论文资料橙皮膳食纤维的提取研究定稿（word）可编辑.doc

嘉 应 学 院本科毕业论文（设计）（二零一零届）题 目： 橙皮膳食纤维的提取研究 姓 名： 吴泰鸿 学 号： 2050624131 系 别： 生命科学学院 专 业： 生物工程 指导老师： 钟艳梅 申请学位： 工学学士 嘉 应 学 院 教 务 处 制分类号： 学校代号：10582UDC： 密级： 学 号：2050624131嘉应学院生命科学学院本科毕业论文橙皮膳食纤维的提取研究吴泰鸿指导教师： 钟艳梅 科 学科门类： 工学 z 专业名称： 生物工程 申请学位级别： 本科（学士） 论文提交日期： 2010 年5月 论文答辩日期： 2010 年5月 学位授予单位： 嘉应学院 A Thesis Submitted to Jiaying University for Degree of Bachelor of Science Study on the Extraction of the Dietary Fiber of Orange Peel Candidate: Wu taihongSupervisor: Zhong yanmeiMay 2010Department of BiologyJiaying UniversityMeizhou, Guangdong, P. R. China, 514015 摘 要为综合利用脐橙资源，提高脐橙深加工产品的附加值，延长脐橙加工的产业链，本课题以梅州新鲜脐橙橙皮为原料，采用酶与化学试剂结合分离法，对橙皮膳食纤维进行了分离提取的工艺条件研究，同时制备出了可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维，变废为宝，既解决了橙皮渣环境污染的问题，又为今后产业化处理工业橙皮渣做了有益的尝试和探讨，在工艺方面提供了一定的理论依据和参考数据。在单因素试验中，分别研究了碱浓度、盐酸浓度对橙皮膳食纤维得率的影响和碱处理时间、盐酸温度、酸处理时间对橙皮膳食纤维持水力的影响。在此基础上，进行了多因素正交试验，通过极差分析确定出最佳的提取工艺条件。结果表明：橙皮分离提取膳食纤维影响其得率的各因素的主次关系：碱浓度盐酸浓度盐酸温度酸处理时间碱处理时间过氧化氢浓度漂白时间；影响其持水力的各因素的主次关系：盐酸温度酸处理时间碱处理时间盐酸浓度碱浓度过氧化氢浓度漂白时间；其提取的最佳工艺条件为：0.5%的-淀粉酶溶液（固液比为1：5）60水浴1h，碱浓度为0.4mol/L，碱处理时间为30min，过氧化氢的浓度为5%，漂白时间为3.0h，盐酸浓度为0.8mol/L，盐酸温度为60，酸处理时间为50min。关键词： 橙皮，酶与化学试剂结合分离法，膳食纤维，提取工艺条件。AbstractIn order to make full use of orange resources, improve the added value of orange deep-processing products, extend the orange processing industry chain, this subject takes fresh navel orange in Meizhou as raw materials, uses chemical separation of the acid-base method to do the research on orange diet fiber separation of extraction conditions, and prepares a soluble dietary fiber and insoluble dietary fiber. It turns waste into wealth. This research not only can solve the problem of environmental pollution of orange residue, but also makes useful try and exploration