《生化分析方法》PPT课件.ppt

临床检验基础,深圳迈瑞公司福州办 陈正杰,Company Logo,一：临床检验与医学的关系及基本概念二：实验室生化、免疫试验的标本三：实验室生化试验基础四：实验室免疫试验基础五：微生物检验基础六：止血、血栓的实验室试验基础七：糖化血红蛋白（HBA1C)实验室检查概述,临床检验基础,临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,一：临床检验与医学的关系（一）、提供准确诊断；为准确诊断、及时治疗提供依据1、白血病：血象和骨髓象（诊断）2、肿瘤：骨髓瘤（诊断）3、贫血：RBC和Hb（为准确诊断）4、细菌培养：准确的细菌（为准确诊断）5、药敏实验，（为及时治疗）,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,（二）、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据 在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化1、肝功能项目检查：分析病情（急性肝炎、慢性肝炎 肝硬化）2、胆红素检查：观测疗效（黄疸减轻或消失）3、血脂项目检测：判断心血管疾病、冠心病预后 HBA1C检查：判断糖尿病并发症的发生、预后（HbA1c)水平7%者发生卒中的危险是HbA1c水平5%者的2.83倍）,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,（三）、为预防疾病提供资料1、流行病学情况调查：结核抗体普查2、地方病普查：克山病（血硒检查）3、职业病：血铅检查4、脱落细胞检查：肿瘤普查5、血象：营养状况调查（Fe筛查，缺铁性贫血）,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,二、实验室检查的一般方法：1、目视检查：直接观察标本颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫2、理学检查：液体的相对密度、血液比、粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化3、显微镜检查：观察有型成分的数量和形态等病理变化4、化学和免疫学检查：定性和定量检测标本化学、生物成分的病理变化5、其他检查：基因扩增、电子荧光、芯片等,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,临床检验（Clinical Laboratory Technology or Science)近代医学诊断体系的形成源于19世纪初叶法国Laennec奠定的胡典诊断学。二次大战后，随着基础医学的飞速发展，实验诊断学也有了迅速发展，逐渐形成临床生化、临床免疫、临床微生物、临床血液等新的分支学科我国称谓临床检验,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,检验工作（分散型）中心化 检验科 我国第一个建立的比较完整的检验科于1960年在南京军区总医院设立 我国医院检验科所属专业通常包括：临床检验学、临床化学、免疫血清学、血液学、微生物学和分子生物学，但每个专业的内涵近年有很大的发展，例如临床化学按其涉及内容又可分为酶、脂类、电解质、气体分析、微量元素、糖及含氮化合物、治疗药物临测（TDM）、毒理检测等。,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,检验科专业分类,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,初诊后的项目选择,解释,开医嘱,标本,准备标本,测定,报告,计算,准备病人,检验医学全流程图,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,临床检验对医生的建议：,1、合理选择检验项目并知晓其方法及特点2、与实验室沟通并合作，确保准确、快速时机的把握病人的准备严格监督标本的采集（SOPs）3、客观评价检验结果,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,实验方法的分级,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,“金标准”“金标准”主要指活体组织检查、病原学检查、细胞学检查、特殊影像诊断、长期随访及临床医学专家共同制订的公认的综合诊断标准。如：1、肿瘤：病理切片报告 2：酶联免疫法PCR:罗氏Amplicore检查的HCV/TB等结果 3、HBA1C：HPLC（高压液相色谱法）测定的结果 4、甲功五项检查：目前的金标准是RIA（放射免疫法）测定的结果等。