黄连素对2型糖尿病大鼠的治疗作用及机制研究(可编辑).doc

黄连素对2型糖尿病大鼠的治疗作用及机制研究 泸州医学院硕士学位论文黄连素对2型糖尿病大鼠的治疗作用及机制研究姓名:戴建峰申请学位级别:硕士专业:药理学指导教师:陈美娟20090401黄连素对型糖尿病大鼠的治疗作用及机制研究摘 要目的:通过观察黄连素对型糖尿病大鼠血糖、血脂、血压、胰岛素敏感指数及主动脉病解的影响,评价其对型糖尿病的治疗作用;通过检测、.、.、脂联素,初步探讨其治疗作用机制。方法:只成年雄性健康大鼠,置于自由饮水的环境中适应性喂养周。采用随机数字表法随机取只作正常对照,喂以标准饲料,余下只大鼠给予高糖高脂饲料,周后,按/一次性腹腔注射链脲佐菌素,周后,测大鼠血压,大鼠禁食后,取血测血糖、血脂、血胰岛素,并计算胰岛素敏感指数,以空腹血糖大于./且伴有胰岛素敏感性降低者尸.确立为型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分成组,即黄连素/组、黄连素./组、优降糖./组、模型组。给药组灌胃给药周,用药期间观察记录饮水量、尿量、进食量,每周称体重次。正常对照组、模型组同时灌服等容量生理盐水。周后测血压,禁食后称体重,处死,心脏取血对空腹血糖、胰岛素、.、.【、血脂、进行检测,并计算,取主动脉弓部进行病理解剖。结果:模型大鼠空腹血糖为./,由对照组./升为./,由对照组./升为./、由对照组.降为.、血压由对照组.升为 .;饮水量:黄连素高剂量组为./只,黄连素低剂量组为./只,优降糖组为./只,与模型组./只比较差异有高度显著性尸.;尿量:黄连素高剂量组为./只,黄连素低剂量组为./只,优降糖组为./只,;饮食量:黄与模型组. ./只比较差异有高度显著性尸.连素高剂量组为./只,黄连素低剂量组为./只,优降糖组为./只,与模型组./只比较差异有高度显著性尸.;黄连素高剂量组为./,黄连素低剂量组为./,与模型组./比较差异有显著性尸.,优降糖组为./.;:黄连素高剂量组为./,与模型组./,黄连素低剂量组为./比较差异有显著性.,优降糖组为./.; 空腹血糖:黄连素高剂量组为./,黄连素低剂量组为 ./,优降糖组为./,与模型组./组比较,除黄连素低剂量组,外差异有显著性尸.及.;:黄连素高剂量组为.黄连素低剂量组为.,优降糖组为.,与模型组.士.比较除黄连素低剂量组外,差异有高度显著性尸.;主动脉弓部,模型组大鼠动脉内皮细胞排列疏松,中膜纤维组织及平滑肌细胞有不同程度增生,胞内可见散在脂肪空泡,优降糖组大鼠、黄连素高剂量组大鼠及黄连素低剂量组大鼠主动脉病变有不同程度减轻;.:黄连素高剂量组为.士./,黄连素低剂量组为./,优降糖组为.士./,与模型组./比较差异有高度显著性尸.;师.:黄连素高剂量组为./,黄连素低剂量组为./,优降糖组为./,与模型组./比较差异有显著性.;:黄连素高剂量组为.肛/,黄连素低剂量组为.,/,优降糖组为.士./,与模型组.“/比较差异有高度显著性氏.;:黄连素高剂量组为.士.“/,黄连素低剂量组为.“/,优降糖组为.士./,与模型组./比较差异有显著性尸.及.。结论:经高糖高脂饲料喂养周后,再经腹腔注射小剂量链脲佐菌素,成功建立型糖尿病大鼠动物模型;黄连素治疗型糖尿病大鼠后,大鼠“三多一少症状明显改善,血糖、血压、血脂明显降低,主动脉病变有所改善,提示其有明显的治疗型糖尿病及并发症的作用,除饮水量外,黄连素高低剂量组之间无显著差异;黄连素治疗型糖尿病大鼠后,大鼠血清、.、.水平明显降低、脂联素水平明显升高,提示其治疗型糖尿病的机制与其影响血清炎症因子水平有关。关键词:型糖尿病;炎症因子;胰岛素敏感指数;黄连素:, , ,一,师 ,.:.,/ , , , , ./ . , / ./ ./ , , , ., ,. ,.,一一, ,仅师【,. .: . /士./,. / ./.五 .士.土./, 一.土.,.士.; :曲.士.士.,. 士 .土.,.土 ., .尸.; : 士. .士., ,.士.,. 士 . ; ,: .士. .士.,.土. .士.,尸. ;: .士. .士./,/, .士. /.,.士. /.;:. . ./,.士. /,.士. ., /.;.