for the future industrial treatment of industrial orange residue, and provides a theoretical basis and reference data in the technical aspect. In the single factor experiments, respectively, the concentration of alkali, hydrochloric acid concentration on the yield of orange peel effect of dietary fiber and alkali treatment time, hydrochloric acid temperature, acid treatment time on the orange water retention of dietary fiber. Based on the above experiments, a multi-factor orthogonal experiment is made to analysis and to determine the optimal extraction conditions by range analysis. The results show that: orange peel effect of dietary fiber separation and extraction yield of its primary and secondary relationship between various factors: the concentration of alkali> hydrochloric acid> hydrochloric acid temperatures> acid treatment time> alkali treatment time> hydrogen peroxide concentration of> bleaching time; affect water retention The relationship between the primary and secondary factors: temperature, hydrochloric acid> acid treatment time> alkali treatment time> hydrochloric acid> alkaline concentration of> hydrogen peroxide concentration of> bleaching time; the separation of the optimum extraction conditions were: 0.5% of -amylase solution (solid to liquid ratio of 1:5) 60 water bath for 1h,alkali concentration of 0.4mol / L , alkali treatment time was 30min, the concentration of hydrogen peroxide 5% bleach time was 3.0h, hydrochloric acid concentration of 0.8mol / L, hydrochloric acid the temperature is 60 , acid treatment time was 50min. Key words：Orange peel，Combination of enzymes and chemical reagents separation，Dietary fiber，Extraction conditions目录摘 要 Abstract 1 前言 11.1 研究背景 11.1.1 膳食纤维的定义 11.1.2 膳食纤维的分类及组成 1 