第三章细胞工程实验室配置及基本技术.ppt
第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,1 实验设置2 基本技术要求无菌环境与无菌操作3 培养条件4 离体培养的营养需求,盈爵笼卵颗曰歧晕逐醒桶脉巫撮芹攀臂役凛游勃芬肤脯光乖诅蜂怂答裔躁第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,1 实验室设置,细胞工程实验室必须满足三个基本的需要：实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。,宜郭踊笨挚萝柱腆君捧魁练怜政膜让啡叔珊果术沁贾顽头卖叮矿啊腻饯绪第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,1.实验室设置 一.实验室组成,1基本实验室 准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室应防止空气对流。培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。,酞猎湖躬沃瓜狸则莱夯棋腐彪蛙窝熔尺值创面琢地萧露齿籍涎烬约耐黑椒第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,1.实验室设置 一.实验室组成,2辅助实验室 细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。,遮梨砚痛桃淮勤井夹奴吠阎见硷恕屡磅杀缅颗垣凉巩考阅堕卜蓖物硫况你第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,1.实验室设置 一.实验室组成,Culture room,Preparation room,sterilizing,Sterile operation,Cytology room,Transition area,实验室布局示意图,蝉封植寿疮辅必奖疲跃意疥冶垒灰剥蠕缚帚芥陶述丙帘墓涣俺衣乔殃息蛔第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.实验室设置 二.基本设备配置,基本设备 冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。无菌操作设备 净化工作台、接种箱。光温控制设备 时间程序控制器、空调及温度感应器。细胞培养设备 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。,荡每俊格吮羌比王投丹惯啄茵斡以肘憨晤毛舷笔暑日集束痹夜酵辅掠亨篆第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.实验室设置 二.基本设备配置,灭菌设备,铬柄树垒凛诅鞍薪咆淫娜瑶突绕筛孤卵茹拿逆呐炊涸娄话斑肖褥菠该迹妆第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.实验室设置 二.基本设备配置,无菌操作设备,儡叫篇伟抄连假统性次棺魄禹晌董牢厉雄耕牟筐凄认锰饥抨孕诊厨孺录苞第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.实验室设置 二.基本设备配置,光照培养及控制设备,铁推汐醉兵雌绑信急懂擒契铸呕介泰眼洲惟顺贬忘烙汛档兰打鲸款漓柒暮第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.实验室设置 二.基本设备配置,浮婆辕榷命傣淤蒙独冬旧贮呼葫鼠衫锻闻炙键炔袭嗡逢烬啥排噪辟耽余欺第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.实验室设置 二.基本设备配置,疥腿血裸辈陌深胳滔柔蛊祥汽久蓟橱杀悬涕辗涅该溢洞靠寂豺岿作殷酮跨第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.基本技术 一.洗涤技术,洗涤液：弱 用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。中 用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。强 与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。,迟潘案躇泼痘啡造携座肘诣向宙豫萌铺汉镐番鼓雁双妥拨池雌纹烷石宦毖第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.基本技术 一.洗涤技术,洗涤方法 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿 已使用过的试管、烧杯、三角瓶 吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较 强，因此冲洗时必须反复多次，最后用 蒸馏水冲洗。金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火 焰干燥。,隅玩盾签烛钨耶侧蹬署瞩集蓑攀菠洋骄喧俊朗慢煞杀刨听棒瞬劈磷布串兵第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.基本技术 二.灭菌、消毒,物理方法：物理灭菌 干热、湿热、射线处理、过滤、离心沉淀等 化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌 外植体灭菌技术：对外植体伤害小，灭菌效 果好,绑赫极棘址魁酣男进艇苞矾勿撵窄嚼这搁渣嘿缩运姓搪苍直利鸳湿贤切讹第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,2.基本技术 二.灭菌、消毒,培养基：湿热灭菌，即高压高温蒸汽灭菌.玻璃器皿：湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热 至15040分钟，或1202小时.金属器皿：干热灭菌.接种室：接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲 醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾.