凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应.ppt

实验内容介绍：免疫学检测技术示教：单扩、双扩、火箭电泳操作：对流免疫电泳、玻片凝集报告：三张图、两实验原理及结果,一、抗原抗体反应的原理 1、基础：抗原决定基抗体的互补决定区 2、特点：抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可逆性 抗原抗体反应的可见性,二、抗原或抗体的检测方法凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、免疫标记技术,凝集反应概念：抗原+抗体 凝集团块直接凝集：颗粒性抗原+抗体 凝集团块 玻片法、试管法,间接凝集：可溶性抗原包被于载体+抗体 凝集团块反向间接凝集：抗体包被于载体+抗原 凝集团块协同凝集：抗体结合金葡菌SPA+抗原 凝集团块抗球蛋白试验：抗原+不完全抗体+抗球蛋白抗体 凝集团块,沉淀反应概念：可溶性抗原+抗体 沉淀物单向免疫扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）双向免疫扩散、对流免疫电泳：抗原分析、抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向）,单向免疫扩散单向免疫扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量,单向定量免疫电泳（火箭电泳）将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿，但需时较短。,双向免疫扩散在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分,对流免疫电泳,材料电泳仪缓冲液琼脂板1块/2人，打孔器2个/组，抗AFP血清 已知AbAFP阳性血清 阳性Ag对照阴性血清 阴性Ag待检血清：标本1 未知Ag 标本2 未知Ag,对流免疫电泳打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。加样：抗AFP血清加于抗体孔内；病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电20分钟。观察：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。玻片刮去琼脂后交到讲台方盘内。,对流免疫电泳,方法 打孔 加样 电泳20min,Ag,Ab,Ag,Ab,45mm,45mm,5mm,5mm,阴性,阳性,标1,阴性,标2,阳性,对流免疫电泳,结果判定:在相应抗原抗体孔之间可以白色沉淀线。*把琼脂片上的琼脂刮掉入杂物盆，玻片放在讲台前的盘子里,直接凝集反应玻片凝集,材料：玻片1张/1人，1号、2号菌液，诊断血清，接种环方法：取菌液34环，后加血清2环 轻摇玻片，12分钟后观察结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应*玻片扔在后面的玻片缸里,1号菌液诊断血清,2号菌液诊断血清,实验报告三张图：单扩、双扩、火箭电泳原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集（结果可用图示）,