1.1.3 膳食纤维的特性和生理作用 3 1.1.3.1 膳食纤维的特性3 1.1.3.2 膳食纤维的生理作用31.1.4 膳食纤维的品种及加工应用 41.2 研究意义 51.3 膳食纤维制备工艺 51.3.1 制备方法 61.3.1.1 粗分离法 61.3.1.2 化学分离法 61.3.1.3 酶试剂法 61.3.1.4 化学试剂和酶结合分离法 61.3.1.5 膜分离法 61.3.1.6 发酵法 71.3.2 提取膳食纤维的工艺流程 72 材料与方法 82.1 试验材料和试剂 82.2 试验仪器 82.3 试验分析方法 82.3.1 试验分析原理 82.3.2 试验分析步骤 92.3.3 -淀粉酶活力的测定102.3.4 -淀粉酶添加量确定102.3.5 纤维持水力的测定 102.3.6 纤维得率的测定 102.4 单因素试验设计 112.4.1 影响膳食纤维提取得率的因素 112.4.1.1 碱浓度的选择112.4.1.2 酸浓度的选择112.4.2 影响膳食纤维持水力的因素 112.4.2.1 碱处理时间122.4.2.2 盐酸温度的选择122.4.2.3 酸处理时间122.5 正交试验设计123 结果分析与讨论133.1 -淀粉酶活力分析133.2 -淀粉酶添加量分析133.3 单因素试验结果与分析 143.3.1 碱浓度对纤维提取得率的影响143.3.2 酸浓度对纤维提取得率的影响143.3.3 碱处理时间对纤维持水力的影响153.3.4 盐酸温度对纤维持水力的影响153.3.5 酸处理时间对纤维持水力的影响163.4 正交试验结果与分析 173.5 讨论 184 结论20参考文献 21致 谢 231前言1.1 研究背景1.1.1 膳食纤维的定义人类社会进入21世纪，社会高度发达，人们生活水平大幅提高，饮食日趋精细，人们对食品的消费观念也发生了变化，对食品要求不仅仅停留在感官、口感上，而是越来越讲究功能性。因此可以相信，21世纪的食品将逐渐以功能性食品为主，而膳食纤维作为一种极其重要的功能性食品基料已成为本领域研究的热门课题。膳食纤维(Dietary fiber) 这一名词是在 20 世纪50年代由 Hipsley提出，到 1972 年 Trowell 等人在测定食品中各种营养成分时定义了膳食纤维，他们认为膳食纤维是 “完全不能被消化道酶所消化的植物成分”。 1979 年第 93 届 AOAC 年会上， Prosky 和Harland提出希望能统一膳食纤维的定义和分类方法，1981年第95 届 AOAC年会上，逾百位学者提出了他们对膳食纤维定义的理解和分类方法，其中大多数认为定义还是由 Trowell 于1974年提出的，即所谓膳食纤维就是那些不能为人体消化道酶所消化的植物细胞残余，其组成有纤维素、半纤维素、木质素、低聚糖、树胶和蜡质类1。膳食纤维是一种天然的有机高分子化合物，一般不易被消化的食物营养素，主要来自于植物的细胞壁，包含纤维素、半纤维素、树脂、果胶及木质素等。膳食纤维虽不能被人体消化吸收，但其在维持人体健康方面有着不可替代的生理作用2，3。自20世纪60年代开始，膳食纤维与人体健康的关系愈来愈被人们所重视，高血压、高血脂、糖尿病、便秘、肥胖症、冠心病等都与膳食纤维的摄入量不足有关4。膳食纤维已经被列为继传统的六大营养素 （蛋白质、脂肪、水、矿物质、维生素、碳水化合物） 之后，能够改善人体营养状况，调节机体功能的“第七类营养素” 5。膳食纤维通过吸收胃肠内的水份，迅速膨胀，使人体产生饱腹感，并且减少肠道吸收糖类、脂类物质，润滑肠道，促进排便，抑制肥胖。由于膳食纤维在预防人体胃肠道疾病和维护胃肠道健康方面功能突出,因而有“肠道清洁夫”的美誉。1.1.2 膳食纤维的分类及组成膳食纤维是一种复杂的混合物，随着来源的不同其组成会有很大的不同，膳食纤维的分类方法众多6。(1) 根据溶解性的不同，可将膳食纤维分为可溶性膳食纤维(SDF)和不可溶性膳食纤维(IDF)两大类。不可溶性膳食纤维是指不被人体消化道酶消化且不溶于热水的那部分膳食纤维，它是细胞壁的组成部分，包括纤维素、半纤维素、木质素、壳聚糖和植物蜡等。