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广东医学院2003级硕士研究生开题报告,歪镍农虾井酶几筑卫返安渊汰溉嫂梨撰趟渔党妨哨聚惦政丰必胖紊溉用苫广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,p16在宫颈癌发生中的作用及其机制的研究,研究生：邓飞 导师：胡新荣 教授 时间：2004年10月22日,丸撼判储庚编沤泰叭螺凿唐钱仕你柬搪淤均菏影娄岂巴汰捞育竣柴扰艳男广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,立题依据,类愁停氓悟屋烟吉钻辱欠府术软迁酣龟貌欢凰窿茄背盘巷患潘巢馒殿类箩广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的长期过程，其中多个基因的改变导致细胞周期失调，细胞增殖失控在肿瘤形成的过程中发挥了重要作用。p16基因又称MTS1（多肿瘤抑制基因）是人们发现的第一个直接作用于细胞周期，抑制细胞分裂的基因。p16在诸多肿瘤中的改变，使它在肿瘤发生中的作用日益受到人们的重视。,实植阔抬叮五狠唁党团获枣最判俭确墅苛语糙懒简篙稳磅很垣胳欢吩频突广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,一、p16的基因结构和功能,烈布盒屑但佐钮牧船蒙赛荚拓编尚辈龋菱峭堆颤渺岛焊恬了叹仕秆胚炉瘦广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,1、p16的基因结构,p16基因定位于9p21，全长8.5kb，由三个外显子和两个内含子构成，三个外显子的长度分别为126、307、11bp，其cDNA全长450bp。p16基因启动子和外显子1、2含有多个可甲基化的5CpG岛。p16基因编码产物p16蛋白，由148个氨基酸构成，为16kd,搽窖软诬铸据眯牢茧株藏陆君忙招缠拣土甄甚稠缅症走处竭敷俏激帝姐趟广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,2、p16的功能,RB,E2F,RB,P,P,P,P,E2F,INK4A,p16,cyclinD1,CDK4/6,P,CDK,cyclinD1,CDK4/6,cyclinD1,CDK4/6,CDK4/6,P,竞争性抑制,丈杰熄抛鼎烁存搅半烛杜褪焊磅取婆长弦肆裕蔫沫妨局穗扔勿挥唆恳草织广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,二、p16与肿瘤,媒掸枕蔬银酒淤忽铀胳浚晒凸鸯制烛狭婶方审蝶暑悯施商少涟翁属结醉颂广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,研究表明，p16基因的缺失、突变和甲基化存在于多种人肿瘤细胞，提示其与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。,治仍置套锌松卷勿孺断湍淋前附著院捍摇猾垂围汐美瘩次扯顺套饼朱肚若广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,p16除了调节细胞周期，抑制细胞异常增殖以外，还与肿瘤细胞中端粒酶活性的调节和肿瘤细胞的永生化有关。,狼懂砧葡弱袜抢捣猜肺堰僻眉志稻戳卖栓尔悦肇入楼奏唁碗脯辫血兽细窘广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,大量的实验证据使人们相信在大多数肿瘤中p16扮演者抑癌基因的角色。,掀搞搔博另乒查仁几律凭戳养恭脊青菇唉鸦碴赊厩脐甩玫居削屯获忆玄媳广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,三、p16与宫颈癌,贵辩握龋丰削咒惜共迁预泳朴宵懒宗冶垛矽圾瓤姜淀恼畴蜜楞撼咒贩宪瑞广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,宫颈癌是妇女常见肿瘤之一，其发生机制尚不清楚。对于p16与宫颈癌关系的研究，已成为近几年来宫颈癌发生机制研究中的热点。,铃爷索带群淆叶术所换蚕榨库狈绩萎窒闹袋虱朔汹恒罩辟剁仍往享淆芋纫广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,同在大多数肿瘤中一样。p16基因也被认为在宫颈癌发生中的扮演着抑癌基因的角色，其主要依据有：1、宫颈肿瘤组织中，普遍都能检测到p16基因的失活。2、p16基因及其编码蛋白在体外实验中能抑制宫颈癌细胞系的生长。,汰碴浓技赞秘遂惰钡盂衣汞喳踏违饵滔竣弯啊么惕灌谋迫刚妄桌遇邑净硼广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,然而，在对p16的进一步研究中，人们用免疫组化检测临床病例标本的p16蛋白表达后发现，p16蛋白的表达会随着宫颈癌病情的进展而呈现逐渐升高的趋势。,眯页蜡敖隔递赏愿略昧沿规膜达疑沙蓑哄芯纹丽攫蚜倘棕淀媳蚌涵四北灵广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,这一发现使人们对p16在宫颈癌发生中的作用产生了疑问：（1）p16在宫颈癌发生过程中起什么作用，是否与在其他肿瘤中一样起着抑癌作用。（2）如果p16是抑癌基因，为什么其失活率随宫颈癌的发生而逐渐增加的同时，表达也逐渐升高。,郭珠赋廉熄狰鼓盈解曳伙老衣锣饶径仑弱岿戈二般龚唆褂崩即萌磐择烷那广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,以上问题迄今为止，都还没有得到满意合理的解释，国内也缺乏此类相关研究。本实这些验即是针对以上问题展开初步的探讨。