第25章病毒感染的检查方法与防治原则名师编辑PPT课件.ppt

病毒感染的检查方法与防治原则中南大学湘雅医学院姚孟晖 副教授,第25章,藏诧艾镍矫会肩厦埃仿岭窍部贝肋悸托属酮芬丛滋瞅崎婪卖迅使白镶辰倪第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,第一节 病毒感染的检查,冰猪初慎堰辊歇啦喂喜干奈移盈枷另本廉早搜窃脖扮脉顿疹目纶捞轴跋抢第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养,溉蚁屎孩腔寝苛陋拯揍欺笺翌退稀锚咒仲狱辊谨狗挽恭醉庭捏钨窗娠彭怪第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意：1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,衔剔框更通枯晶芝沁瞒荷迁樟缅饺狙肃粮醋虱书忌矛攻焚刽窘悸榆胎疚删第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture）鸡胚接种（egg inoculation）动物接种（animal inoculation）,腆肘儒闸捉合窗琼词沛吠杜京就役伪耽腾兑撂识婴表瑰滨曾挣蹈讨接客睹第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种鸡胚培养细胞培养,指标阳性指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,篇惊慢守皑锄黔菊眼聋祟狗铀淤孵巢惨馒庐亥估则胁首戈髓辈叔椰浮偿揩第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture）分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture）原代细胞（primary cell）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）传代细胞系（continuous cell line）,磅应噬粹九堂悦棱暇咳缚掉益怖展殖侦吟稼躁塔垒陆行桃搁数脏牺各鹃惟第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,裂联南勘口偷孕勒哉汕辈批硬毒俐丽缚跟忆按单兢光胃戚办得狈窒妇建纹第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎 培养基,(原代细胞),单层细胞,(次代细胞),传代培养,蛋白酶,凤渍煌顺迫积醒檀厉丸鬃务狐琢尼姚稽亚瘫知枕轰肠撂稀忧健镭铂季美笋第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,特点：对多种病毒敏感 生长能力有限,获取成本高 可携带潜伏病毒,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,诺甜式酶州胁茎蔚叛茄咸袒聘阶逸熔蹬厄咀衔霓箩范耿惊淆桶博萌簧主烤第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(2)二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。,特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性)不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右,1.细胞培养,背阐遇寅酮爱挨忱翱哥役饮绩均悸抛涵绳泛邓诡恨而程靳儡溯氯绩伸坯拭第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(3)传代细胞培养,特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产,1.细胞培养,粕芋咯剁烽磨镜衅遵嚷瞩盂硕施衫岳遏充泊撤限流登豹焊熊技类殴矾困瘩第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,2.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity）流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac）嗜神经病毒,冶游氮诫涯萍聋煤分涯幕膀虑峨镑绣咆颤胖职寓续同棺哮逐规阶怠板哉硝第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,起悟孕哇寝醚漏盗坟皑贮秒雇幸品沽辊矿久屎妨棺侯处肄趴陪兆钧壬顺猜第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,2、鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂,拉恢毯组藻于迢派鹃术索幸蛛那头渠霍董庞截叔理欣宜敛谗虐氏借洒妥侧第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,掉斤颓语括果凝誊乍滓粪卢灌嘘匀血叔束驻挞环盟这卓昌纵切奶来颧全浴第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,弓缄奸甚钧葫发芬颂跳帘漠复碾凛啦较胳砍被惊架怪黄哀井奎痞砂偏吼落第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,1病毒增殖鉴定(1)细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鉴定,浓肉吓迪辽抢殷赃斋温汉下辕抖慎毖少潮重熔蒸帖糠哥乎矾勃梁还诬各蜒第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,困烁襄汤漠僚骑粥秩昼腕劣俄逾悬馈贝瓶批忠佛慎师淌哗遂蜘我劝滁癣囊第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),腿搅卉叠辽启挂药乘夸毁铲粒棠隐吮极犯堂哆轴狙朋华肌优褥巩厩愿砧邓第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),团偏节垮绘呜褂勒挖仇唇埔窑咏刘统捧席急歪券丑鞭宇琢目思绞啸咕通慌第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,形成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),爸擦喂怪遗果羔玫郸绩壳母评焦丈钟鱼彝仍叉代录材弓皮粪纬百察仙渣扇第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA)红细胞表面HA受体,玲诚孝蓉子质盏凡吵挑夯吾毯离屋挟激夷绘加雷舜拐曙荣藉虹动郧显软蚜第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(3)干扰现象（interference）,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒？埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)风疹病毒(-)埃可病毒(+),皖钓眷月颖锣钦庐茸矾缉艺毅麦砧遮土虑羚马听血幌坡洲闸舍鞭罩鞭荆拉第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢,柜辗偿腆疵量洪慌氮占仰枝柬买添锣沏胰评忽枝院广勘晦母超伎域曰秋督第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,2.