可溶性膳食纤维是指不被人体消化道消化，但可溶于温水或热水，且其水溶液又能被其4倍体积的乙醇再沉淀的那部分膳食纤维。它是指植物细胞内的储存物质和分泌物质，另外还包括部分微生物多糖和合成多糖，要组成是一些胶类物质，如果胶、阿拉伯胶、愈疮胶、黄原胶、琼脂等，还有半乳甘露聚糖、葡萄糖、海藻酸钠、梭甲基纤维素和真菌多糖等。(2) 根据化学组成的不同，可将膳食纤维分为，纤维状碳水化合物：纤维素；基质碳水化合物：果胶类物质、半纤维素；填料类物质：木质素。(3) 根据来源的不同，可将膳食纤维分为植物性来源、动物性来源、微生物性来源、海藻多糖类和合成类的膳食纤维。植物性来源的如：纤维素、半纤维素、木质素、果胶、阿拉伯胶、愈疮胶、半乳甘露聚糖等。动物性来源的如：甲壳质、壳聚糖、胶原等。微生物性来源的如：黄原胶等。合成类如：羧甲基纤维素等。其中植物体是膳食纤维的主要来源，也是研究和应用最多的一类。图1-1膳食纤维的分类组成图Fig.1-1The classification diagram of ditary fiber1.1.3 膳食纤维的特性和生理作用1.1.3.1 膳食纤维的特性7（1）持水性：食物纤维具有吸水膨胀的性质，一般水溶性比水不溶性食物纤维持水性强，能形成高粘度的溶胶和凝胶，能抑制营养素在肠道内的扩散速度。 （2）对有机分子的吸附作用：食物纤维能吸附胆汁酸 、胆固醇、变异原物质等有机分 子 ，其中对胆汁酸的吸附能力以木质素较强，纤维素弱些。 （3）与阳离子的结合和交换：食物纤维能与钙、铁、锌等阳离子结合，使钠离子与钾离子交换。 （4）被微生物分解；食物纤维本来是不能被消化酶消化的，但是在大肠能被肠内微生物不同程度地分解、发酵。水溶性膳食纤维儿乎都能被分解，不溶性膳食纤维只能被分解一部分，其它随粪便排出体外。 1.1.3.2 膳食纤维的生理作用8膳食纤维对人体健康有很多重要的生理功能,这已被国内外大量的研究事实与流行病学调查结果所证实。其主要的生理功能概括起来包括以下几个方面：（1）预防便秘与结肠癌，这起因于膳食纤维能使粪便变软并增加粪便排 出量，同时能与肠道内致癌物结合后随粪便排出。纤维还能改变肠内微生物群的构成与代谢，诱导有益的好气菌的大量繁殖。由于膳食纤维的通便作用还有益于肠内压的下降，可预防肠憩室及长时问便秘而引起的痔疮及下肢静脉曲张。(2) 降低血清胆固醇，预防由冠动脉硬化引起的心脏病，这种作用起因于纤维促进了体内血脂和脂蛋白代谢的正常进行。许多研究证实，在脂肪代谢过程中纤维可通过某种作用起到抑制或延缓胆固醇与甘油三酯在淋巴中的吸收 。 (3) 膳食纤维可以改善末梢神经组织对胰岛素的感受性，降低对胰岛素的要求，从而达到调节糖尿病患者的血糖水平。 (4) 膳食纤维可减少胆汁酸的再吸收量，改变食物消化速度和消化道分泌物的分泌量，起到预防胆结石的作用。(5) 膳食纤维的缺乏还与阑尾炎、问歇性疝、肾结石和膀胱结石、十二指肠溃疡和溃疡性结肠炎等疾病的发病率与发病程度有很大的关系 。 (6) 膳食纤维可能还有抗乳腺癌的作用，目前的解释是纤维会减少血液中诱导乳腺癌雌性激素的比率。总之，众多的研究表明，在日常生活中摄入足够量的膳食纤维，不仅可以改善我们的饮食习惯，还可以预防以上的疾病。由于膳食纤维有如此重要的生理作用，目前世界各国都积极的进行研究开发。1.1.4 膳食纤维的品种及加工应用在国外已研究的膳食纤维包括：(1)谷物纤维 ；(2)豆类种子与种皮纤维；(3) 水果蔬菜纤维；(4)微生物多糖；(5)其它天然纤维；(6)合成半合成纤维六大类共 3 0余种9。而目前研究的膳食纤维品种主要有大豆纤维、玉米麸、甜菜纤维、小麦纤维、黑麦纤维、燕麦纤维、小麦麸纤维、大麦麸纤维、米糠纤维、果皮纤维、豌豆麸提取纤维、苋属植物纤维等，尚有大量的膳食纤维需进一步去开发10。80年代开始，强化膳食纤维的功能性食品在欧美、日本等发达国家盛行。在日本，利用可溶性膳食纤维制成的饮料( 包括碳酸饮料、乳酸饮料、果汁饮料等) 是当时开发生产的功能食品之一11。随着膳食纤维研究的深人和多种产品的问世，膳食纤维疗法也开始进入临床。