,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,实验方法评价的有关指标,敏感性=（TP/（TP+FN）100%特异性=（TN/（TN+FP）100%阳性预测值=TP/（TP+FP）100%阴性预测值=TN/（TN+FN）100%（TP-真样性；FP假阳性；FN假阴性；TN真阴性）,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,试验方法选择,筛查：敏感性高的项目，防止假阴性诊断：特异性高的项目，防止假阳性,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,正常值：正确应为”参考值“,参考值范围一般为“平均值 1.96SD”即包括95%的入选人群测试结果 注意:1：参考值内外均有生理和病理的可能，只是概率大小而已 2：不可过分依赖和机械使用“参考值”3：任何检查项目均存在个体差异 4：在参阅检验结果时应充分考虑,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,常用的名词标准品：由一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可被用来校正仪器或证实某种实验方法的物质。可分为：1、一级标准品（原级参考物）特点：a:值是唯一的 b:杂质已经定量 c:由国际组织或国家标准委员会发给证书（如美国的NBS；中国国家临床检验标准委员会CCCLS；CRM470；NCCLS等）,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,例：CRM470,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,CRM470并非直接应用到常规实验室，更多情况下首先是作为诊断产品厂商制备标准母液和母定标曲线的参考标准。对提高不同实验室和不同方法所得结果的一致性、控制不同试剂批号的批间差异有重要意义。由于不同方法的方法学（散射或透射比浊测定）差异、不同厂家试剂抗体选择和试剂抗干扰（脂血、溶血）能力的差异。CRM470并非可以完全消除差异，但是通过 CRM470标准化，可以最大限度地提高检测结果的可比性。罗氏特定蛋白标准的优势：血清以正常人血清为基质液体即用型标准稳定性好，被测蛋白不降解（内含蛋白分解酶抑制剂）去除了标准血清中的脂质空白本底小基质效应少,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,同意参考范围的厂商 Hoffmann-LaRocheBecton ABIONDako Diagnostic Abbott Dade diagnostikc DuPont Beckman Instruments Bayer Diagnostics Human Gesellschaft fur Biochemica Behringwerke Johnson&Johnson Clinical Diagnostics BioMerieux Orion Diagnostica Boehringer Mannheim Wako,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,2、二级标准品（次级标准品）:特点：a:值是唯一的 b:物质的量由参考方法定值或用一级标准品 比较而确定。b:定值物质与测定物质基质相似。例：罗氏；特定蛋白定标液,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,3、控制物（值控品）：特点：a:分为定值与未定值两种 b:定值的值有一定范围 c:由一、二级标准品以参考方法定值例：罗氏PPN；PPU等。,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,各级分析方法与标准品的相互关系,决定性方法：评价参考方法及一级标准品,参考方法：为二级标准品及值控品定值，评价常规方法,常规方法：服务性实验室的常规定量分析,值控品：质量保证,二级标准品：常规方法的工作标准及为值控品定值,一级标准品：发展及评价参考方法，校正决定性方法及参考方法，产生二级标准品,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,溯源性溯源性(可追溯性）Traceability通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。说明结果准确的依据。（寻根问源）(ISO17511、ISO18153）,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,罗氏溯源,一：临床检验与医学的关系及基本概念,真值,参考性方法 比较分析方法,原始标定母液,ID-MS,HPLC,CRM470,原子吸光法测定不同项目的不同靶值,所有酶的项目的靶值采用手工方法用比色计在37度得出的ABS与摩尔消光系数计算得出,标准验室,Company Logo,质量控制（Quality Control。