《临床检验基础》PPT课件.ppt

,临床检验基础,第一章 血液一般检验,皖北卫生职业学院王玲玲,第一节 血液标本采集与处理,一,血液标本类型,二,血液标本抗凝剂与添加剂,三,血液标本采集,四,血液标本运送、保存与处理,1全血2血浆 主要用于化学和凝血项目检测等。3血清 主要用于化学和免疫学等项目检测。血清与血浆比较，主要是前者缺乏纤维蛋白原及某些凝血因子。4血细胞,静脉全血动脉全血末梢全血,一、血液标本类型,静脉全血动脉全血末梢全血,血液标本添加剂,抗凝剂,分离胶,促凝剂,二、血液标本抗凝剂与添加剂,我是血浆，还是血清呢？,抗凝：采用物理或化学的方法去除或抑制某种凝血因子的活性，以阻止血液凝固的方法称为抗凝。抗凝剂：能够阻止血液凝固的化学物质称为抗凝剂（anticoagulant）或抗凝物质。,（一）抗凝剂,血细胞,（一）抗凝剂,常 用 抗 凝 剂,（二）添加剂,其 它 常 用 添 加 剂,静脉采血法,皮肤采血法,动脉采血法,三、血液标本采集,（一）皮肤采血法,皮肤采血法，又称毛细血管采血法，主要用于需要微量血液检验项目和婴幼儿血常规检验。,1、采血针皮肤采血法（1）主要器材：一次性采血针、微量吸管、消毒用品等。,（一）皮肤采血法,（2）采血部位：一般采用手指指端或耳垂，婴幼儿可选择趾或足跟内外侧缘。世界卫生组织（WHO）推荐采血部位为左手中指或无名指指端内侧。选择皮肤完好处采血。,（一）皮肤采血法,材料准备,选择采血部位,按摩,消毒,针刺,吸血,止血,（一）皮肤采血法,（4）注意事项：采血时必须注意严格消毒和生物安全防范。采血针应为一次性使用的“专用采血针”，针刺深度以23mm为宜。取血时可稍加挤压，但切忌用力过大，以免使过多组织液混入血液中。采血要迅速，防止流出的血液发生凝固。手工法血液标本采集顺序为：血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数及白细胞分类计数、血型鉴定等。其他，激光皮肤采血法,（二）静脉采血法,静脉采血法临床应用广泛，所采集的静脉血能准确反映全身血液的真实情况，因其不易受气温和末梢循环变化的影响，更具有代表性。,普通采血法负压采血法,1、普通采血法 即传统的静脉采血方法。（1）主要器材：注射器、试管、消毒用品等。,普通采血法负压采血法,（二）静脉采血法,（2）采血部位：通常采用肘部静脉。当肘部静脉不明显时，可采用手背部、手腕部和外踝部静脉。幼儿可采用颈外静脉采血，其它：股静脉、大隐静脉及锁骨下静脉等。,肘部静脉,（二）静脉采血法,材料准备,（3）简要操作,选择静脉,扎压脉带,消毒,穿刺,抽血,止血,放血与混匀,（二）静脉采血法,（4）注意事项：根据检验项目判断所需采血量，选择注射器。严格执行无菌操作。采血时切忌将针栓往回推，以免注射器中的空气进入血循环形成气栓。为避免溶血，注射器和容器必须干燥，抽血时应避免产生大量气泡，抽血完毕后应先拔下针头，然后将血液沿管壁徐徐注入容器，需要抗凝时应与抗凝剂轻轻混匀，切忌用力振荡试管。进行血小板功能试验，为了防止血小板激活，须使用塑料注射器或经硅化处理后的玻璃试管或塑料试管。采血一般取坐位或卧位，不能立位采血，因为体位影响水分在血管内外的分布，影响被测血液成分的浓度。压脉带捆扎时间不应超过1分钟，否则会使血液成分浓度发生改变。,（二）静脉采血法,2、负压采血法 又称为真空采血法。（1）主要器材：负压采血系统 双向采血针 真空采血管,套管式一次性采血针,头皮静脉式一次性采血针,（2）采血部位：同普通采血法。,（二）静脉采血法,材料准备,（3）简要操作,选择静脉,扎压脉带,消毒,穿刺针端穿刺,混匀或不混匀血液,退出刺塞针端针头,刺塞针端刺入采血管,止血,退出穿刺针端针头,（二）静脉采血法,（4）注意事项：使用前切勿松动或拔除采血管的胶塞头盖。刺塞针端的乳胶套能防止拔除采血试管后继续流血污染周围环境，达到封闭采血防止污染环境的作用，因此不可取下乳胶套。采血完毕后，先拔下刺塞针端的采血试管，后拔穿刺针端。一次采血，使用玻璃采血管多管采集血液标本的分配顺序为：血培养管、无抗凝剂血清管、枸橼酸钠抗凝管、其他抗凝剂管；使用塑料采血管分配顺序：血培养管（黄色）、枸橼酸钠抗凝管（蓝色）、加或未加促凝剂或分离胶的血清管、加或未加分离胶的肝素管（绿色）、EDTA抗凝管（紫色）、加葡萄糖分解抑制剂管（灰色）。,（三）动脉采血法,1主要器材：2ml或5ml注射器（准备l000U/ml无菌肝素生理盐水溶液，以湿润注射器内腔、橡皮塞），或一次性动脉采血针、消毒用品等。2采血部位 多选用桡动脉（最方便）股动脉、肱动脉。