生物仪器分析原理与方法绪论.ppt

生命科学学院微生物学教研室YJH,生物仪器分析原理与方法,生命科学学院微生物学教研室 杨继红,生命科学学院微生物学教研室YJH,生物分析仪器原理与方法教学介绍,一、教学内容二、授课方式三、学习参考资料四、考试及成绩计算,生命科学学院微生物学教研室YJH,一、教学内容,绪论第1章 PCR及荧光定量PCR第2章 凝胶成像设备第3章 近红外成像设备第4章 紫外交联仪和杂交炉第5章 电转化仪和电融合仪第6章 洗板机和酶标仪第7章 离心机和离心技术第8章 荧光显微镜技术,第9章 分光光度计第10章 气相色谱第11章 液相色谱第12章 IKTA纯化系统第13章 双向电泳第14章 变性梯度凝胶电泳第15章 毛细管电泳第16章 超净工作台与生物安全柜,生命科学学院微生物学教研室YJH,二、授课方式,课堂教学讲授内容以教材为主；授课采用PowerPoint课件；课堂提问、小测验、期末考试（闭卷）；仪器操作课外辅导个别交谈电话E-mail,生命科学学院微生物学教研室YJH,三、学习参考资料,现代生物科学仪器分析入门，徐金森主编，化学工业出版社，2004。现代生物化学与分子生物学仪器与设备，雷东风编著，科学出版社，2006。生命科学仪器使用技术教程，滕利荣，孟庆繁主编，科学出版社，2008。离心分离，金绿松，林元喜主编，化学工业出版社，2008。生物化学仪器分析与实验技术，周先碗，胡晓倩编，化学工业出版社，2003。现代仪器分析在生物医学研究中的应用，钱小红，谢剑炜主编，化学工业出版社。生物化学仪器分析基础，曹成喜主编，化学工业出版社，2008。,生命科学学院微生物学教研室YJH,四、考试及成绩计算,考试：闭卷或开卷期末考试：时间在课程结束后成绩计算 总成绩=期末70%+平时30%平时成绩考勤平时小测验：提问：当面提问、网上提问，科学问题,生命科学学院微生物学教研室YJH,绪 论,一、科学仪器的重要作用二、仪器分析简介三、定量分析方法的评价指标四、痕量分析与微量分析五、生物学仪器简述,生命科学学院微生物学教研室YJH,科学仪器是科学研究取得突破性、革命性进展的先决条件。,以交通工具的发展变化为例,横向改进（从车体入手，运输能力产生量的改进）,马车,纵向飞跃（从动力入手，运输能力产生质的飞跃）,生命科学学院微生物学教研室YJH,一、科学仪器的重要作用,科学技术是第一生产力，科学仪器是第一生产力的三要素之一，在科学技术创新事业以及在促进社会生产力的发展中起着带头作用、主导作用，是发展社会生产力的排头兵。,科学仪器对科技创新、国民经济发展、国防建设和小康社会建设都具有重要的支撑和推动作用。科技部副部长刘燕华,从科学实验的精密测试分析，到人体健康、食品、环境的诊断探测，从航空、航天、海洋与各种极端条件的探测，到院子、分子、纳米等围观水平的测试，从武器装备到反恐、国家安全领域等，都离不开科学仪器的应用。中国科学院杜祥琬副院长,生命科学学院微生物学教研室YJH,1、科学仪器促进科学技术的发展,科学上的发现和技术上的发明是从对事物的观察开始的：对事物的精细观察就要借助于科学仪器，特别是在自然科学和工业生产领域更是如此。在对事物的观察、测试基础上经过分析推导，形成认识。到这一阶段还只能是假说、学说。实践是检验真理的唯一标准，只有在经过测试和考核，才能真正形成科学，所以说在科学发展的哪一阶段都离不开测试。国家中长期科学技术发展规划指出，仪器仪表和测试是新技术革命的先导和基础。,生命科学学院微生物学教研室YJH,1、科学仪器促进科学技术的发展,科学是从测量开始的，没有测量就没有科学，至少是没有精确的科学、真正的科学。化学家、计量学家门德列耶夫,仪器是认识世界的工具；科学是用斗量禾的学问。用斗去量禾就对事物有了深入的了解、精确的了解，就形成科学。