值控)：实验室为保证实验结果的有效性和改进工作质量所需的全部活动。一、室内质量控制（Internal Quality Control)为保证质量的实验室内工作全过程。包括 1、分析前的质量控制 2、分析中的质量控制 3、分析后的质量控制,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,IQC常用的值控图：XSD（常用）：均值值控图解释：1、95%结果都在2SD内2、均数两侧分布的点几乎相等，不能 有连续5点在均数同一侧3、不能有连续5次测定值渐增或渐降4、不能有连续2点在2SD以外5、不应该有落在3SD以外的点MONICA值控图，不常用。,3SD,-3SD,2SD,-2SD,X,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,二、室间质量评价（室间值评、External Quality Assessment）是由本实验室以外的某机构（临床检验中心、罗氏公司）所执行的客观地评价实验室测定结果的一种体系（罗氏QCS).注意：1、EQA是回顾性的，即对过去工作质量的评价 2、是以调查的方式 3、是评价，不是控制,V=(X-T)/T*100%VI=V/CCV*100,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,我国的CCV值选用WHO在国际室EQA中使用的CCV值（如：Glu7.7；TP3.9；Cre8.9等）1985年全国生化值控会议采用的EQA分级为：VIS80为优秀，80VIS150为良好 VIS150为不合格 注：VIS是在统计中降VI50全部视为0后对VI的“称呼”,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,罗氏QCS（Quality Control Service）的基础和优点一、实现基础检测系统校准品定值溯源性控制品定值溯源性全球性比较二、优点在控：检测系统对患者标本检测结果实现了溯源性,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,检测系统,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,临床实验室管理办法,第二十五条 医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验项目进行室内质量控制，绘制质量控制图。出现质量失控现象时，应当及时查找原因，采取纠正措施，并详细记录。第二十九条 医疗机构临床实验室参加室间质量评价应当按照常规临床检验方法与临床检验标本同时进行，不得另选检测系统，保证检验结果的真实性。,一：临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,第二十七条 医疗机构临床实验室定量测定项目的室内质量控制标准按照临床实验室定量测定室内质量控制指南（GB/20032302-T-361）执行。,一：临床检验与医学的关系及基本概念,二：实验室生化、免疫试验的标本,Company Logo,一、生化、免疫检验一般用血清、血浆。二、特殊标本有尿液、脑脊液、炎性积液（胸腹 水、关节积液）等三、特殊项目检查用抗凝全血1、血气检查用抗凝动脉全血2、HBA1C检查用抗凝静脉全血,二：实验室生化、免疫试验的标本要求,Company Logo,二：实验室生化、免疫试验的标本,Company Logo,标本因素对结果的影响,二：实验室生化、免疫试验的标本,1、静脉采血时，止血带使用时间过长,一分钟开始蛋白浓度开始升高,3-5分钟约升高5%,10-15分钟高达15%左右,Company Logo,二：实验室生化、免疫检查的标本,2、采血时握拳可导致血钾增高,握拳一分钟可使血钾增高,3、检测项目包括静脉给予的物质时应注意,5%的右旋糖苷中葡萄糖浓度为5000 mg/dl,内置导管常使用肝素，这种情况采血进行凝血试验结果显然不可靠,一边输液一边采血，既可能被污染又可能被稀释,Company Logo,4、抗凝剂的影响（污染）,二：实验室生化、免疫检查的标本,不同项目有不同的保护剂或抗凝剂,如EDTA钾可使钾升高，钙、镁、CK等降低,5、凝血试验的标本不宜先取,合理次序：无添加剂、少量抗凝剂、其他,Company Logo,标本采集的影响 除了急诊或其它特殊原因外，一般主张空腹12小时以后取血 影响检验结果的常见因素,二：实验室生化、免疫检查的标本,Company Logo,6、药物对检测结果的影响,二：实验室生化、免疫检查的标本,维生素C是一种还原剂，可干扰葡萄糖氧化酶法测定血糖,口服含黄体酮成分的避孕药引起血清胆固醇的升高,利尿药增加血钠和血钾浓度,非那西酊、别瞟吟醇、氨基水杨酸、雄性激素、环磷酸胺、红霉素、消炎痛、异烟肼、6一巯基瞟吟、阿的平、烟酸、保泰松、磺胺药、吩噻嗪等。