动物细胞融合与单克隆抗体(用).ppt

动物细胞工程,动物细胞融合与单克隆抗体,第 三 课 时,融合的原生质体AB,再生细胞壁,杂种细胞AB,杂种植株,脱分化,愈伤组织,再分化,原生质体B,原生质体A,去 壁,人工诱导,植物细胞A,植物细胞B,回顾植物体细胞杂交过程,去 壁,一、动物细胞融合,也称细胞杂交。是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。,1、概念：,动物细胞融合,细胞膜的流动性,4、原理：,3、诱导融合方法：,物理法:,化学法:,生物法：,灭活的病毒,离心、振动、电刺激,聚乙二醇（PEG）,2、过程：,思考与探究：P55T1,是否去细胞壁,为什么灭活的病毒能作为诱导剂？(P52)不灭活的病毒能作为诱导剂吗？,生物法：,灭活的病毒,丧失感染性,（不感染细胞）,保留融合活性,仙台病毒,紫外线,5、动物细胞融合技术的意义,打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。,动物细胞融合,二、单克隆抗体,1.抗体是由何种细胞产生的？.一个浆细胞能分泌多种抗体吗？.简述获得抗体的传统途径？.这种方法获得的抗体有什么缺陷？,思考,单克隆抗体,传统血清抗体的制备：,方法：向动物体内反复注射某种抗原，然后从动物血清中分离所需要的抗体。,特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏,传统血清抗体的制备的缺陷：,、单克隆抗体概念,由单个B淋巴细胞（浆细胞）经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，由这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。,那么，如何大量获得化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）,单克隆抗体的制备,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,杂种细胞,动物细胞培养技术,、设计思路：,动物细胞融合,单克隆抗体,既能产生专一的抗体，又能大量繁殖,单克隆抗体的制备,骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖,(杂交瘤细胞),体内或体外,3、单克隆抗体的制备,单克隆抗体的制备过程,特异性强灵敏度高,(两次筛选),既能产生专一的抗体，又能大量繁殖,单克隆抗体的制备,4、制备过程中：,1.注射抗原的目的是什么？2.诱导其融合的方法有哪些？3.融合后(两两融合)培养液中有几类细胞？4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点？5.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法?,单克隆抗体,5、单克隆抗体的应用：,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,