3简要操作,桡动脉采血,（三）动脉采血法,4.注意事项：隔绝空气：用于血气分析的标本，采集后先立即封闭针头斜面，再混匀标本。立即送检：标本采集后应立即送检，否则应将标本置于26保存，但保存时间不应超过2小时。防止血肿：采血完毕，拔出针头后，用消毒干棉签用力按压采血处止血，以防形成血肿。,血液标本,预处理与保存,检验后保存与处理,运送,接受与拒收,四、血液标本运送、保存与处理,生物安全原则,唯一标识原则,及时运送原则,四、血液标本运送、保存与处理,抗凝标本凝固,（二）血液标本拒收,采集容器不当,标本污染、容器破损,申请单和标本标识不一致,采血量不足或错误,溶血,转运条件不当,抗凝剂使用错误,四、血液标本运送、保存与处理,预处理：血常规检测：室温存放 血浆：可通过离心抗凝血获得血浆；血清：对未含促凝剂或分离胶采血管的血液标本置于37孵育，待血液完全凝固后离心分离血清；含促凝剂或分离胶采血管的血液标本可直接离心分离血清；对于需要特定细胞的实验，应根据要求采用不同的细胞分离液 或分离技术分离细胞，同时尽量避免混入其他细胞。,四、血液标本运送、保存与处理,（三）血液标本预处理与保存,保存：1分离后标本 不能及时检验或需保留标本，一般应将标本置于4冰箱内保存。标本需保存至少1个月时，放置于-20冰箱内保存。标本需保存至少3个月时，分离后置于-70冰箱保存。标本存放时需要密封，以免水分挥发而使标本浓缩。标本应避免反复冻融。2立即送检标本 如血氨（密封送检）、红细胞沉降率、血气分析（密封送检）、酸性磷酸酶、乳酸等标本。,四、血液标本运送、保存与处理,四、血液标本运送、保存与处理,（四）血液标本检验后保存与处理,血液一般分析标本：室温24小时后处理，一般生化检验项目：4存放7天后处理，特殊检验项目：吸出血清或血浆-20冰箱内保存1个月以上。保存检验标本时应包括标本信息的保存，且与分离的血浆或血清标本相对应。保存原则是在有效的保存期内确保被检测物质不会发生明显改变。,检验后废弃的血液标本处理严格按照国家标准实验室生物安全通用要求（GB19489-2004），由专人负责处理，根据医疗废物管理条例规定使用专用的容器或袋子包装，由专人送到指定的地点集中处理。检验后废弃的血液标本一般由专门机构采用焚烧的办法处理。,处 理,保 存,（一）检验申请,（二）患者准备,五、血液标本采集、运送与保存质量保证,（三）标本采集,（四）标本运送,第二节 血涂片的制备与染色,一,血涂片制备,二,血涂片染色,第二节 血涂片的制备与染色,推片,载玻片,血液,将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）,一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号,李四,B 1 2 3,第二节 血涂片的制备与染色,良好血液涂片标准厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，血膜边缘要整齐，并留有一定的空隙。,引起血涂片分布不均的主要原因：推片边缘不整齐用力不均匀载片不清洁,第二节 血涂片的制备与染色,二、血涂片染色(一)瑞氏染色法(Wrights stain)1.瑞氏染料（复合染料）酸性染料伊红(E-)碱性染料亚甲蓝(M+，又名美蓝)美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)，甲醇的作用：溶解美蓝和伊红，解离为 M+和E-；脱水作用，固定细胞形态，增强染色效果,第二节 血涂片的制备与染色,第二节 血涂片的制备与染色,2 染色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。物理的吸附作用化学的亲和作用 嗜酸性颗粒碱性与酸性染料粉红色；细胞核蛋白酸性与碱性染料紫蓝色或蓝色；中性颗粒等电状态与伊红和美蓝染淡紫红色。,第二节 血涂片的制备与染色,勿冲洗再加瑞氏染色液5-8滴后将液和液充分混匀静置10分钟,直接流水冲洗3-5分钟（切勿先倒掉染液）,涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆盖整个血膜1分钟,3.pH值的影响 细胞各种成分均属蛋白质（两性电解质）,第二节 血涂片的制备与染色,第二节 血涂片的制备与染色,染色所用玻片必须清洁，无酸碱污染。配制瑞氏染液必须用优质甲醇。稀释染液必须用缓冲液。冲洗用水应近中性。新鲜配制的染料偏碱，须在室温贮存一定时间，贮存时间愈久，染色效果愈好。DeamGilliland 等采用吸光度比值 作为瑞氏染液的质量规格。