我国“两弹一星”元勋王大珩院士,Nothing begets good science like development of a good instrument（发展一种好的仪器对于一门好科学的贡献超过了任何其他事情）。英国著名科学家H.Pavy,现代科学的进步越来越依靠仪器的发展。,生命科学学院微生物学教研室YJH,1、科学仪器促进科学技术的发展,New directions in science are launched by new tools much more than by new concepts.The effect of a concept-driven revolution is to explain old things in new ways.The effect of a tool-driven revolution is to discover new things that have to be explained（由新工具开创的科学新方向远比由新概念开创的科学新方向要多得多。由概念驱动的革命的影响是用新概念去阐明旧事物。而由工具驱动的革命的影响是去发现需要阐明的新事物）美国能源部杰出科学家R.F.Hirsch博士,生命科学学院微生物学教研室YJH,1、科学仪器促进科学技术的发展,科学发展史一再证明，许多重要的科学分支的确立和发展归功于重要的科学仪器装置的研制成功。极谱仪的发明产生了极谱学，色谱仪的发明产生了色谱学，光谱仪的发明产生了光谱学，质谱仪的发明产生了质谱学，没有哈勃望远镜就难以进行天体科学的研究，天体科学上的许多重大发现都是依靠哈勃望远镜的观测而得到的。扫描隧道显微镜的发明对纳米科技的兴起和发展可以说起到决定性作用,生命科学学院微生物学教研室YJH,科学的进步在很大程度是被科学仪器的发明所推动的。,科学仪器是开展科学研究和实现发明创造的必要手段。,生命科学学院微生物学教研室YJH,1、科学仪器促进科学技术的发展,据统计，20世纪授予的诺贝尔奖项目中，物理学科项目的68.4、化学学科项目的74.6%、生物医学学科项目的90都直接与实验有关或本身就是实验项目，这些实验都是借助各种先进仪器完成的。从20世纪初到现在，诺贝尔奖颁发给仪器发明、发展与相关的实验项目达27项之多。,生命科学学院微生物学教研室YJH,生命科学学院微生物学教研室YJH,2、科学仪器是经济发展的推动力倍增器,美国商务部在1992年公布过调查结果：美国仪器仪表产业的产值只占美国社会总产值的4，而由于仪器仪表事业的发展拉动的相关经济部门的产值达到社会总产值的66！仅仅在美国，每天就用各种分析仪器完成2.5亿次分析检测工作，美国每年仅用于分析测试的费用就高达500亿美元！,生命科学学院微生物学教研室YJH,3、科学仪器是可持续发展的保证和指路标,20世纪后期，由于科学仪器科技和产业（主要是分析仪器）的发展，人类突然感觉到了环境污染对人类社会和经济可持续发展的重大意义和严重影响。发觉了大气层臭氧空洞的产生、发展及其危害以及厄尔尼诺现象、温室效应、热带雨林破坏等等生态平衡问题的产生、发展及其危害发现和监测所有这一切危及人类社会和经济可持续发展甚至人类本身生育、遗传、疾病、生存基础的大问题，都是直接依靠现代分析检测科技和现代科学仪器（分析仪器）的发展和广泛应用。,生命科学学院微生物学教研室YJH,4、科学仪器是打破贸易壁垒的强有力工具,我国已加入WTO，世界各国关税壁垒这一老武器已被种种“技术壁垒”、“绿色壁垒”所取代，“农药残留指标”、“重金属元素指标”、“抗生素残留”等理由使我国传统大宗出口禽蛋肉产品、粮食及食品，甚至蔬菜、蜂蜜、茶叶屡屡被欧、美、日等国市场拒之门外，除了种种或明或暗的政治、经济原因，重要的原因之一是我国现代分析检测技术和高灵敏度分析仪器水平落后！,生命科学学院微生物学教研室YJH,5、科学仪器是确保国家安全的利剑,近年来超级霸权国家横行世界的国际政治态势发展，也有分析检测（包括控制）科技和仪器发展基础和水平的因素。