士./,:.士./, . 士. /. 士. /,;:尸. . 一. 士.,.士., .,一.土.,; , ,.: .士./, .士./, .士./,.士./ . ;仅:幽.士./, .士./, .土./,.士./ 衅.;: .士., .士./,.士. ,/,.士./ 俨.;:.士./, .士./, .士.卜/,衅. .:.士./,? .?, , , ,., 一,【, .: ; ;英汉缩略词对照表英文缩写 英文全称 中文全称链脲佐菌素 空腹血糖. .白细胞介素.仅、一肿瘤坏死因子.心 ?反应蛋白甘油三酯总胆固醇胰岛素敏感指数脂联素糖尿病纤溶酶原激活物抑制剂高密度脂蛋白胰岛素葡萄糖转运因子脂蛋白脂酶游离脂肪酸 巨噬细胞转移抑制因子低密度脂蛋白受体胰岛素抵抗动脉粥样硬化师 干扰素泸州医学院毕业硕士研究生学位论文独创性声明及发表承诺书本人声明所呈交的学位论文已整理成发表形式是我个人在泸州医学院导师指导下,由导师及泸州医学院提供一切科研条件的情况下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在即将毕业离校之际,本人郑重承诺:该论文将以泸州医学院的名义发表论文作者为研究生及导师,作者所在单位为泸州医学院,并在发表后立即将学位日期本人完全了解泸州医学院有关保留、使用学位论文的规定,即:泸州医学院有权保留并向有关部门或机构送交本人学位论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅,允许有关部门或机构以电子出版物形式出版发行,并对外进行全文内容服务。本人授权泸州医学院可以将本人学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,进行数字化处理汇编、通过网络或其它途径进行交流传播,可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印、扫描或其他复制手段保存和汇编学位论文,即泸州医学院具有本人学位论文的数字化制品复制权、信息网络传播权和汇编权。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库,并通过网络向社会公众提供信息服务。保密口,在?年解密后适用本授权书。本人提交的学位论文属,不保密酉请在以学位论文作者日期:年地址及邮政编:电子信箱:.厶?一刖 舌糖尿病 ,是一类因胰岛素分泌不足、胰岛素作用低下或胰岛素抵抗所引起的糖代谢紊乱,继发脂肪和蛋白质代谢障碍的疾病。持续高血糖是其基本生化特征,也是其并发症发生与发展的主要原因。其临床表现为多饮、多食、多尿、体重减轻。根据年世界卫生组织糖尿病专家委员会制定的分型标准,将糖尿病分为型糖尿病和型糖尿病。型糖尿病主要是由于胰岛细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏,常表现为依赖或需要胰岛素的治疗。型糖尿病的特点是胰岛素分泌减少或胰岛素相对不足及胰岛素缺陷,一般不需要依赖胰岛素的治疗。其中型糖尿病占发病的%。糖尿病的患病人数在迅速增加,目前全球的糖尿病病人约亿,预计到年可达亿,新增加的糖尿病患者约/或/在发展中国家。年我国省市万人口调查,糖尿病患病率为.%,年中国居民营养与健康状况调查,我国大于岁人群糖尿病患病率为.%,据估计,目前我国有糖尿病病人约万,.约占世界糖尿病病人总数的/,每年还以万人的数目递增。据卫生部的统计数据,年这年中,我国糖尿病的病死率已从.%上升到.%。与非糖尿病人群相比,糖尿病人群中动脉粥样硬化性疾病的患病率高,发病年龄较轻,病情进展较快,多脏器同时受累较多。糖尿病人群心、脑血管患病率为非糖尿病人群的倍,糖尿病性足坏疽为倍,心肌梗死率的患病率高倍。型糖尿病的病因尚未完全阐明,目前公认糖尿病是一种在环境因素如生活方式的改变的作用下由多个基因分别或相互作用所导致的复杂遗传病。目前有关型糖尿病易感基因的报道较多,主要集中在、及号染色体,如等【发现 、项坤三等【】发现.上的钙激活蛋白酶基因与型糖尿病有关。近年来有研究表明,型糖尿病是一种细胞因子介导的低度炎症性疾病和人自然免疫性疾病,其血清炎症标志物水平明显增高【卅,研究涉及的炎症标志物有:反应蛋白、肿瘤坏死因子.