,第三节 白细胞显微镜检查,一,白细胞计数,二,白细胞分类计数,三,白细胞形态检查,四,嗜酸性粒细胞计数,五,红斑狼疮细胞检查,血液,血浆,血细胞,红细胞,白细胞,血小板,第三节 白细胞显微镜检查,白细胞计数（white blood cell count）是指测定单位体积外周血中各种白细胞的总数。白细胞计数结果仅反映循环池中的细胞数量。,一、白细胞计数,1原理 白细胞显微镜计数法是将全血用稀酸溶液稀释一定倍数，使红细胞破坏后，充入改良牛鲍（Neubauer）计数板内，在普通光学显微镜下计数一定范围内的白细胞数，经换算求出每升血液内的白细胞总数。2白细胞稀释液 冰乙酸 破坏红细胞，且使白细胞核固定清晰 亚甲蓝或结晶紫 使白细胞核略着色，便于识别 蒸馏水,（一）方法,3器材,（1）改良牛鲍计数板（2）改良牛鲍计数板专用盖玻片（血盖片）（3）微量吸管（4）显微镜,一、白细胞计数,Neubauer计数盘（牛鲍氏计数盘）,盖玻片,液面高度为 0.1 mm,一、白细胞计数,大方格中方格小方格,每个大方格体积=1X1x0.1=0.1mm3=0.1 L,0.38ml稀释液 混匀 20ul血液 充池、静置 镜下计数、计算,一、白细胞计数,计数：用低倍镜计数四个大方格内的白细胞数（N）。计算：WBC/L=N/4 10 106 20=N/20 X 109/L,0.1L 1L 1L,稀释倍数,一、白细胞计数,1采血时间的影响 2计数误差（1）技术误差（technical errors）器材误差 采血与取血不当 稀释倍数不准 充池不当 白细胞计数不准确（2）固有误差（inherent errors）又叫计数域误差有核红细胞的影响校正公式：,（二）质量保证,x：校正前白细胞数y：在白细胞分类计数时，计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。,一、白细胞计数,例：校正前白细胞数为12109/L，在作白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个，则校正后白细胞数L=12109/L=8.6109/L,例：校正前白细胞数为12109/L，在作白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个，则校正后白细胞数L=12109/L=8.6109/L,一、白细胞计数,4经验控制 以血涂片中所见白细胞的多少粗略核对白细胞计数结果有无大的误差。表 血涂片白细胞密度与白细胞总数的关系,一、白细胞计数,（三）方法学评价 白细胞计数的方法学评价,一、白细胞计数,白细胞总数高于参考区间的上限称白细胞增多，低于参考区间的下限称白细胞减少。白细胞总数增多或减少主要受中性粒细胞数量的影响，其临床意义见白细胞分类计数。,（五）临床意义,（四）参考区间,成人：（3.59.5）109/L；儿童：（512）109/L；6个月2岁：（1112）109/L；新生儿：（1520）109/L,一、白细胞计数,二、白细胞分类计数,对各种白细胞分别计数，即白细胞分类计数（differential count，DC）。白细胞分类计数的方法有 显微镜分类计数法 血细胞分析仪分类计数法,（一）方法显微镜分类计数主要是将染色好的血涂片在油镜下根据白细胞形态学特征逐个分别计数（一般计数100200个白细胞），得出各种白细胞的相对比值或百分率，并注意观察其形态的变化。,1简要操作,二、白细胞分类计数,最佳观察部位：体 尾 交 界 处,头,体,尾,体尾交界,2报告方式（1）白细胞分类计数结果：以各种白细胞所占的比值或百分率表示，或者根据白细胞总数计算出各种白细胞的绝对值报告。（2）幼稚或异常白细胞：发现幼稚或异常白细胞，应计算在白细胞 分类比值或百分率中。（3）有核红细胞：血涂片中如见到有核红细胞，应逐个计数，但 不列入白细胞总数之内，而是报告分类计数100个白细胞的同时 见到的有核红细胞个数。（4）寄生虫：如发现疟原虫等应报告。（5）红细胞、血小板的形态：如有异常改变应报告。,二、白细胞分类计数,（二）方法学评价 白细胞分类计数方法学评价,二、白细胞分类计数,（三）参考区间 白细胞分类计数参考区间（成人）,注：本参考区间适用于静脉血的仪器检测方法。此参考区间来源于中华人民共和国卫生行业标准WS/T 405-2012。,二、白细胞分类计数,（四）临床意义,二者的临床意义基本一致。（1）中性粒细胞生理性增多：一天之内一般下午较上午高。剧烈运动、情绪激动、严寒、暴热。新生儿。妊娠5个月以上及分娩时。