依仗其精确检测、控制技术和仪器鹤立鸡群的高度发展水平，超级霸权主义者到处挥舞其“灵巧炸弹”、“精确打击”、“反导系统”，在“零伤亡战争”的庇护下横行全球。,生命科学学院微生物学教研室YJH,6、科学仪器是打击犯罪的有力手段,弥漫全球的贩毒、吸毒恶浪、假冒伪劣产品、金融欺诈等等已成为当今国际社会的毒瘤，也急需更先进的检毒侦查技术和仪器、快速可靠的质检技术和相应的分析检测仪器。,生命科学学院微生物学教研室YJH,7、科学仪器是开展生命科学研究的支撑,医学正在经历一个由经验、技艺变为科学的过程，要把医学由经验、技艺变为科学，要依靠仪器仪表，要依靠测试。仪器与测试技术是了解人体和生物生命机理和探测疾患的主要手段。没有良好的测试手段，包括各种植入人体内部的传感器，是不可能洞察人体和生物的奥秘的。对于祖国传统医学中医学、中草药更是如此。中医学、中草药积累了多少代人的心血和经验，是人类宝贵的文化遗产。中医学关于将人作为一个整体的见地，有关如经络、针灸、号脉等的学说与实践都是非常珍贵的，但也存在怎样将它们由经验、技艺变为科学并进一步深化、扩大的问题，而所有这一切都靠测试，靠仪器仪表。,生命科学学院微生物学教研室YJH,X射线衍射技术促进DNA双螺旋结构发现,生命科学学院微生物学教研室YJH,X射线衍射技术促进DNA双螺旋结构发现,生命科学学院微生物学教研室YJH,PCR技术使基因克隆简便易行,Mullis在1983年春天的一个周五晚上，他开车带着女友前往乡间的小屋度周末。在蜿蜒的乡间公路上开着车，一段DNA反复复制的景像，在他的脑海里冒了出来。,生命科学学院微生物学教研室YJH,东南大学附属中大医院的毛曦教授从事发育生物学教学、科研二十余年，在国内外的资料上从未看到过脑干细胞诱导分化出的神经细胞末梢突出物的形貌，世界各类文献上该细胞末梢突出物的示图均是手工绘制的。,分析测试中心电镜室王克宇同志为毛教授观测到了大鼠神经细胞末梢突出物的形貌。毛教授非常欣喜，称这是一项重大发现，是世界上第一张该细胞的形貌照片，对细胞、神经学等方面的研究有重大意义，他们不久将发表具有这一重大突破的成果，在世界范围公开该细胞形貌照片。,生命科学学院微生物学教研室YJH,科学仪器使人类基因组计划提速,人类基因组计划与曼哈顿原子弹计划、阿波罗登月计划并称科学史上三大计划。人类基因组由大约30亿碱基对组成，分布在23对染色体上，大约含6万多个基因。人类基因组测序方法及其效率,生命科学学院微生物学教研室YJH,第二节 仪器分析简介,一 仪器分析和分析化学1、什么是仪器分析？仪器分析是指采用比较复杂或特殊的仪器设备，通过测量物质的某些物理或物理化学性质的参数及其变化来获取物质的化学组成、成分含量及化学结构等信息的一类方法。这些方法一般都有独立的方法原理及理论基础。,生命科学学院微生物学教研室YJH,2、分析化学化学分析、仪器分析,分析化学是研究物质的组成、状态和结构的科学，它包括化学分析和仪器分析两大部分。化学分析是指利用化学反应和它的计量关系来确定被测物质的组成和含量的一类分析方法。测定时需使用化学试剂、天平和一些玻璃器皿。仪器分析是以物质的物理和物理化学性质为基础 建立起来的一种分析方法，测定时，常常需要使用比较复杂的仪器。仪器分析的产生为分析化学带来革命性的变化，仪器分析是分析化学的发展方向。,生命科学学院微生物学教研室YJH,3、仪器分析的特点（与化学分析比较）,灵敏度高，检出限量可降低。如样品用量由化学分析的mL、mg级降低到仪器分析的g、L级，甚至更低。适合于微量、痕量和超痕量成分的测定。选择性好。很多的仪器分析方法可以通过选择或调整测定的条件，使共存的组分测定时，相互间不产生干扰。操作简便，分析速度快，容易实现自动化。相对误差较大。化学分析一般可用于常量和高含量成分分析，准确度较高，误差小于千分之几。多数仪器分析相对误差较大，一般为5%，不适用于常量和高含量成分分析。