这些药物可使血清碱性磷酸酶、胆红素、丙氨酸氨基转移酶（ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度或活性升高,Company Logo,吗啡可使血清淀粉酶、脂肪酶、氨基转移酶、碱性磷酸酶、胆红素等升高，使胰岛素、去甲肾上腺素等降低。大麻可使血钾、钠、氯、尿素和胰岛素等升高，而使肌酐、尿酸、血糖降低。,二：实验室生化、免疫检查的标本,三：实验室生化试验基础,Company Logo,三：实验室生化试验基础,生物化学检验(biochemistry test）是以健康和疾病时的生物化学过程为研究目的，通过测定组织、体液的成分，揭示疾病变化和药物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响，以提供疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防有用信息的一门学科。生物化学检验是医学的一个分支，它主要以化学和医学知识为基础，同时应用生物学、药理学、分子生物学、仪器学、计算机电子学等学科知识，它的独特研究领域、性质和作用，使其成为一门理论和实践性强的边缘性的应用学科。,Company Logo,临床生物化学的主要任务:,三：实验室生化试验基础,阐述疾病的生物化学基础,疾病发生发展的生物化学过程,药物对疾病发生发展的生物化学过程的影响,生物化学检验则以检验方法、新技术的开发应用和检验质量的保证为主，并对检验结果及其临床意义作出评价，为临床提供正确、有用的实验室信息。,Company Logo,生物化学检验包括:,普通生化检验,特殊生化检验,急诊生化检验,床旁生化检验,其提供的检验项目可满足临床多种疾病的诊断需要，可对这些项目按不同类别进行编组,技术条件要求较高，并非在每个实验室都能开展，可通过中心实验室提供此类服务,开展临床紧急需求的、小规模的检验项目，能迅速地回报检验结果,一些小型的生化分析仪放置在病人床旁或医疗现场,使得能快捷、方便地得到检验结果,三：实验室生化试验基础,Company Logo,化学比色法免疫比浊法离子选择性电极电位法电泳法,三：实验室生化试验基础,Company Logo,化学比色法,基本原理：根据朗伯比尔定律，特定波长的光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。待测物经过一定的化学反应生成的产物，对特定波长的光具有吸收峰，从而对物质进行定量检测。这是最常用的一种方法。例：总蛋白，白蛋白、Glu、TG、TCH等的测定,三：实验室生化试验基础,Company Logo,免疫比浊法,基本原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射比浊，如检测透过光则为透射比浊。一般生化仪所用为透射比浊 例：前白蛋白，载脂蛋白等蛋白的测定,三：实验室生化试验基础,Company Logo,离子选择性电极电位法,基本原理：根据能斯特方程，离子选择性电极法通过检测电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。例：钾、钠、氯、PH的测定,三：实验室生化试验基础,Company Logo,电泳法,基本原理：在直流电场中，带电粒子具有向带相反电极移动的现象。血清中的蛋白质为双性离子，在碱性环境中带负电荷，在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带电荷多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同蛋白分离。例:血清蛋白电泳,三：实验室生化试验基础,Company Logo,肝胆疾病的生物化学检测,三：实验室生化试验基础,Company Logo,肝功能实验的内容,蛋白质代谢功能检查（TP、Alb、PAB）胆红素代谢检查（TB、DB）胆汁酸代谢检查（TBA）血清肝酶谱的检查（ALT、AST、GGT、ALP、CHE）,三：实验室生化试验基础,Company Logo,肾脏疾病的生物化学检查 肾脏的功能,三：实验室生化试验基础,排泄水分、代谢产物、废物，保留有用物质 调节水分和渗透压 调节电解质及酸碱平衡 制造某些重要的生理活性物质,Company Logo,肾功检查：,三：实验室生化试验基础,尿素(UREA),肌酐(CREA),血尿酸（UA）,2-微球蛋白,Company Logo,1、血浆脂类包括游离胆固醇（FC）、胆固醇酯(CE)、磷脂（PL）、甘油三酯（TG）、糖脂和游离脂肪酸（FFA）等2、血浆中最多的脂质为胆固醇、PL和TG，游离胆 固醇和胆固醇酯称为总胆固醇3、血浆脂类以脂蛋白复合体的形式存在4、血浆脂蛋白分类：CM、VLDL、IDL、LDL、HDL和Lp(a),三：实验室生化试验基础,血清脂类及脂蛋白检测,Company Logo,超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白图谱,三：实验室生化试验基础,Company Logo,急性心肌损伤的生物化学标志物,近几年，一致认为肌红蛋白和CK-MB亚型是急性心肌梗死早期标志物，肌钙蛋白是心肌损伤的确诊标志物。