以上常为一过性增多吸烟者平均白细胞总数比不吸烟者高。,1.白细胞总数与中性粒细胞,二、白细胞分类计数,中性粒细胞病理性增高,严重的组织损伤大量血细胞破坏,急性感染,急性大出血,恶性肿瘤,急性中毒,白血病,（2）中性粒细胞病理性增高,二、白细胞分类计数,中性粒细胞病理性减少,某些血液病：如再生障碍性贫血,某些感染：伤寒、副伤寒沙门菌,慢性理化损伤,自身免疫性疾病：如系统性红斑狼疮,脾功能亢进,（3）中性粒细胞病理性减少,二、白细胞分类计数,1生理变化 白天较低，夜间较高，上午波动大，下午较恒定。2病理变化（1）嗜酸性粒细胞增多：超敏反应性疾病：如支气管哮喘、荨麻疹、过敏等。寄生虫病：如蛔虫、钩虫等。某些皮肤病：如银屑病、湿疹等。某些血液病：如慢性粒细胞白血病。某些恶性肿瘤，如霍奇金病。某些传染病：如猩红热。某些内分泌疾病，如脑垂体功能低下。,2.嗜酸性粒细胞,二、白细胞分类计数,2.病理变化（2）嗜酸性粒细胞减少：伤寒、副伤寒、大手术后。长期使用肾上腺皮质激素。3嗜酸性粒细胞计数的其它应用（1）观察急性传染病的预后。（2）观察大手术和烧伤病人的预后。（3）肾上腺皮质功能测定。,2.嗜酸性粒细胞,二、白细胞分类计数,（1）嗜碱性粒细胞增多慢性粒细胞性白血病：常伴嗜碱性粒细胞增多，可达10%或更多。嗜碱性粒细胞性白血病：嗜碱性粒细胞异常增多，可达20%以上，多为幼稚型。过敏性疾病：溃疡性结肠炎、超敏反应等。骨髓纤维化和某些转移癌。（2）嗜碱性粒细胞减少多无临床意义。,3.嗜碱性粒细胞,二、白细胞分类计数,（1）淋巴细胞病理性增多绝对增多：某些病毒或细菌所致的传染病，如风疹、流行性腮腺炎、传单等；某些慢性感染，如结核病恢复期也可见淋巴细胞增多，但白细胞总数多正常；急、慢性淋巴细胞性白血病淋巴细胞增多明显，且可导致白细胞总数增高。相对增多：再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等淋巴细胞百分率相对增高。（2）淋巴细胞减少主要见于长期接触放射线或应用肾上腺皮质激素之后，在急性化脓性感染时由于中性粒细胞明显增高可导致淋巴细胞相对减少。,4淋巴细胞,二、白细胞分类计数,（1）单核细胞增多 正常儿童单核细胞较成人稍高病理性增多见于：某些感染：如亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑热病、急性感染的恢复期、活动性肺结核等。某些血液病：单核细胞性白血病、粒缺恢复期、恶性组织细胞病、淋巴瘤及骨髓增生异常综合征（MDS）等。（2）单核细胞减少 意义不大。,5单核细胞,二、白细胞分类计数,胞体：1015m，圆形。胞核：分25叶，以3叶核为主。核染色质：粗糙，深紫红色。胞浆：粉红色，颗粒量多、细小、均匀、紫红色。,三、白细胞形态检查（一）外周血正常白细胞形态,1.中性分叶核粒细胞,胞体：1015m，圆形。胞核：弯曲呈杆状、带状、腊肠样。核染色质：粗糙，深紫红色。胞浆：粉红色，颗粒量多、细小、均匀、紫红色。,2.中性杆状核粒细胞,三、白细胞形态检查（一）外周血正常白细胞形态,三、白细胞形态检查（一）外周血正常白细胞形态,中性粒细胞,(1)胞体：1315m，圆形。(2)胞核：多分为两叶。(3)核染色质：粗糙，深紫红色。(4)胞浆：着色不清，橘黄色颗粒、粗大、整齐排列、均匀充满胞质。,3.嗜酸性粒细胞,三、白细胞形态检查,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,三、白细胞形态检查,(1)胞体：1012m，圆形。(2)胞核：因颗粒遮盖而胞核不清晰。(3)核染色质：粗糙，深紫红色。(4)胞浆：着色不清，紫黑色颗粒、量少、大小不均、排列杂乱、可盖于核上。,4.嗜碱性粒细胞,三、白细胞形态检查,胞体：615m，圆形或椭圆形。胞核：圆形、椭圆形、肾形。核染色质：深紫红色，粗糙成块，核外缘光滑。胞浆：透明、淡蓝色、多无颗粒，大淋巴细胞可有少量粗大、不均匀紫红色颗粒。,5.淋巴细胞,大淋巴细胞,小淋巴细胞,三、白细胞形态检查,都是什么细胞？,三、白细胞形态检查,6.单核细胞,胞体：1220m，圆形、椭圆形或不规则形。胞核：肾形、山字形、马蹄形、扭曲折叠不规则形。核染色质：疏松网状，淡紫红色，有膨胀和立体起伏感。胞浆：半透明、灰蓝色或灰红色。颗粒细小、尘土样紫红色。,三、白细胞形态检查,三、白细胞形态检查（二）外周血异常白细胞形态,1.中性粒细胞的毒性变化在严重传染病、各种化脓性感染、败血症、恶性肿瘤、中毒、大面积烧伤等病理情况下，中性粒细胞可发生下列形态改变,大小不均,中毒颗粒,空泡,杜勒体,核变性,即中性粒细胞体积大小悬殊。