+ -Mg2+ATPase活性,按试剂盒说明进行。1.2.5心肌线粒体钠、钙、镁含量测定取少量线粒体沉淀用硝酸消化后,用原子吸收分光光度仪测定其钠、钙、镁含量。1.3 统计学处理:所有计量资料以均数!标准差()表示,用PHS软件进行F检验。2.结果:2
19、1参桂胶囊对心功能不全大鼠心肌细胞膜Na+ -K+ATPase、Ca2+ -Mg2+ATPase活性及膜含量的影响,见表1。表1. 各组大鼠心肌细胞膜Na+ -K+ATPase、Ca2+ -Mg2+ATPase活性及膜含量 ()组 别 n 剂 量 Ca2+ -Mg2+ATPase Na+ -K+ATPase ( mmol.g-1Pro-1) (mol-1Pro) (mol-1Pro)空白对照组 10 10ml/Kg 36.323.53* 28.254.12* 5.310.43*假手术组 8 10ml/Kg 34.513.35* 27.244.01* 5.790.37*模型组 7 10ml/Kg
20、 23 .333. 61 23. 354 .31 9. 030. 53参桂胶囊组 7 30g生药/Kg 30. 683. 45* 25.833.57* 7.530.52*7 15g生药/Kg 29. 663. 37 * 24.133.34 7.460.52* 7 7.5g生药/Kg 26.483.31 * 23.403.25 8.690.74开搏通组 8 5mg/Kg 32.584 .13 * 26.233 73* 8.250.41* 注:与模型组相比,*P0.05,*P0.01 22参桂胶囊对心功能不全大鼠心肌线粒体Ca2+ 、Na+ 、Mg2+含量的影响,见表2。表2 各组大鼠心肌线粒体C
21、a2+ 、Na+ 、Mg2+含量()组 别 n 剂 量 Ca2+ Na+ Mg2+ (gmg-1) (gmg-1) (gmg-1)空白对照组 10 10ml/Kg 5.281.25* 21.844.25* 17.383.35*假手术组 8 10ml/Kg 5.391.26* 21.014.33* 17.763.38*模型组 7 10ml/Kg 6.770.55 29.575.86 11.852.68参桂胶囊组 7 30g生药/Kg 5.910.96* 25.264.36* 15.594.19*7 15g生药/Kg 5.910.95* 25.774.33* 15.374.23 * 7 7.5g生
22、药/Kg 6.150.93 26.264.56* 13.954.21*开搏通组 8 5mg/Kg 5.350.87* 23.293.83* 16.233.79*注:与模型组相比,*P0.05,*P0.05,*P0.0522参桂胶囊对心功能不全大鼠心肌组织乳酸(LD)代谢的影响,见表1。表2. 各组大鼠心肌组织LD 含量 ()组 别 n 剂 量 LD含量(mmolg-1prot) 空白对照组 10 10ml/Kg 0.1280.025* 假手术组 8 10ml/Kg 0.1330.027* #模型组 7 10ml/Kg 0.8440.051参桂胶囊组 7 30g生药/Kg 0.2810.035*
23、 #7 15g生药/Kg 0.3070.039* # 7 7.5g生药/Kg 0.3890.039* #开搏通组 8 5mg/Kg 0.2920.031* #注:与模型组比* P0.05,*P0.01;与正常组比# P0.053.讨论:能量代谢是心肌各种代谢中至关重要的代谢过程,心脏许多重要活动,如:机械活动、电活动等都有赖于不断的能量供应。一旦发生心肌缺血,心肌最重要、最显著的代谢变化也是能量代谢。能量供应不足是心肌缺血引起的心源性休克、心力衰竭等的病理生理学基础之一。因此,改善能量代谢是心肌缺血防治的重要环节之一。缺血涉及的肌纤维收缩性降低,部分是由于心肌组织酸中毒,此外酸中毒又可直接损害
24、心肌细胞超微结构,因此,改善心肌组织酸中毒也是防治心功能不全的措施之一。本研究结果发现,参桂胶囊不仅能够明显改善心功能不全心肌组织能量代谢,而且能够降低心肌组织乳酸含量,因此,参桂胶囊具有一定防治心功能不全的作用。参桂胶囊对心肌梗死后心功能不全大鼠心肌损伤影响的研究刘颖,徐慧,缪宇,张颖,殷惠军,蒋跃绒(中国中医研究院西苑医院心血管病研究室,北京,100091)1.材料与方法1.1 实验材料1.1.1实验动物:选用健康Wistar大鼠(180-220g)70只,雄性。由中国科学院动物研究所提供,合格证号:京动许字,2000-013-058。1.1.2实验药物:参桂胶囊由(加拿大)上海玉丹药业公
25、司提供,产品批号:20030801,规格:0.3g/粒。1.2 实验方法1.2.1 动物模型建立与分组:大鼠乙醚麻醉,然后经左边第四肋间剪开皮肤,钝性分离肌肉组织,打开胸腔,剪开心包膜,挤压出心脏,在左心耳与肺动脉圆锥之间穿线,结扎左冠状动脉前降支(于分支起点处约1-2mm)造成AMI模型,然后迅速将心脏放回胸腔,随即缝合胸腔及皮肤。假手术组除不结扎冠状动脉外,其余操作与AMI模型组动物相同。术后给予青霉素4万单位,并记录标准肢导联导(纸速50/s)心电图,ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后,大鼠随机分为7组:即正常对照组10只,常规饲养;模型对照组10只,常规饲养;假手术组10只:常规饲养;阳性药开搏通对照组10只,5mg/Kg/d开搏通溶液;参桂胶囊大剂量组10只,参桂胶囊1.8g/Kg/d;参桂胶囊中剂量组10只,参桂胶囊0.9g/Kg/d;参桂胶囊小剂量组10只,参桂胶囊0.45g/Kg/d。术后第二天,开始灌胃给药,连续8周。1.2.2光镜观察石蜡切片厚度5um,二甲苯脱蜡,常规HE染色,树脂封片。2结果见附图:3结论:参桂胶囊能够抑制心功能不全心肌损伤具有一定防治作用,其中中、高剂量较为明显。
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