我国在膳食纤维的研究与开发上起步较晚，但我国膳食纤维来源广阔，数量很大：如米糠、麸皮、甜菜渣、酒糟、玉米皮、豆腐渣、山芋渣、苹果渣、柑桔皮、藕渣及魔芋等富含膳食纤维的原料12。经过系列加工制取相应的食物纤维产品，既可开发出直接口服的食疗型纤维制品,又可用作食品添加剂，诸如作为品质改良剂及膳食纤维强化剂添加到酸奶等发酵食品、面包等焙烤食品之中。从我国丰盛的物质资源来看，我们还可以开发出更多的可利用资源，除了农副产品的种皮和外壳之外，还可开发野生植物、海洋生物、藻类、其它一些微生物类以及合成类等等，所以我国膳食纤维的开发前景十分广阔。膳食纤维不仅可以作为食品的添加原料 ,制作成各种主副 、风味以及功能性食品。膳食纤维还可以用来研制成各类可食性包装纸这种可食用纸在食品方面用途很广 ,如考虑着手研究用膳食纤维作速食面的佐料纸 、微波食品包装纸 、糕点的衬纸 、包烤白薯等食品的纸 、烤肉的垫纸等 ,可以大大减少白色污染 ,减少木材和纸张的用量这种纸 ,用水很容易将其溶化 ,亦可直接当作食品还可以研制用压制方法加工成较有韧性的可食用纸 ,或制成板状纸用来包装食品或用高压压制、制成半透明的溶解膜作为药品的胶囊 或利用膳食纤维特有的调节水分功能 ,制成水果、插花的保鲜薄膜，可以利用膳食纤维吸收水分的性能 ,制成特殊的墙纸 ,调节室内的湿度，用膳食纤维的吸水性和蓄水性 ,研制成无土栽培的培养基等等，膳食纤维的确有许多可开发的用途值得我们去进一步研究13。1.2 研究意义目前世界上已经有55个国家和地区的的人口相继进入老龄化，因此西方发达国家无一例外地把老年食品的研究开发提上议程。在美国，今后10年重点开发的20种食品种有13种与老年食品有关。高血压、高血脂、动脉硬化、冠心病、糖尿病、便秘和恶性肿瘤等疾病，由于常见于老年人，故称为老年病。正如前面所述，膳食纤维的缺乏和不足与这些老年病中的绝大多数疾病的发病率和发病程度有很大关系，膳食中足够数量的膳食纤维会保护老年机体免遭这些疾病的侵害。所以，膳食纤维对老年人是非常重要的。我国的城乡居民以植物性食物为主食，一般居民不会缺乏膳食纤维。但近些年来，人们的饮食习惯已经发生了很大变化，大中城市特别是经济比较发达的沿海城市，已经出现了摄入膳食纤维不足的现象，加上脂肪与蔗糖摄入量的增加，肥胖症、糖尿病、动脉硬化、冠心病和恶性肿瘤的发病率有所增加。这些疾病不仅在老年人群中很常见，在中青年人群中也在增加，更可怕的是少年儿童的成人病发病率有所上升，这种情况应该引起我们足够的重视。虽然造成的原因是多方面的，但是膳食纤维摄入量的不足是一个重要的原因。早在1993年2月9日，我国国务院颁发的九十年代中国食物结构改革与发展纲要指出：由于膳食不平衡或营养过剩而造成的“文明病”己经在我国出现，肥胖症、高血脂、冠心病、糖尿病和结肠癌等已经成为危害我国人民健康的主要疾病14。所以，现阶段在我国开展膳食纤维的研究工作，对于提高我国人民的健康水平具有及其深远的现实意义。梅州作为“广东省脐橙之乡”，年产量达2.5万吨以上，经过逐年发展，由零星种植、自给自足的生产模式，逐步向规模化商品化发展，并且开始建造橙汁生产厂，向多元化方向发展。伴随着橙汁的生产，产生了大量的橙皮，橙子榨汁后产生约50%的皮渣，经微生物分解后极易腐烂发臭，严重污染环境。橙皮的处理将成为困扰生产厂家的一大难题，现在普遍采用的方法是将其当做垃圾倾倒，资源浪费严重。若采用现代技术手段将橙皮中的纤维提取精制，分别制备可溶性和不可溶性膳食纤维，既可以进一步提高脐橙深加工产品的附加值，延长脐橙加工的产业链，又能变废为宝，解决环境污染问题。因此，在这种背景下进行膳食纤维的研究和开发工作是一个十分有意义的课题，具有非常明显的必要性和迫切性。1.3 膳食纤维制备工艺1.3.1 制备方法经查阅资料，膳食纤维根据其原料的不同及其产品性质的不同，分离制备的方法大致有6类，即粗分离法、化学分离法、酶试剂法、化学与酶结合分离法、膜分离法以及发酵法15。1.3.1.1 粗分离法粗分离法中的代表方法是悬浮法和气流分级法。这类方法所得到的产品不纯净，但是可以改变原料中各个成分的相对含量，比如降低淀粉含量，增加膳食纤维的含量。所以，本方法只适合于原料的预处理，不能用于制备较高纯度的膳食纤维。