具体包括心肌酶学（AST、LDH、LDH1-5、CK、CK-MB、-HBDH）心肌肌钙蛋白（包括cTnT和cTnI）肌红蛋白Mb,三：实验室生化试验基础,Company Logo,糖代谢及糖尿病检测血糖（Glu)果糖胺（FRA）（糖化血清蛋白GSP）糖化血红蛋白（HBA1c)酮体（乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮）,三：实验室生化试验基础,Company Logo,无机离子的生物化学检测,血清钾的测定血清钠的测定血清氯的测定血清二氧化碳的测定血清钙的测定血清磷的测定血清铁的测定血清镁的测定,三：实验室生化试验基础,Company Logo,其它检查项目：,三：实验室生化试验基础,CRP C3,C4 1 Acid glycoproteinsIgA,G,M ASLO,RF Transferrin Ferritin,sTfR*Prealbumin MAU a1-Antitrysin Myoglobin1-Microglobin b 2-Microglobulind-Dimer Urine/CSF ProteinsCRP(HS)*,LpaseAmy P-Amy,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,免疫是机体的一种特殊的保护性生理功能.通过免疫,机体能够识别“自己”,排除“非己”,以维持内环境的平衡和稳定.免疫又分为：一、非特异性免疫二、特异性免疫,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,非特异性免疫：指机体先天存在的免疫特性,是人类在长期进化过程中建立的天然防御功能.人人生来就有,不针对某一种特定的病原体.皮肤、黏膜等屏障作用(第一道防线)体液中的杀菌物质和吞噬细胞的作用(第二道防线),四：实验室免疫试验基础,Company Logo,特异性免疫：指机体与外来侵害抗原物质接触后获得的、具有针对性(即对某一特定病原体或异物起防御作用)的免疫特性.包括体液免疫和细胞免疫。第三道防线,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,免疫器官 骨髓、胸腺、脾、淋巴结、扁桃体等免疫细胞 淋巴细胞、吞噬细胞、NK细胞等免疫物质 各种抗体、淋巴因子等,特异性免疫的物质基础,人体的免疫系统,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,抗原：抗原(antigen，Ag)是指能刺激机体免疫系统诱导免疫应答并能与应答（如抗体或致敏淋巴细胞）发生特异反应的物质。特点：1、免疫原性(immunogenicity)指诱导宿主产生免疫应答的能力，具有这种能力的物质称为免疫原(immunogen)2、免疫反应性(immunoreactivity)指抗原与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力，亦称为反应原性 半抗原：半抗原(hapten)：在独立存在时只具有反应原性而无免疫原性。,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,抗原的性质：异物性 一般指外来物质，也包括体内异常细胞大分子性 通常相对分子质量大于10000特异性 一种抗原只能与相应的抗体或效应T细胞 发生特异性结合。取决于抗原决定簇。,四：实验室免疫试验基础,蛋白质或多糖,抗原决定簇 抗原物质表面具有的某些特定的化学基团.它是免疫细胞识别抗原的重要依据,Company Logo,抗体（anti-body)：指机体受抗原刺激后,由效应B细胞产生的、具有与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。如：抗毒素和凝集素.化学本质:免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)分布:存在于血液和其他体液（包括组织液和外分泌液）中，约占血浆蛋白总量的20；还可分布在B细胞表面。