可能是在内毒素等因素作用下骨髓内幼稚中性粒细胞发生不规则分裂的结果。常见于一些病程较长的化脓性感染。,（1）大小不均,三、白细胞形态检查,中性粒细胞胞质中出现的粗大、大小不等、分布不均匀的紫黑色或深紫褐色颗粒，称中毒颗粒。可能因特殊颗粒生成受阻或发生颗粒变性所致。常见于严重化脓性感染及大面积烧伤等。,（2）中毒颗粒,三、白细胞形态检查,中性粒细胞胞质内出现一个或数个空泡。一般认为空泡是细胞受损后胞质发生脂肪变性或颗粒缺失的结果。最常见于严重感染，特别是败血症时。,（3）空泡变性,三、白细胞形态检查,是中性粒细胞胞质毒性变化而保留的局部嗜碱性区域。呈圆形、梨形或云雾状，天蓝色或灰蓝色，直径12m，是胞质局部不成熟的表现。,（4）杜勒体,杜勒体,三、白细胞形态检查,（5）核变性,常见于细胞衰老后，严重感染时该类细胞增多。,三、白细胞形态检查,2.中性粒细胞的核象变化中性粒细胞的核形标志着它的发育阶段。正常以23叶为主。病理情况下，中性粒细胞的核象可发生变化，即出现核左移或核右移。,三、白细胞形态检查,外周血中杆状核粒细胞增多并出现晚幼粒、中幼粒甚至早幼粒细胞时称为核左移.核左移常伴中毒颗粒、空泡、核变性等毒性变化。最常见于急性化脓性感染，急性中毒、急性溶血。再生性核左移 伴白细胞增高 退行性核左移 白细胞总数不增高或减低 轻度核左移：仅见杆状核粒细胞6%。中度核左移：杆状核粒细胞10%并有少数晚幼粒、中幼粒细胞。重度核左移（类白血病反应）：杆状核粒细胞25%，出现更幼稚的粒细胞,（1）核左移,三、白细胞形态检查,（2）核右移,外周血中5叶核及5叶核以上的中性粒细胞3%时称为核右移。核右移常伴有白细胞总数的减少，属造血功能衰退的表现。主要见于营养性巨幼细胞性贫血及恶性贫血、炎症的恢复期。如疾病进展期突然出现核右移则是预后不良的表现。,巨多分叶核中性粒细胞,三、白细胞形态检查,在病毒或过敏原等因素刺激下，外周血淋巴细胞增生并发生形态上的改变，称异型淋巴细胞。,3淋巴细胞的形态异常,型（空泡型）,型（不规则型）,型（幼稚型）,（1）异型淋巴细胞,正常人血片中可偶见此种细胞。一般病毒感染异型淋巴细胞5%，而传染性单核细胞增多症时异型淋巴细胞常10%。,三、白细胞形态检查,即在淋巴细胞的主核旁边另有一个游离的小核。常见于接受较大剂量的电离辐射之后或其他理化因子、抗癌药物等对细胞造成损伤时，常作为致畸、致突变的客观指标之一。,（2）卫星核淋巴细胞,卫星核,三、白细胞形态检查,4其他异常白细胞,Pelger-Het畸形,棒状小体,Chediak-Higashi畸形,三、白细胞形态检查,四、嗜酸性粒细胞计数,显微镜计数原理 用适当的稀释液将血液稀释一定倍数，破坏大部分红细胞和其它白细胞，并使嗜酸性粒细胞染色，混匀后充入计数池内，计数一定体积内嗜酸性粒细胞数，即可算出每升血液中嗜酸性粒细胞的数量。,简要操作 加稀释液0.38ml采血取血20l，混匀稀释充上、下两个计数池静置低倍镜下计数四角和中央共10个大方格内的嗜酸性粒细胞计算。,五、红斑狼疮细胞检查（一）方法,系统性红斑狼疮（SLE）是一种原因不明，累及多个系统和器官的自身免疫性疾病。90的病例为女性，尤其是育龄期妇女。,1原理 系统性红斑狼疮患者的血清中，存在一种红斑狼疮因子（LE因子）。它属于一种IgG型自身抗体（抗核抗体），在体外可使白细胞退化，导致细胞核染色质失去正常结构，变成游离肿胀的圆形或椭圆形烟雾状的均匀性物质，称为“游离均匀体”；均匀体可吸引吞噬细胞（常为中性粒细胞）在其周围形成“花形细胞簇”；最后被其中一个吞噬细胞吞噬形成LE细胞。,2简要操作,采集静脉血3ml，待其凝固,搅碎血凝块，去除残余凝块,离心，使白细胞聚集在同一层面,孵育，去除白细胞层，离心,涂片、瑞-吉染色,油镜下找LE细胞,LE细胞,五、红斑狼疮细胞检查,（二）参考区间 阴性。（三）临床意义系统性红斑狼疮病人，在疾病的活动期，LE细胞阳性率一般为70%90%，缓解期或激素治疗后不易找到。除系统性红斑狼疮外，其它的自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、硬皮病、活动性肝炎等亦可呈阳性反应。发现LE细胞，必须结合临床表现；未找到LE细胞，并不能完全否定红斑性狼疮的诊断，应进一步作其它有关 的免疫学指标检查。