需要价格比较昂贵的专用仪器。,生命科学学院微生物学教研室YJH,表1.1 常量分析、半微量和微量分析,生命科学学院微生物学教研室YJH,4、仪器分析与化学分析关系,仪器分析与化学分析的区别不是绝对的，仪器分析是在化学分析基础上的发展。少仪器分析方法的原理，涉及到有关化学分析的基本理论；不少仪器分析方法，还必须与试样处理、分离及掩蔽等化学分析手段相结合，才能完成分析的全过程。仪器分析有时还需要采用化学富集的方法提高灵敏度；有些仪器分析方法，如分光光度分析法，由于涉及大量的有机试剂和配合物化学等理论，所以在不少书籍中，把它列入化学分析。,生命科学学院微生物学教研室YJH,二 仪器分析的方法,1、光学分析法凡是以电磁辐射为测量信号的分析方法均为光学分析法。可分为光谱法和非光谱法。光谱法则是以光的吸收，发射和拉曼散射等作用而建立的光谱方法。这类方法比较多，是主要的光分析方法。非光谱法是指那些不以光的波长为特征的信号，仅通过测量电磁幅射的某些基本性质（反射，折射，干涉，衍射，偏振等）。,生命科学学院微生物学教研室YJH,2、电分析化学方法,电化学分析法是根据物质在溶液中的电化学性质建立的一类分析方法。以电讯号作为计量关系的一类方法，主要有五大类:电导法电位法电解法库仑法伏安法极谱法,生命科学学院微生物学教研室YJH,3、色谱法,色谱法是以物质在两相(流动相和固定相)中分配比的差异而进行分离和分析的方法。主要有：气相色谱法液相色谱法,生命科学学院微生物学教研室YJH,4、其它仪器分析方法,质谱：根据物质带电粒子的质荷比在电磁场作用下进行定性、定量和结构分析的方法。热分析：依据物质的质量、体积、热导、反应热等性质与温度之间的动态关系来进行分析的方法是热差分析法。放射分析：依据物质的放射性辐射来进行分析的方法同位素稀释法，中子活化分析法。,生命科学学院微生物学教研室YJH,三、仪器分析的发展概况,仪器分析的三次巨大变革第一次变革：20世纪初，分析天平的发明,借助于物理化学溶液溶液理论的发展（四大平衡的建立）。第二次变革：20世纪40年代以后，物理电子的发展，各种仪器分析方法相继建立。第三次变革：现在现代科学技术和生产的发展，计算机的使用，尤其微型计算机的发展，给仪器分析带来全新的革命。,生命科学学院微生物学教研室YJH,20世纪4050年代兴起的材料科学，6070年代发展起来的环境科学都促进了分析化学学科的发展。80年代以来，生命科学的发展也促进分析化学一次巨大的发展。仪器分析是分析化学的重要组成部分，也随之不断发展，不断地更新自己，为科学技术提供更准确、更灵敏、专一、快速、简便的分析方法。如生命科学研究的进展，需要对多肽、蛋白质、核酸等生物大分子进行分析，对生物药物分析，对超微量生物活性物质，如单个细胞内神经传递物质的分析以及对生物活体进行分析。,1.仪器分析的发展,生命科学学院微生物学教研室YJH,信息时代的到来，给仪器分析带来了新的发展。计算机与分析仪器的结合，出现了分析仪器的智能化，加快了数据处理的速度。它使许多以往难以完成的任务，如实验室的自动化，图谱的快速检索，复杂的数学统计可轻而易举得于完成。信息的采集和变换主要依赖于各类的传感器。这又带动仪器分析中传感器的发展，出现了光导纤维的化学传感器和各种生物传感器。,生命科学学院微生物学教研室YJH,联用分析技术已成为当前仪器分析的重要发展方向。将几种方法结合起来，特别是分离方法（如色谱法）和检测方法（红外光谱法、质谱法、核磁共振波谱法、原子吸收光谱法等）的结合，汇集了各自的优点，弥补了各自的不足，可以更好地完成试样的分析任务。联用分析技术：气相色谱质谱法（GCMS）气相色谱质谱法质谱法（GCMSMS）气相色谱原子发射光谱法（GCAED）液相色谱质谱法（HPLCMS）,生命科学学院微生物学教研室YJH,2.