1.3.1.2 化学分离法化学分离法是指将粗产品或原料干燥、磨碎后，采用化学试剂提取制备膳食纤维的方法，以碱法的应用最为广泛，除此之外还有酸法、酸碱法、絮凝剂法等。酸碱法提取制备膳食纤维就是分别用一定浓度的酸溶液和碱溶液处理样品，这样得出的膳食纤维纯度比较高。用化学法提取膳食纤维最为简捷快速 , 这也是目前最常用的方法。1.3.1.3 酶试剂法酶试剂法主要是利用多种生物酶制剂处理原料 ,从而获得膳食纤维，生物酶制剂多用-淀粉酶、蛋白酶 、糖化酶和纤维素酶，其工艺流程有多种方法6。1.3.1.4 化学试剂和酶结合分离法采用化学分离法和膜分离法制备的膳食纤维还都含有少量的蛋白质和淀粉，要制备极纯净的膳食纤维，必须结合酶处理。所用的酶包括淀粉酶、蛋白酶等。如果再引入其它酶如半纤维素酶、阿拉伯聚糖酶处理，还可以制备一些活性成分。酶解工艺的优点在于不需要高温、高压，节约能源，操作方便，更可以省去部分工艺和设备，利于环境保护，所以特别适合于原料中淀粉和蛋白质含量高的制备工艺。1.3.1.5 膜分离法利用高科技的膜分离技术,将分子量大小不同的膳食纤维分离提取，由于该法能通过改变薄膜的分子截留量制备不同分子量的膳食纤维 ,并能实现工业化生产 ,所以是最具发展前途的方法。但是由于受到技术水平的限制，目前还不易实现工业化生产。1.3.1.6 发酵法发酵法提取是采用如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌对原料进行发酵 , 然后水洗至中性 , 干燥即可得到膳食纤维。目前该法主要是在果皮原料制取膳食纤维时使用16,17。1.3.2 提取膳食纤维的工艺流程从工业化的角度出发，化学方法操作简便，成本低廉。但采用化学分离法提取的膳食纤维还含有少量的淀粉，要制备较纯净的膳食纤维，必须结合酶处理。所以，我们的研究中选用酶与化学试剂结合分离法。即先用酶水解橙皮中的淀粉，再在酸液和碱液的共同作用下，使其中的果胶、半纤维素和纤维素依次分离。稀酸溶液的加入，可以使果胶类物质与纤维素分离，提高后续产品纯度。碱溶液的加入，使纤维素的链内氢键和糖昔键部分断裂，聚合度及机械强度下降，蛋白质、半纤维素、部分木质素等成分溶解于碱溶液。通过这种处理，分别获得了可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维。橙皮中可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维制备的总工艺流程如图1-2所示。图1-2橙皮制备膳食纤维的工艺流程Fig.1-2 The Process of dietary fiber from orange peel2 材料与方法2.1 试验材料和试剂 橙皮：新鲜脐橙（购于梅州市东厢市场）去果肉后的皮，于6570条件下烘干6个小时，粉碎后过40目筛。 -淀粉酶，生化试剂，北京奥博星生物技术有限公司，活性3700活力单位/克。 氢氧化钠，醋酸，盐酸，95%乙醇，双氧水，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠等，均为国产分析纯。2.2 试验仪器 名称 型号 厂家 恒温箱 PXX-DHS-40X50-BS 上海跃进医疗器械厂高速粉碎机 ZN-200A 长沙市岳麓区中南制药机械厂电热鼓风干燥箱 101A-1 上海市实验仪器总厂可见光分光光度计 722s 上海实博实业有限公司电子天平 FA1604A 上海精天电子仪器厂电热恒温水浴锅 HHS21-4 北京长安科学仪器厂低速大容量离心机 LXJ-IIB 上海安亭科学仪器厂真空干燥机 876-1 上海浦东荣丰科学仪器有限公司 2.3 试验分析方法 2.3.1 试验分析原理脐橙橙皮约占了整个果种30%以上，含有丰富的膳食纤维，其中可溶性膳食纤维的持水力较强，而不可溶性膳食纤维占总膳食纤维的主要部分。特定浓度的酸、碱、醇和醚等溶剂可以溶解膳食纤维中的不同成分，先用醚浸泡除脂，再用一定量酸溶液溶解橙皮中的果胶等可溶性物质，最后用醇提取可溶性膳食纤维；用一定量的碱将碱溶性杂质溶出而除去，再用一定量的酸溶出酸溶性杂质，即可得到不可溶性膳食纤维的含量。