,五、红斑狼疮细胞检查,第四节 红细胞检查,一,红细胞计数,二,血红蛋白测定,三,红细胞形态检查,四,血细胞比容测定,五,红细胞平均值,六,网织红细胞计数,七,嗜碱性点彩红细胞计数,八,红细胞沉降率测定,主要内容,概述,红细胞的发育过程,造血干细胞,红系祖细胞,原始红细胞,早幼红细胞,中幼红细胞,晚幼红细胞,网织红细胞,成熟红细胞,网织红细胞成熟48小时，红细胞存活月120天,第四节 红细胞检查,红细胞计数（red blood cell count，RBC）即测定单位体积外周血液中红细胞的数量，是诊断贫血等疾病最常用的检查项目之一。临床可通过各项红细胞参数检验和红细胞的形态观察对贫血和某些疾病进行诊断和鉴别诊断。,一、红细胞计数,（一）显微镜计数法,（1）Hayem稀释液：由NaCl、Na2SO4、HgCl2和蒸馏水组成。其中NaCl和Na2SO4调节渗透压，后者还可提高比重防止细胞粘连，HgCl2为防腐剂。该稀释液的主要缺点是遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉淀而使红细胞易凝集。（2）枸橼酸钠甲醛盐水稀释液：由NaCl、枸橼酸钠、甲醛及蒸馏水组成。其中NaCl和枸橼酸钠调节渗透压，后者还有抗凝作用，甲醛为防腐剂。该稀释液配制简单，可使红细胞在稀释后较长时间形态不发生改变并且不凝集，故应用较广。（3）生理盐水或1%甲醛生理盐水：急诊时如无红细胞稀释液可用此液代替。,1、试剂,一、红细胞计数,一、红细胞计数,用红细胞稀释液将血液稀释一定倍数后，充入改良牛鲍计数板中，在显微镜下计数一定容积内的红细胞数，经换算求出每升血液中的红细胞数量。,取稀释液2.0ml加入全血10l，混匀充池静置高倍镜计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数计算。,2原理,3简要操作,（二）质量保证,一、红细胞计数,1红细胞在室温和48可稳定3天，37可稳定36小时，以后逐渐减少。2血液加入稀释液后和充池前需充分混匀；计数时光线不能太强。3当白细胞100109/L 时，可对红细胞计数结果产生影响。处理方法是将计数所得的红细胞数减去计数所得的白细胞数；或者在高倍镜下注意识别，计数时勿将白细胞计入。在高倍镜下，白细胞体积通常比红细胞体积略大，中央无凹陷，细胞核隐约可见，无黄绿色折光。4.技术误差和固有误差见白细胞计数。,（三）方法学评价,一、红细胞计数,红细胞计数的方法学评价,（四）参考区间,1成年：男性（4.35.8）1012/L，女性（3.85.1）1012/L；新生儿：（6.07.0）1012/L。2红细胞计数医学决定水平 高于6.81012/L，应采取相应的治疗措施；低于3.51012/L，可诊断为贫血；低于1.51012/L，可考虑输血。（五）临床意义见血红蛋白测定。,一、红细胞计数,血红蛋白的分子结构,二、血红蛋白测定,卟啉环包着一个亚铁离子组成一个亚铁血红素，每条多肽链含一个亚铁血红素，每个血红蛋白分子有四个珠蛋白肽链,血红蛋白（hemoglobin，Hb或HGB）是红细胞的主要成分，由珠蛋白和亚铁血红素组成，每个Hb分子有4条珠蛋白肽链，分子量为64 458。,二、血红蛋白测定,Hb有多种形式及衍生物,HbO2 Hbred,Hb MHb（Hi）,HbCO SHb,二、血红蛋白测定,正常人Hb种类及含量,二、血红蛋白测定,1.原理,（一）HiCN测定法,RBC Hb Hi HiCN OD值 Hb（g/L）=KA,=540nm,溶血,氧化,结合,计算,直接计算结果,此处K值为理论值，在实际应用中更多采用标准品参照，测定未知样品血红蛋白浓度,（一）HiCN测定法,HiCN法测定血红蛋白标准曲线,制作标准曲线求得样品Hb浓度,？A:0.332，Hb=？,（二）其他测定方法,十二烷基硫酸钠法（sodium dodecyl sulfate hemoglobin，SDS-Hb）碱羟血红蛋白法（alkaline haematin detergent，AHD575）叠氮高铁血红蛋白法（HiN3）溴代十六烷基三甲胺法（cetyltrimethyl ammonynm bromide，CTAB）目前，自动血液分析仪已多使用不含氰化钾的血红蛋白测定方法,（三）质量保证,1合格的标本2主要器材 分光光度计的波长、光栅、比色杯3HiCN转化液 的质量要求4HiCN参考液定标 5开展室内质控,（四）方法学评价,血红蛋白测定方法学评价,成年男性：130175g/L成年女性：115150g/L新 生 儿：170200g/L。,（五）参考区间,（六）临床意义,30 60 90 110 120 Hb（g/L）,女性 男性,贫血的程度与临床表现并不一定一致,RBC+Hb的变化,（六）临床意义,三、红细胞形态检查,大小异常,红细胞异常形态,染色异常,结构异常,形态异常,正常形态红细胞,三、红细胞形态检查,（一）正常红细胞形态,正常的红细胞呈双凹圆盘形，细胞大小均一，平均直径约7.2m，瑞氏染色后为淡粉红色，血红蛋白充盈良好，呈正常色素性、向心性浅染，中央有生理性淡染区胞质内无异常结构。