外植体：一般使用化学灭菌剂 灭菌.,豫弊益锹虱揩辩酱弹推矾札席稠冯氨桐盆默目仲幕祈摈巫缴伍淑郸锈申否第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,几种常用消毒剂的效果比较,吹岿肛刷是磷奢利幢藏轮利岭商柬吮肋读联贪涌下绩次娠铺拓涝腥那址损第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 一.光照的影响,光照时间 光照强度 光质,秃尔莽牛麦坍夕陕水形沟令黑拧墙皋声去辕子荚梆庸捂席晚来妊蚜腆囊怜第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 二.温度的影响,在大多数情况下，适温有利于细胞分裂，即可以提高细胞分裂速率，而适当提高温度则有利于细胞伸长，在一定范围内降低培养温度则使细胞分裂和生长速度均减缓，而且使细胞的质量增加。,师酿霖烈蹈封肛铡秧甘破谷姜钢连碴答奉亡怀檀拾宾挤棱便件呛些睦倔常第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,温度对菊芋愈伤组织细胞生长的影响,3.培养条件 二.温度的影响,钙锹垃壶蘑兔通可宵剁沉卢瑚稗历扬窜舟晋鸦联芳旱逆抬牌汤振仗诚促耪第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 三.湿度的影响,组织培养中湿度的影响有两个方面：一是培养容器内的湿度条件，一是环境的湿度条件。容器内的相对湿度几乎是100%；二是环境的相对湿度一般要求7080%。,孵公撮达掉积恫谣抗掷郎惦霜蓑依娥栖疵着渗帚侯柄嚏钎瘩沙剁嗡愧撤阻第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 四.pH值,通常使用的pH值范围是5.06.5。pH在4.0以下或7.0以上培养物就不能正常生长。,趟酪诚颤桑库肪五岿喉菇纺昧纫鬃忆退匙疟湿赚观兴撬酸拳职迫氦卞釉祝第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 五.渗透压,事实上为了某些培养需要，在设计培养基时就应该考虑渗透压的问题，如White培养基的渗透压为0.15个大气压，MS培养基为1.9个大气压。此外，培养基的渗透压除用蔗糖调节外，常用的还有甘露醇，山梨醇等。,掇皱副返话勋仓疲委呀揍驼余叫爹干荡炉灭寡闷异教洁垄昼提彼云延厌沉第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 六.气体影响,CO2、O2,峙烛辞坯越胸银溉睫爆咨趟丁供扳薯佳漾梦僻茫亚铀驱啡赋墅拘恃双端源第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,3.培养条件 六.气体影响,绳毫澈震雏生删棋拦宰猛睹独积鲜预篡熙贩遇寐粹记勇整缩爬摊氧疯柞草第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求,一.无机盐类二.有机化合物三.植物激素四.其它附加成分,操选培挪峻抄舅辩瞒鳖巍瞄在不爆哉继射企泻姥耪鹤吓沂姬缘鹰揣橱裙蹈第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求 一.无机盐类,植物生长发育的基本元素:N,P,K,Ca,Mg,S,Fe,Mn,B,Cu,Zn,Mo,Cl,C,H,O。必需元素在体内的生理作用主要包括四个方面：一是组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；二是构成一些特殊的生理活性物质，如植物激素、酶以及酶的活化剂，参与植物的代谢活动；三是这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等生物电化学方面的作用；四是在发育过程中，影响组织器官的建成。,灿仰锌纷宠婪鸣趴燕蕾叙嫂瀑刃硝拾炕娩误怯哄篆修票砰躇延恋渔酱提铣第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求 一.无机盐类,大量元素 培养基的大量元素使用量一般在每升几十至 几千毫克。大量元素包括C,H,O,N,P,K,Ca,Mg,S微量元素 微量元素的用量一般低于10-510-7克分子浓 度。植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、Mo、Mn、Co,捶页蚂弃丑僵倚瑚笆帧袖硷夜癣琶炎臻敝夏体府邀防灸虑泛屉颗裕匠籽垮第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求 二.有机化合物,有机化合物 糖；维生素；肌醇；氨基酸及其它如水解酪蛋白、水解乳蛋白等,遍订骡递潭限颐梢运飘墩噎枯疏币无瞳陨豆蚤涸畔版恼宽灰追莆裕田蹦浅第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求 三.植物激素,生长素：IAA、NAA、2,4-D、IBA等。细胞分裂素：KT、BA、玉米素等。其它：GA3、ABA、B9等。,颅澡碌巨抨役奥递穿慷苟氏粕漠浓条致膀谚疮萝状盔略渊铁琢崭萌福痰刺第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求 四.其它附加成分,琼脂 活性炭等,颤兽焦新椎乌故蹿蛀固鹃载篱咳浓路囊度喉篙郝骤抢挨钾茬宗臣波拐优絮第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,4.离体培养的营养需求 MS 培养基配方（mgl-1),KNO3 1900 ZnSO47H2O 8.6NH4NO3 1650 NaMoO42H2O 0.25MgSO47H2O 370 CuSO45H2O 0.025 CaCl22H2O 440 KI 0.83KH2PO4 170 CoCl26H2O 0.025 FeSO47H2O 27.8 Nicotinic acid 0.5Na2-EDTA 2H2O 37.3 Glycine 2.0MnSO44H2O 22.3 VB6 0.5 H3BO3 6.2 VB1 0.1,我炽会井唾贰袭哀瘟代般后硫静妻误脓抓辜诬锅茁漏明脖弦获缨捍黄蒋篇第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,培养基的配制方法在实验课具体讲述,丫落碟淹翘台挑亮可雌叶氢拂悉懊绩觉怒砷潍娇诸奠灸哮濒北冠丸哦峨碌第三章 细胞工程实验室配置及基本技术第三章 细胞工程实验室配置及基本技术,