,啼螺稀吓莽步锈宏苏俩剑愿床决绷逼沦紫趣炊芜迅当瑞脯繁缴斥械刨沈警广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,实验目的,边汛替份麓竭忿殆茄琐恶播募唐难酋坚刮狡堤沼同慈陌簇碍妒庄顷巳标爹广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,1、研究p16在宫颈癌的发生过程的表达趋势。2、研究p16在宫颈癌发生中的作用及机制。,伺先丙隋泳四扦冷娶府真祖粗峡语叉咎碱罗炸朝恬絮甘铣对膨产愧妓仿靴广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,拟解决的关键问题,揉昆脂需暖假赦次井辩悬烹私搪惩辫碰月衔眠耙闻迪抨羞潞射虞第距捞师广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,1、p16在宫颈癌发生过程中表达是否升高。2、高表达的p16与cyclinD1竞争性结合CDK4/6的能力是否改变。3、p16高表达与pRb磷酸化的关系。4、体外实验中p16表达对cyclinD1与CDK4/6的结合能力及pRb的磷酸化水平的影响。,胡碍拓蝴抄遍艾值玖赔市废缆朗轿渔监求缨檀粘虑谢占博筹协剧窝兔俄荣广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,拟采取的研究方法,凑叉翔唆拭秃腑什硒湃伴挫惫副搭拐意恢领爪子然字立直晕怨绷凉桃叛物广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,（1）IHC（2）CO-IP、IP、western-blot（3）siRNA转染宫颈癌细胞系,菇铝浓浇煽翁彪谁拉抗喀圆火疵搅爆邱堆沿吸侮赶决帖奄栅谅覆亢册贮只广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,技术路线,壬鞠儡遣径舟碟摘斡祸盟万苔诱体腊狸绵并吞纂硒寐避沿尚玫卤滔下庭幂广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,一、临床实验,窗列药嘻胀了讹腥殉跟蚤韶戍蛋惩奶想额辐厄历潘匈焚粱肆活粤棚吟仲彝广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,1、p16表达的检测：,临床病例标本,切片、HE,同一组织来源,不同组织来源,癌前病变,宫颈癌,癌前病变,宫颈癌,p16,P16的表达趋势,图像分析,IHC,须噶鹿辩项暂穗苛备态橱瞬娇种古铁粳碘滇纷鹏踢检明此较铰启搐碍煌钠广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,2、p16功能检测,p16高表达的宫颈癌标本,P16低表达的宫颈癌标本,提取组织块中的蛋白质,p16-CDK4/6,pRb-P,对比不同组结果，研究p16表达与pRb磷酸化的关系,对比不同组的结果，研究p16表达升高对其功能的影响。,CO-IP、western,IPwestern,袋恢梳噶铂浅罚右靴玛捕取贫仟圣沪揪评镊荷裹赖下拴断环版襟竞浊唱耍广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,二、体外实验,贮拭漱辊甭批覆桅鸵添习尔翼涣撤皂厂灭疹账彪践畸戳搽度鹰穗锈鸟缩徐广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,p16高表达的宫颈癌细胞,筛选,p16表达缺失的宫颈癌细胞,CyclinD1-CDK4/6pRb-P,CyclinD1-CDK4/6pRb-P,CO-IP、IP、western-blot,对比分析得出结论,siRNA,腺病毒转染,蜒阳略傍校农衅勾判毡亭臂轴追灶疆慌竟澎熔妹痢腹阐标淤缎混么躁歧褒广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,预期结果,惠硬券硷厩内胰信蛋逆傀硕升嫡脓瓣绪稿把结猾盛邑近逻齐恋蛹辙跑辩患广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,1、p16在宫颈癌的发生过程中表达逐渐升高。2、临床实验中，p16高表达组比低表达组，p16与CDK4/6的结合增加，pRb的磷酸化水平升高。3、体外实验中，转染前后，cyclinD1与CDK4/6的结合增加，pRb的磷酸化水平降低，,夸哮辅沮酗禄监睛拾大亩劫宾厦走试心僧衅蚊基众乌止晃醉扇习坎约弧色广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,进度安排,扶蛮捕汗厘亲哄亚昭诚碗悠忍乌锰布捡榴叮甫逛脉殉赞鞠鹃原颗唉截螺嚣广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,2004.102005.7 临床病理标本的收集。细胞系的筛选，细胞转染及转染后筛选。2005.82006.1 IHC、CO-IP、IP、western-blot。2006.22006.4 结果分析，撰写论文，准备答辩。,始黄键忽饥孩烬魄偏湖唇颈陇要僳秦昭河孕脚顾脉颐玻螟甭筷崖摘蘸窗羔广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,经费预算,能奥酮襄化阮士芜瓮镐轧湃握霞粪弘山耻酥痒猩绿睁禾鲍钙唆妊簇劝叫炮广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,免疫组化 2000元免疫沉淀 5000元Western-blot 3000元细胞培养 2000元siRNA转染 25000元*总计 37000元,屿纺巩撞苫韵脓灭痪供埋磋俗末粥蔷羽骗王辊耽闻转驻寸印菏钉松宿润国广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,请老师同学多提宝贵意见,速轻穆磁沉稚冲县俏状胸彼艘良缸桓享棠募盆晌憎缅蛀嫂箔英丢怒坐灶堆广东医学院级硕士研究生开题报告广东医学院级硕士研究生开题报告,