除健康人外，部分再生障碍性贫血、急性失血性贫血和白血病等患者的红细胞亦呈正常形态。,1.大小异常,大红细胞,大小不等,小红细胞,巨红细胞,（二）异常红细胞形态,直径小于6m,直径大于10m,直径大于15m,指同一血涂片中红细胞大小悬殊，直径相差在1倍以上,小红细胞,（二）异常红细胞形态,大红细胞和巨红细胞,（二）异常红细胞形态,红细胞大小不等,（二）异常红细胞形态,2.形态异常,椭圆形红细胞,靶形红细胞,球形红细胞,口形红细胞,（二）异常红细胞形态,棘形红细胞,缗钱状排列,裂片红细胞,红细胞形态不整,镰刀形红细胞,泪滴形红细胞,球形红细胞,（二）异常红细胞形态,口形红细胞,（二）异常红细胞形态,椭圆形红细胞,（二）异常红细胞形态,靶形红细胞,（二）异常红细胞形态,镰刀形红细胞,（二）异常红细胞形态,裂片红细胞,（二）异常红细胞形态,棘形红细胞,（二）异常红细胞形态,红细胞形态不整,（二）异常红细胞形态,泪滴形红细胞,（二）异常红细胞形态,缗钱状红细胞,（二）异常红细胞形态,（二）异常红细胞形态,高色素性红细胞,（二）异常红细胞形态,低色素性红细胞,（二）异常红细胞形态,嗜多色性红细胞,（二）异常红细胞形态,4结构异常,（二）异常红细胞形态,染色质小体,染色质小体（Howell-Jolly body）：又称豪-焦小体，位于成熟或幼稚红细胞胞质内的紫红色小体，直径12m，1至数个不等，为核碎裂或溶解后的残余物。最常见于巨幼细胞性贫血，也见于溶血性贫血及脾切除术后。,（二）异常红细胞形态,卡波氏环,卡-波环（Cabot ring）：存在于成熟或幼稚红细胞胞质内，呈紫红色线圈状或“8”字形结构，可能是纺锤体的残余物或脂蛋白变性所致。常与染色质小体并存，见于溶贫、巨幼贫、白血病及铅中毒等。,（二）异常红细胞形态,嗜碱性点彩红细胞,嗜碱性点彩红细胞（basophilic stippling cell）：指在瑞氏染色涂片中，红细胞胞质内出现形态大小不一、数量不等的灰蓝色点状物。在铅、铋、锌、汞等重金属中毒时增多，为铅中毒诊断的筛查指标。重症巨幼细胞性贫血和骨髓纤维化等亦可见增多。,（二）异常红细胞形态,有核红细胞,有核红细胞（nucleated erythrocyte，NRBC）：即幼稚红细胞。存在于骨髓中，1周内新生儿外周血涂片可见少量，成人外周血中出现有核红细胞属病理现象，常见于各种溶血性贫血、白血病、红白血病等。,（二）异常红细胞形态,都来认一认，分别属于哪一种？,血细胞比容的概述（概念）血细胞比容测定方法血细胞比容质量控制血细胞比容方法学评价血细胞比容参考区间血细胞比容临床意义,四、血细胞比容测定,内容,血细胞比容概念,血细胞比容（hemotocrit，HCT；packed cell volume，PCV），是指一定体积（1L）的全血中（抗凝血）红细胞所占容积的相对比例（小数或百分数）HCT的高低主要与红细胞数量、大小有关，主要用于贫血和红细胞增多的诊断，反应血液稀释和血液浓缩变化还可根据RBC、Hb、Hct计算红细胞平均值HCT测定可采用直接离心法（包括温氏法和微量法），或间接血液分析仪法,四、血细胞比容测定,温氏法微量法 折射仪法黏度法比重测定法放射性核素法等,四、血细胞比容测定,血细胞比容测定方法,其中微量法为推荐方法，放射性核素法为参考方法,（一）温氏法,1原理 温氏（Wintrobe）法是利用血液中不同的有形成分比重的差异，将定量的抗凝血以一定的速度和时间离心后，血液中有形成分沉淀，读取压实红细胞层在全血中所占体积的百分比,四、血细胞比容测定,1.Wintrobe管 2.paustrue管,（一）温氏法,2简要操作 抗凝血注入Wintrobe管以2264g离心力离心30分钟读数再离心10分钟判读结果,四、血细胞比容测定,（二）微量法,微量法是采用一次性使用的毛细玻璃管将抗凝静脉血注入其中，或先将毛细玻璃管肝素化并干燥后直接采集毛细血管血，然后以相对离心力12500g离心5分钟，取出毛细玻璃管，测量其中红细胞柱、全细胞柱和血浆柱的长度，判读结果,四、血细胞比容测定,（三）质量保证,1抗凝剂 目前多选用肝素或EDTA-K2用于HCT测定，对红细胞影响小2选用合格的器材 温氏管、微量管、高速离心机等3离心 RCF直接影响到HCT，ICSH建议温氏法RCF 2264g。