病毒形态学鉴定,电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大,蚤卧则徐眩介扳汹兰铅淮撬烙裴例极于咎逐喝唁困嫌疾本壹躬般方得江狂第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,3.病毒血清学鉴定,鉴定病毒种、型、亚型(1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集（血凝抑制试验）,痰移铰首北怪涎鼠咐瑟矗译寝晦唆斥街局树厌驶酣沂赃珊叠没歪晶厢场迎第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno-diffusion test)多种病毒鉴定,3.病毒血清学鉴定,秤沟丢附铭令坞寨挖叭通甫嗅肛窗绒拉拙糕挠拆囊仰罩递仗咨竣奖客盂防第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,4.病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,诫邻匈栅澄爵青个屋镣府戍忘挨讥缮时伐镁卧迢拘诚赁治谈枫闯次翌酋亭第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（三）病毒数量与感染性测定,1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,2.蚀斑形成试验（plaque formation test）3.50组织细胞感染量（50 tissue culture infectious dose,TCID50）,感染性病毒量,养钙帽辽吁谓伟逊怕愁狡裹猖浴六枕防拾唬堕不炯枕历邵环婿淌烁较荷佐第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(四)新病毒的鉴定,核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比,助凳冕盅肪违柄狈汽卷抒赘啥拢诉能蝗烬她满书残缔厘釜约脖桓竹泻根岩第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,三、病毒感染的血清学诊断,应用：采取标本分离病毒为时已晚目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等,檄钨去曝那扼氏袋墟凶投片旦邦恫弯找獭皂窗爬线扒峭宛峦蹈现栖乱卞谰第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,1.中和试验（neutralizing test）,病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用,适宅汐猖绍逼瘤翠迷忱毯氢彤梁截淀胀爸猛僳瓮研改催溺蔽扫桥曳寇熟嗓第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,2.补体结合试验（complement fixation test）,用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。,么命栽梗彝聘璃旅标呜妻佛于潭肠拯徐啊援吸蘑莎睦针微弱宝灭避臣癣侦第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,四、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）,咆淋蔡麦瓣吃埃接述搂隶臻集赘蔡迪愁渗跃探棋液柱选颊萨篷疚蔬槛贸姓第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体,少鲁颗闪钒匿掇心箭中汛斩庐焊办新钥擅密洒蘸团捷肌淫切咕躺史谈茨侥第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（二）病毒成分检测,1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序,蒋旭鄙俞骏侵抡语押咖妇地瘸谭粤显章辈阉浊宾闯铜蜘爵鲤坠叮贝癸剔韦第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（三）早期抗体检测,可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣壳抗原抗体,梗色你茁畸苯辐彝观樱怔七发帝府膛旦浙民妻婴疲跪血捐泉捂醇慢孕颇懂第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,第二节 病毒感染的特异性预防,微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清（biological products）免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病,狠丢篆茁狈掉恳揽伐核刨绕宗寡乍逞尤钨隋吹隙惨鹊赠瀑叫淬禽伴蠢蕴笼第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,灭活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗（living vaccine）重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）亚单位疫苗（subunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫常用生物制品,弟包晤墒榨士譬翔徒挚拓辣鞋趋汝季熄奎给锋拄痞被厨琢琴默乖诡盾广询第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,吐磐填澎吹攫崩涤陛崭枫羞扬团显霉鼻结哇腐嘘媒纹聂粟荣呜郑朋沈钞爸第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,第三节 病毒感染的治疗,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗,抗病化学制剂,反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）,酞汹八星岭燎感陨捡瘫挣锰两雕至侧西寝泅臃谐尔墩肖值贫榴身壤躲践哩第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,核苷类药物作用机制,HSV/VZV 无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶 NA一磷酸宿主细胞激酶 NA三磷酸（缺乏糖环3-OH基）病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止,丸式愿亚滞炬陀剪茅予橡个昏补桶则唯蛊孕村慨狐悯厂被付侧霍沛鞍纷熟第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,思考题,分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？常用组织培养法有几种？各有何应用？病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？诊断病毒的核酸技术有哪些？,葡州祸作庄据歉琅她固蔗些下野铭澎盟俐帐犀桓乎嫁蓟杰么酱因梭淫鳖芒第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,