Ig的结构具有不均一性，可分为不同的类型；多数Ig具有抗体活性，可以特异性识别和结合抗原，并引发一系列生物学效应.,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,体液免疫和细胞免疫体液免疫:由存在于体液中的抗体发挥免疫效应的免疫细胞免疫:主要由效应 T 细胞发挥免疫效应的免疫.体液免疫和细胞免疫的关系,被抗原侵入的宿主细胞,效应B细胞产生的抗体与相应的抗原特异性合。,1、效应T细胞与靶细胞密切接触。2、效应T细胞释放淋巴因子，促进细胞免疫作用，再体液免疫。,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,实验室免疫实验(Laboratory immunity tests)是在实验室内，模拟人体内环境，用生物学、分子生物学、化学、仪器学、计算机电子学等学科知识检测机体在正常或疾病情况下的免疫机制和免疫调节的一门综合性学科。,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,临床检验实验室免疫试验分为1、细胞免疫实验2、血液、体液免疫实验一、细胞免疫实验：1、E花环形成实验 2、白细胞移动抑制试验 3、淋巴细胞转化试验 4、NK细胞活性测定 5、流式细胞仪检测技术 6、杀伤细胞功能的检测 7、吞噬功能试验,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,二、血液、体液免疫实验（一）、凝集反应 1、直接凝集反应 玻片凝集试验ABO血型鉴定 试管凝集试验ASO稀释凝集试验 2、间接凝集试验 间接血球凝集试验血清类风湿因子测定 间接凝集抑制试验妊娠试验 3、协同凝集试验,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,（二）沉淀反应 1、单向琼脂扩散试验 Ig琼脂扩散试验 2、双向琼脂扩散试验 C3、C4琼脂扩散试验,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,（三）、免疫电泳试验 1、对流免疫电泳试验（已知抗体、未知抗原）斯氏肺吸虫诊断 2、火箭免疫电泳试验 AFP电泳 3、交叉免疫电泳试验 早期的肿瘤标志物检查,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,（四）、标记免疫试验 1、免疫印迹（染料标记）试验 HIV确证试验 2、胶体金标记试验 早孕纸条 cTnT定性、半定量试条 3、放射免疫法 4、酶联免疫法 5、荧光标记免疫 6、发光标记免疫,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,几种重要的标记免疫检测方法及代表仪器,分 类 名 称 缩 写 仪 器放射免疫 放射免疫 RIA r-计数器 免疫放射定量分析 IRMA r-计数器酶 免 疫 发 色 ELISA SR1、ES300 荧 光 EILA IMX、AXSYM、VLDAS 发 光 EILA Amerlite、Access荧光免疫 荧光偏振 FPIA TDX、AXSYM 时间分辨荧光 DELFIA Arou s1235、Fluor51发光免疫 化学发光免疫 LIA ACS180 电化学发光 ECL ECL2010/E170,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,电化学发光（ECL）：基本原理与化学发光相同，与普通化学发光技术的不同在于采用特殊的标记物：三联吡啶钌（Ru(bpy)2+。在三丙胺阳离子自由（TPA）的催化及脉冲电压的激发下，此标记物可产生高效、稳定的连续发光。同时，由于（Ru(bpy)2+。在反应中可循环利用，使发光得以增强和稳定。这种方法的主要优点是标记物分子小且稳定性较好，发光强度高，发光时间长。瑞士罗氏公司ELECSYS系列的自动免疫分析仪就是采的电化学发光原理。,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,ECL的优点：1、近似均相免疫测量，操作简单，省去分离步骤 2、灵敏度高；线性范围宽（HCG线性110000mIU/ml；TSH灵敏度0.005uIU/ml）解释：线性范围(linearity and range)线性范围是指测定方法在取得精密度、准确度均符合要求的情况下，试验结果成线性变化范围。Y=a+bx3、反应测试时间短（TnT9分钟）4、记物Ru（bpy）32+稳定性好，室温下半衰期1年,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,电化学发光提高灵敏度，工作范围及分析速度,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,电化学发光分析仪检测项目,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,例：心肌损伤指标项 项 目 标本要求 参考值 肌 肌酸激酶同功酶 静脉血1.5ml 男性:0.1ng/ml(cTnT)肝素抗凝,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,cTnT 1、心肌特有的蛋白，诊断特异性强，确诊率高。