RCF与RPM可相互转换4规范化操作，避免操作误差5结果判读与分析 离心后血浆与血细胞的分界面应为平面，目光平视，读数时读取自还原红细胞层以下的红细胞的高度,四、血细胞比容测定,（四）方法学评价,四、血细胞比容测定,HCT测定的方法学评价,（五）参考区间,四、血细胞比容测定,（六）临床意义,1增高：各种原因引起的血液浓缩；原发性或继发性红细胞增多症；新生儿。2降低：各种原因引起的血液稀释；各种原因引起的贫血3临床补液量的参考 各种原因导致脱水时，HCT都会增高4真性红细胞增多症诊断指标 当HCT大于0.7，RBC为（710）109/L，Hb大于180g/L，即可诊断5计算红细胞平均指数，对贫血的形态学分类有帮助。6血液流变学指标 自发性凝血时，HCT可0.6,四、血细胞比容测定,概述计算方法参考区间临床意义,五、红细胞平均指数,内容,（一）概述,红细胞平均指数包括：红细胞平均体积（MCV）红细胞平均血红蛋白含量（MCH）红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）为贫血的形态学分类和鉴别诊断提供重要线索,五、红细胞平均指数,（二）计算方法,仪器法与手工法基本相似，但不完全相同手工法费时费力仪器法自动计算，报告准确而且仪器法还有其他多种参数可以参考，如红细胞直方图,五、红细胞平均指数,手工法：红细胞平均指数的计算,如果RBC=4.01012/L,Hb=124g/L,Hct=0,42，那么MCV=?MCH=?MCHC=?,（二）计算方法,MCV由血液分析仪直接测定细胞信号获得MCH=Hb/RBCMCHC=Hb/（RBCMCV）HCT=RBCMCV,仪器法：红细胞平均指数的计算,如果MCH=30pg,MCV=120fl，那么MCHC=?,（二）计算方法,（三）参考区间,五、红细胞平均指数,MCV、MCH、MCHC参考区间,（四）临床意义,五、红细胞平均指数,贫血形态学分类及临床意义,网织红细胞定义网织红细胞形态网织红细胞染色方法网织红细胞计数方法网织红细胞计数参考区间网织红细胞计数的临床意义网织红细胞生成指数,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,网织红细胞（reticulocyte，Ret）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，其胞质中尚残留部分嗜碱性物质（核糖体和核糖核酸），可被某些染料活体染色后呈蓝色或紫色的网状或颗粒状结构，故名为网织红细胞。Ret体积略大于成熟红细胞（直径8.09.5m），仍具有合成血红蛋白的能力，约12天后，过渡为成熟红细胞。ICSH将网织红细胞分成IIV型。,定义,I型（丝球型）型（网型）III型（破网型）型（点粒型）,网织红细胞类型及特征,六、网织红细胞计数,（一）试管法,1原理 网织红细胞内带负电荷的RNA磷酸基，与新亚甲蓝、灿烂甲酚兰等碱性染料带正电荷的有色反应基团结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构，显微镜下计数可得网织红细胞的相对值（%）和绝对值（109/L）（Ret#=RBC Ret%）。2试剂 10g/L煌焦油蓝或新亚甲蓝染液。3简要操作 染液与待检血液11混合室温放置1015分钟制备血涂片低倍镜下观察油镜计数计算。,六、网织红细胞计数,（二）玻片法,1原理 同试管法2试剂 10g/L煌焦油蓝乙醇溶液。3简要操作 滴加染液于玻片上待干加同体积待检血液充分混匀，染色制备血涂片低倍镜下观察油镜计数计算。,六、网织红细胞计数,网织红细胞示意图,六、网织红细胞计数,黄焦油兰染色的网织红细胞,六、网织红细胞计数,黄焦油兰染色的网织红细胞,六、网织红细胞计数,（三）Miller窥盘法,B,A,Miller窥盘为圆形玻片，玻片上刻有两个正方形格子，计数时用小方格A计数红细胞，用大方格B（包含A）计数网织红细胞，大方格B（包含A）面积为小方格A的9倍。ICSH及我国卫计委临床检验中心推荐使用Miller窥盘进行网织红细胞计数。,六、网织红细胞计数,B格2个Ret，A格5个RBC,六、网织红细胞计数,5110 9,Ret%=0.5%Ret#=RBC Ret%,六、网织红细胞计数,（四）仪器法,带网织红细胞计数参数的血液分析仪、流式细胞仪（FCM）和网织红细胞专用计数仪均可，网织红细胞中RNA经特殊荧光染料染色可进行RNA定量，能精确计数网织红细胞占红细胞的百分数（Ret%）。网织红细胞可分为低荧光强度网织红细胞（LFR）、中荧光强度网织红细胞（MFR）以及高荧光强度网织红细胞