前景展望,(1)生命科学研究对分析化学提出高的要求活体分析，单细胞分析，基因分析，及药物的检测等(2)环境监测及控制自动化 智能化 微型化,生命科学学院微生物学教研室YJH,四 怎样学习仪器分析,1.理论与实际相结合,2.掌握仪器的使用、原理、特殊性,生命科学学院微生物学教研室YJH,一、标准曲线,标准曲线是被测物质的浓度或含量与仪器响应信号的关系曲线。线性范围 标准曲线的直线部分所对应的被测物质浓度（或含量）的范围。特点：选择分析方法应有较宽的线性范围。,第二节 定量分析方法的评价指标,生命科学学院微生物学教研室YJH,标准曲线的绘制,标准曲线是依据标准系列(或含量)和其相应的响应信号测量值来绘制的。一元线性回归法 y=a+bxb 为回归系数即斜率 a 为截距,生命科学学院微生物学教研室YJH,相关系数r,在分析化学上，相关系数是用来表征被测物质的浓度（或含量）x与其响应信号值y之间线性关系好坏程度的一个统计参数。,当|r|=1时，y与x之间存在着严格的线形关系。|r|越接近1,则y与x 之间的线形关系就越好。,生命科学学院微生物学教研室YJH,二、灵敏度,物质单位浓度或单位质量的变化引起响应信号值变化的程度，称为方法的灵敏度，用 S 表示。,灵敏度也就是标准曲线的斜率，斜率越大，方法的灵敏度就越高。,生命科学学院微生物学教研室YJH,三、精密度,精密度是指使用同一方法，对同一试样进行多次测定所得测定结果的一致程度。精密度常用测定结果得标准偏差 s 或相对标准偏差（sr）量度。,生命科学学院微生物学教研室YJH,四、准确度,试样含量的测定值与试样含量的真实值(或标准值)相符合的程度称为准确度。准确度常用相对误差量度。,五、检出限,某一方法在给定的置信水平上可以检出被测物质的最小质量，称为这种方法对该物质的检出限，以浓度表示的称为相对检出限，以质量表示的称为绝对检出限。,生命科学学院微生物学教研室YJH,对于光学分析法，可以与空白信号区别的最小信号XL由下式确定：,式中：,为 白信号的平均值；sb为空白信号的指标偏差；k为根据一定的置信水平确定的系数，IUPAC（国际纯粹与应用化学联合会）建议 k 值取3。能产生净响应信号为的被测物质的浓度或质量就是方法对该物质的检出限，用 D 表示。,生命科学学院微生物学教研室YJH,方法的灵敏度越高，精密度越好，检出限就越底。检出限是方法灵敏度和精密度的综合指标，它是评价仪器性能及分析方法的主要技术指标。,生命科学学院微生物学教研室YJH,13 痕量分析与微量分析,20世纪70年代以前，把待测物含量在1ppm以下叫做痕量分析。20世纪70年代以后，把待测物含量在1ppb以下叫做微量分析。痕量分析是指含量而言，对象是待测物含量的多少。现代分析技术可以达到10_12，10_15。10_18（mol/l 或 g/g），甚至可以测定单个分子，单个原子，单个细胞。,生命科学学院微生物学教研室YJH,13 痕量分析与微量分析,微量分析是对取样量而言，不是指含量。过去指对固体取样量在1mg以下；现代分析化学规定：固体取样量在10g以下;液体取样量在10l 以下，叫微量分析。但微量分析对待测物含量没有规定。同样是微量分析，含量可以是100%，99%，也可以是10_6或10_9级。,生命科学学院微生物学教研室YJH,13 痕量分析与微量分析,如对金属Cu，同样是微量分析，可以测定Cu的含量，也可以测定Cu里的杂质。在现代分析化学中，微量分析取样量愈来愈少，像微量分析。在美国，血液分析只允许取一滴血，化验出20多种成分，分析时间在3min左右，现在有些分析取样只取一个细胞，分析10种成分以上，有些分析取样只取一个细胞核。取样量只取一个细胞，一个细胞核，对于发展生命科学，生物科学，癌科学十分有意义。,生命科学学院微生物学教研室YJH,13 痕量分析与微量分析,经常用到的质量单位：毫克 10_3 g微克 10_6 g 纳克 10_9 g皮克 10_12 g飞克 10_15 g 阿克 10_18 g,