诊断AMI特异性98。较cTnI有统一的 cutoff值；无交叉反应。2、用于当怀疑心肌细胞损伤的患者。例如：急性冠脉综合征(发现或者排除急性心肌梗塞和亚急性心肌梗塞，用来 评估梗塞的严重程度，通过发现微小面积心梗来对不稳定心绞痛进行危险程度分级)。在心肌的感染中(例如 心肌炎)以及由机械，电和化学原因诱导的 心肌损 伤(冠状动脉支架成型术 PTCA)等心脏手术，心脏 移植，心脏换瓣，心肌毒素，等原因均可以造成TNT升高。TNT在心肌损伤2-8小时释放入血。TNT有2小时-14天的诊断窗口。,例：临床意义,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,3、灵敏度较低，结合Myo和CKMB对早期胸痛病人的评估起决定性作用。4、还可作为溶栓治疗后再灌注成功与否的灵敏特异指标。,肌红蛋白（myo）1、心肌梗死：急性心梗后最早（12h）出现，发作后一天内返 回基线浓度，有再梗塞时又迅速上升，成“多峰”现象。灵敏度优于CKMB。2、灵敏度高，最早排除AMI；阴性预测率为99。3、多种肌病（如急性肌损伤、肌营养不良、肌萎缩、多发性肌炎）升高。4、急慢性肾功能衰竭、严重充血性心力衰竭、长期休克等会升高。,四：实验室免疫试验基础,Company Logo,CKMB 1、CKMB升高主要见于心肌梗死（MI），MI发病后 46小时CKMB开始升高，另外心肌缺血，进行 性肌营养不良，多肌炎，Reye综合征亦可见CKMB升高。2、CKMB与肌红蛋白、肌钙蛋白联合测定有利于 AMI的早期诊断，并可提高AMI诊断的特异性和敏感性。注：由于cTnT、Myo、CKMB在AMI时血中升高和达到高峰的时间不同，故最好三项指标同时测定并每隔2小时测定一次，以免漏诊和误诊。,四：实验室免疫试验基础,五：微生物检验基础,Company Logo,一、微生物（microorganisms）：,概念：一群肉眼看不见的微小生物，包括：细菌、螺旋体、立克次体、衣原体、支原体、放线菌（原核）、病毒（非细胞）、真菌（真核）。原核与真核细胞的区别：细胞核的区别,五：微生物检验基础,Company Logo,微生物与人类的关系：,（1）大多数不致病，甚至是对人、动、植物有益和必需的，如：固氮菌；酿酒、制醋、抗生素、肠道正常菌群。（2）病原微生物:pathogenic microorganisms,五：微生物检验基础,Company Logo,医学微生物学(medical microbiology)：与医学有关的病原微生物的生物性状、致病机理、免疫性及有关技术和理论的应用。临床微生物学(clinical microbiology)：择重研究感染性疾病诊断方法，提供诊断依据和指导用药。1、传统病原性微生物：微生物感染人体后即导致机体发生疾病的。（金黄色葡萄球菌、肺炎克伯氏菌、溶血性链球菌）2、条件至病性微生物：微生物在一定条件下才能导致人体发生疾病的微生物。（大肠杆菌、白色葡萄球菌）,五：微生物检验基础,Company Logo,四、临床微生物的任务,研究感染性疾病的病原体特征：传统的病原微生物 条件致病菌提供快速、准确的病原学诊断；指导合理使用抗生素；目前检验科的主要任务。对医院感染进行监控。,五：微生物检验基础,Company Logo,一、细菌(bacterium)的形态与结构,球菌（coccus）杆菌(Bacillus)弧菌与弯曲菌螺旋菌及螺旋体不规则形。,五：微生物检验基础,Company Logo,革兰氏染色法：革兰氏染色法是实验室广泛使用的一种鉴别细菌的染色法。1884年有丹麦医生Gram创立。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤 G菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。G菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。,五：微生物检验基础,Company Logo,抗酸染色法：1882年由埃利希（FEhrlich）首创并经F齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（ZiehlNeelsen）染色法和齐尔-加贝特（ZiehlGabbet）染色法。用石碳酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石碳酸复红的红色。检验实验室主要用于结核杆菌的染色鉴定。