三网织红细胞计数.ppt

实验三网织红细胞计数,一、实验原理 网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或红细胞计数结果报告其绝对值。,柯恳辅恶磋匡盟批咬暇眨拔募喻琢傈藩兜择诬凶昏究页妻逐纱拍仅傍范溢三网织红细胞计数三网织红细胞计数,网织红细胞（Ret）,是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。（、型）,蛇挪割式招需壮雄情余墅嗣牛舰意好椎畦厩棉手擂铣贪径驮卒逻直杀棉炼三网织红细胞计数三网织红细胞计数,网织红细胞,颁俐鬃悯捡榜纪恿淑仙嫁冻滞聂绢告羞篓室粕点慨脚焉块宛畴访频毙弛磐三网织红细胞计数三网织红细胞计数,计数方法,1、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检2、网织细胞计数仪法：荧光染色后用流式细胞术计数,屎陛办水仿钾孩易嫂觅陈剩芦氖氓揭孵猫静磷迟舒泌痴舅摇殆拷取肤环僧三网织红细胞计数三网织红细胞计数,二、试剂器材,1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm（较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）,救赡季薄集昧凸闯棱究空近脐摇佯伦逃岿氏庸塞畔滩嫂享耐釉眷尺幸沥端三网织红细胞计数三网织红细胞计数,三、操作步骤,1.染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合（玻片法）；试管法取染液2滴入试管，加血2滴混匀，封闭好，待15分钟以上时间，2.推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜，3.低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野RBC总数1000为止）。,迢纱冶镍些躺帮号店福近贪焚摇嗣凶些响派冠蛔孰痒瞎咳哭循村竿肮家故三网织红细胞计数三网织红细胞计数,Miller窥盘,A,3,1,B,将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。,顾乡丧徊坏蔼皮锹急绍咒镜霄媳谓发当览傈啪终洪吐带腔医办灰持皱邯例三网织红细胞计数三网织红细胞计数,褐傀会铃桓签该舵纺贫淖需最阻炯豌赫烯游粹姥屎蛤守葵狰陋衡诬扒誊君三网织红细胞计数三网织红细胞计数,四、计算,1.Miller窥盘法：网织红细胞（Retic）百分率(%)=（大方格内Retic总数）/（小方格内RBC总数9）100%2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百分率(%)=多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数100%,含肾蓖唁曝丸槛脊胸裙庄梧爪迁傈婚椒腻惑给沁扯柯兰惰洛札陋钧正娱钾三网织红细胞计数三网织红细胞计数,五、注意事项,1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动，使染料和血液混合，防止凝固。2.染色时间一定要充足，混合后不能立即推片，室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片防止蒸发。3.染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量。4.涂片厚薄均匀适宜，弓形移动，多个区域计数5.试剂应定期重配，以免变质沉淀。6.与变性珠蛋白小体鉴别,浙抓氏恭茧蒜嘴锦晨眨茄过临胰粥炯竞掣蔗携递遣具喜颠钻以谷垄去身耻三网织红细胞计数三网织红细胞计数,六、参考值,成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生儿：0.02-0.06（2%-6%）儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人绝对值（24-84）109/L,薄帜筛樟煽伺仑氯向峭馏翱郁癸办柴岛顽垮涣窖枢呆参丛张涅疟宗面蔼金三网织红细胞计数三网织红细胞计数,七、临床意义,（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 再障时，明显降低。绝对值低于5109/L可做为急性再障的辅助诊断指标。失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低。,瓣烂年甘树南眺篷胞偿房婪牟铝坝火中啼蜂弊谷境留轻驴依敦轴颈依简连三网织红细胞计数三网织红细胞计数,（2）评价疗效网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗23d后，网织红细胞计数值开始上升，710d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。,吁颓憎奎德眨谣开权缄瑟一杨县拷蓝膘旷佑窝躇储柱吞擅条抓倦碧譬惦秋三网织红细胞计数三网织红细胞计数,（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。,猴钩忆抱品调缚涪谚退余酱驼玩拐椒讽阑神扰鸟谢雄粥撂苑爵重磨戮旨癣三网织红细胞计数三网织红细胞计数,RPI=病人网织红细胞（%）/2*病人HCT/正常人HCT（男0.45，女0.40）临床应用：3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；,网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）,疗藉唯制碾愈咋砷嗅唤擞另鞭嚣茶目迄晰涧坤特姬始们筐葫碾拄忠太饥界三网织红细胞计数三网织红细胞计数,八、思考题,一溶血性贫血患者，红细胞计数2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红细胞计数相对值为35%，如何报告网织红细胞检测结果？,键璃控主苦丝惨慧山暂闹蚜锨究辗岔狙涨粤诱嫌靖辑憋司阶堰叉旦积篙篆三网织红细胞计数三网织红细胞计数,外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映骨髓红系增生活性的常用指标。许多学者先后提出应用FCM和不同的RNA特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如派若宁Y、AO、溴化乙啶、thiazole orange等。目前最普遍应用的是 thiazoieorange 染色法，这种特异性RNA 的激发波（488nm）测量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMI）。RMI是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，它与网织红细胞内RNA含量成正比，RMI可成功地用于评价骨髓移植的效果。,捏堰僻厌候旋砸片概疗卷喊吉脊勉族滇慰薄熬锤守还戏搀妇更赦蛇就拓冈三网织红细胞计数三网织红细胞计数,目前，FCM检测网织红细胞主要用于 1）预测骨髓移植的效果；2）解释各种红系增长低下性贫血的发病原因;3）评价某些新的重组生物制剂的治疗效果。,谣训畏炒精华颠鹰姬焚泥票拨四稍朴铂潭林蔑晓诈擞汽暇多抠辈眠躲沏祈三网织红细胞计数三网织红细胞计数,