2.3.2 试验分析步骤（1）原料预处理 脐橙除去表面的杂物去肉后，测定其水分，以便计算膳食纤维的产率。橙子皮极易腐败变质，需在6570条件下烘干备用。（2）-淀粉酶处理 加入适量的-淀粉酶溶液于橙皮浸泡液中，恒温水浴振荡，用铝箔片将烧杯盖住，在水浴中反应1h18。（3）干燥 将处理后的橙皮进行干燥，干燥条件跟预处理一样。（4）除脂 乙醚浸泡除脂，乙醚的添加量以浸没橙皮为准，密封抽提并经常摇动密闭容器以使得浸提彻底。浸提24h后，压滤除去乙醚，滤饼风干除去残留的乙醚19。（5）水溶性膳食纤维提取加入一定浓度的盐酸溶液（固液比例为1：10），在搅拌状态下，恒温处理一段时间，进行液固分离，固体A进行干燥待用，液体冷却至室温，充分静置后，按照1：4的比例加入95%的乙醇溶液，再次进行液固分离，固体用乙醇溶液洗涤，干燥，粉碎后即得到可溶性膳食纤维。（6）水不溶性膳食纤维的提取将提取水溶性膳食纤维分离后所得的固体A用自来水洗涤至pH=7.0，加入一定浓度的Na0H溶液（固液比例为1：10），搅拌，恒温处理一段时间，将碱溶性杂质溶出除去，然后用自来水漂洗至中性，再用醋酸溶液将pH值调至2.0，加热至60以除去酸溶性杂质，收集滤渣，再漂洗至中性，固体就是不可溶性膳食纤维。（7）漂白 将以上可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维合并得膳食纤维总量，用一定浓度的过氧化氢进行漂白，其固液比为3：1ml/g，漂白一段时间后除去漂白液。（8）干燥 漂白后的膳食纤维放在80条件下的真空干燥机中，进行干燥处理，干燥后的膳食纤维再经粉碎机粉碎过80目筛。2.3.3 -淀粉酶活力的测定20橙皮中的淀粉含量比较多，对试验结果影响较大，所以必需先去除橙皮中的淀粉，为确定-淀粉酶的活力，采用可以分光度计法，测定其分解橙皮中淀粉的能力，以确定-淀粉酶的添加量。吸取20.0ml 0.5%的-淀粉酶溶液和pH6.0的磷酸缓冲液5.0ml于试管中，然后加入到在恒温预热的橙皮混合液中，摇匀，充分反应1h。并迅速于660nm 处用10mm 比色皿测定其吸光值。2.3.4 -淀粉酶添加量确定18 为确保橙皮中的淀粉能够完全被水解，可根据-淀粉酶的活力添加适当的量。取1g可溶性淀粉于三角瓶中，加入10ml蒸馏水，沸水浴中糊化10min。然后，分别加入0.5%的-淀粉酶0.5ml,1.5ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml；恒温水浴中振荡1h后拿出，滴加碘液，观察颜色变化。2.3.5 纤维持水力的测定21称取1g 膳食纤维放入量筒中，然后加入过量20水浸泡纤维1h，将纤维放在滤纸上沥干后，把保留在滤纸上结合了水的纤维转移到一表面皿中称重，计算纤维持水力。 W1W2纤维持水力= ×100% W2式中：W1为纤维湿重(g )；W2为纤维干重(g)。2.3.6 纤维得率的测定22W1×(1r1)纤维得率= ×100%W2×(1r2)式中：W1为纤维重(g ) ；r 1为纤维的水分含量(%)；W2为橙皮重(g)；r2为橙皮的水分含量(%)。2.4 单因素试验设计经过查阅大量资料，影响橙皮中膳食纤维提取得率主要因素有：碱浓度、盐酸浓度；影响膳食纤维持水力的主要因素有：碱处理时间、盐酸温度和酸处理时间20。2.4.1 影响膳食纤维提取得率的因素2.4.1.1 碱浓度的选择碱液浓度对膳食纤维产量的影响非常显著，氢氧化钠溶液可以破坏纤维素与半纤维素之间的氢键。当碱液浓度比较大，对氢键的破坏作用强，使不可溶性膳食纤维的产量得率下降，碱液浓度太小，不容易将其他杂质溶去，影响试验结果23。设定其它六个因素不变，只改变碱浓度。试验条件为：碱处理时间为20min，过氧化氢的浓度为5.0%，漂白时间为3.0h，盐酸浓度为1.5mol/L，盐酸温度为50，酸处理时间为50min，碱浓度为0.5、0.4、0.2mol/L三个浓度梯度。2.4.1.2 酸浓度的选择在提取膳食纤维的过程中，产品的得