,五：微生物检验基础,Company Logo,实验室鉴定微生物的主要方法：,五：微生物检验基础,标本,基因检测,免疫方法检测,快速染色鉴定,培养、生化鉴定,Company Logo,细菌培养、鉴定的一般步骤：,五：微生物检验基础,标本,接种培养基,染色鉴定,转种增菌,生化鉴定,初步判断；选择培养基,染色鉴定,药敏试验,免疫鉴定,基因检测,Company Logo,标本：1、组织（皮肤、毛发、骨髓等）2、分泌物（浓液、痰、粘液等）3、排泄物（大便、小便）4、体液（胸腹水、关节液等）5、血液,五：微生物检验基础,Company Logo,标本要求：1、取标本的时间（如发热病人血培养）2、标本的培养次数（如阴性血培养需联系培养三次）3、是否用抗生素4、标本的污染问题,五：微生物检验基础,Company Logo,培养基：含丰富的适合于细菌生长的液体、半固体、固体物质。例：1、成品、办成品干粉培养基（血平板、MH、SS、MCK等）加水、溶解、灭菌后制成固体、半固体、液体，倒入培养皿、试管等备用。2、成品培养基：52510，259797（痰液）251010（体液），259787、259790；259791、259793（中和）等。不同的标本一定要选择不同的培养基，特别是增菌培养,五：微生物检验基础,Company Logo,生化鉴定：利用细菌在生长过程中典型的生理、生化表现进行合理组合，根据生理、生化结果对生长的细菌进行概率判断。1、生理：如鞭毛；产气等2、溶血（外毒素）3、生化：鸟氨酸、精氨酸、糖的利用（是否产酸）等（如：V-P试验、MR试验、ONPG试验、吲哚试验等）,五：微生物检验基础,Company Logo,例：API20E(20100):,五：微生物检验基础,Company Logo,API 10 S(10100),五：微生物检验基础,Company Logo,药敏试验：根据细菌的生理结构、生长环境等，合理组合不同的抗生素，根据不同浓度细菌在不同抗生素、不同浓度抗生素环境下的生长情况，依据一定的规则判断细菌对抗生素的敏感情况。规则：国际通用规则NCCLS。NCCLS 美国临床标准委员会,五：微生物检验基础,Company Logo,例：ATB STREP 5（14355）,五：微生物检验基础,Company Logo,例：ATB FUNGUS 3（14204）,五：微生物检验基础,六：止血、血栓的实验室检查基础,Company Logo,出、凝血是很多疾病发展的一个过程。出凝血疾病是由于机体止血机制（包括血管，血小板，凝血因子等）某个环节异常而引起的自发性出血不止或凝血障碍的一类疾病，分为先天性和获得性两种。（冠状动脉搭桥治疗后抗凝治疗不当；血友病）。实验室检查特点：1、检查流程（排除或肯定因素）复杂2、试验条件和技术苛刻。,六：止血、血栓的实验室检查基础,Company Logo,标本:目前实验室检查止血、血栓的试验标本都是血浆。标本要求：1、采血避免反复穿刺2、采样后立即混匀，否则易发凝块，时间假性延长3、溶血可导致时间假性缩短4、采血后2h内完成检测,六：止血、血栓的实验室检查基础,Company Logo,标本要求：,六：止血、血栓的实验室检查基础,5、采血后标本应在15-25度保存，勿置2-8度，避免血小板被低温激活6、选择适合的抗凝剂，避免使用钙离子螯合剂如EDTA等7、目前，血小板聚集功能检测多依赖于光电比浊法，要避免溶血和脂血8、应使用硅化试管或专用试管采血9、避免阿司匹林、肝素等药物的影响,Company Logo,实验室常用的检查项目及临床意义：一、凝血酶原时间(PT)1、PT延长见于先天性、缺乏症和低(无)纤维蛋白原血症；获得性见于肝脏疾病、DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏症等，是监察口服抗凝治疗作为口服抗凝药的可靠指标。2、PT缩短见于先天性因子V增多症，长期口服避孕药，血栓前状态和血栓性疾病等。二、活化部分凝血活酶时间(APTT)1、手术前检查内源性途径凝血因子-、。2、检查是否存在某因子有特殊抑制物。3、是肝素治疗(监测肝素的首选指标)，凝血因子治疗以及检测狼疮抗凝物的主要手段。,六：止血、血栓的实验室检查基础,Company Logo,实验室常用的检查项目及临床意义：三、凝血酶时间(TT)1、监察纤维蛋白形成过程2、推测纤维蛋白原的浓度(质、量)3、检查凝血抑制物是否存在(如肝素、AT-等)4检查纤维蛋白分解物是否存在。四、纤维蛋白原(FIB)1、监察凝血功能，用于手术前和血栓的溶拴，抗凝治疗 2、诊断局部缺血心脏疾病的危险性 3、预防血栓形成(独立因素)4、肿瘤病人的化疗,六：止血、血栓的实验室检查基础,Company Logo,五、D二聚体（DDIMER）DIC时，血浆D-二聚体明显升高，呈阳性反应，是诊断DIC的重要依据。D-二聚体在原发性纤溶症时正常，继发性纤溶亢进则显著增高，是二者鉴别的重要指标，此外，各型白血病、急性心肌梗死、脑血管疾病、肺脏疾病、外科手术等均可见血浆D-二聚体水平增高。,六：止血、血栓的实验室检查基础,Com