、白介素.、纤溶酶原激活物抑,型糖尿病时持制剂.、脂联素、瘦素、干扰素.等续的慢性炎症使免疫细胞、脂肪细胞等产生大量.、.,并促成肝脏合成大量炎症急性期产物,增高的炎症因子与糖尿病发病及并发症的相关机制是炎症因子可通过抑制葡萄糖转运蛋白导致高胰岛素血症,诱发胰岛素抵抗,加重糖尿病及其大血管并发症【】过量炎症因子可直接干扰细胞胰岛素信号转导,引起胰岛素抵抗【炎症触发氧化应激并使脂肪细胞产生过多游离脂肪酸,均可致细胞凋亡。血清增高可致血管内皮损伤,促进早期动脉粥样硬化发生;还可促进糖化和终末产。物修饰血管壁蛋白,引起血管壁增厚和弹性下降,导致血管并发症发生【故是目前研究最多的与心血管病、型糖尿病发病相关的炎症标志物,与胰岛素抵抗、糖尿病发生,发展及血管并发症密切相关。由于病因尚未完全阐明,型糖尿病尚无根治药,西医目前常采用饮食、运动疗法及抗糖尿病药物磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类、【.葡萄糖苷酶抑制剂、瑞格列奈、胰岛素等,可降低血糖,仅噻唑烷二酮类可改善胰岛素抵抗,长期服用副作用大,故寻找低毒、疗效肯定的中药,中西结合治疗本病,既要降血糖,同时又能减少并发症,降低病死率是今后的发展方向。中医称本病为“消渴病,是指以烦渴引饮、消谷善饥、小便频数、如脂、形体消瘦为特征的疾病。认为其病机为“阴虚为其发病的实质,气虚为其不愈之症结,血瘀为其合并症的关键,阴阳两虚是其发病的趋势。治疗总原则是泻火、生津、滋阴、补肾、化瘀、通络【 。众多的中药复方及单方治疗本病可能的机制有:刺激胰岛细胞分泌胰岛素抑制【细胞分泌胰高血糖素增加胰岛素及肾上腺素作用抑制糖异生关键酶,刺激葡萄糖激酶合成改善胰岛素抵抗降脂、抑制血小板聚积、减缓微血管病变、提高机体免疫力等,从多环节作用于机体,发挥整体调节作用,对重症者降糖作用不及西药,但对轻症及慢性并发症的防治有其独到之处,且较少或无毒副作用,如范氏的糖宁五号、彭氏的四五六饮治疗型糖尿病疗效较好,对单味药研究以黄连生物碱的研究最多,疗效确切,黄连用于本病自古有之,可单用,可合用,研究证实的作用机制有抑制糖异生,促进糖酵解且抗升血糖激素作用而产生降糖作用促进胰岛细胞再生和分泌增强白细胞吞噬功能清除氧自由基扩张外周血管,抑制。受体,改善微循环降脂、抗血小板聚积。结合目前最新的型糖尿病发病的慢性炎症学说,炎症因子尤其、.、.【具代表性是与胰岛素抵抗、糖尿病发生,发展及血管并发症密切相关,而目前尚未见国际国内有直接研究黄连生物碱在型糖尿病中作用于炎症因子的报道。故提出黄连素对型糖尿病大鼠治疗作用及对血清、.、.【、脂联素的影响研究。拟采用喂以高糖高脂饮食并腹腔量注射链脲佐菌素复制型糖尿病大鼠模型,主要以空腹血糖大于./且伴有胰岛素敏感性降低.判断模型是否成功;观察黄连素对大鼠的体重、尿量、饮水、进食、血糖、血脂、血压、血胰岛素及主动脉病解的影响,评价其治疗型糖尿病的作用;观察黄连素对大鼠血清、.、.【、脂联素的影响,初步探讨其作用机制。为进一步揭示型糖尿病的发病机制提供实验依据、为寻找治疗型糖尿病的中药新药提供实验依据,为黄连素的进一步开发利用奠定基础。材料与方法实验动物雄性大鼠只,体重士,级合格动物,合格证号:川实动字第号,由泸州医学院实验动物中心提供。主要实验药品及试剂.主要实验药品黄连素:临用时配成浓度为.%和.%的混悬液供试验用,由四川康特能药业有限公司生产,批号:;优降糖:天津太平洋制药有限公司生产,临用时配成浓度为.%的混悬液供试验用,批号:。.主要试剂胆固醇:购自郑州利伟生物实业有限公司,批号:;胆酸钠:郑州利伟生物实业有限公司生产,批号:;反应蛋白放射免疫测定药盒,购自原子高科股份有限公司;批号:;碘】白细胞介素.放射免疫分析药盒,购自北京普尔伟业生物科技有限公司;批号;碘】肿瘤坏死因子.【放射免疫分析药盒,购自北京普尔伟业生物科技有限公司;批号;脂联素试剂盒,购自上海卓康生物科技有限公司;批号碘胰岛素放射免疫分析药盒,购自北京普尔伟业生物科技有限公司;批号;链脲佐菌素,美国公司产品,批号:。主要实验仪器超越.型血糖仪 北京怡成生物电子技术有限公司全自动生化分析仪一一日本日立.恒温孵育箱?重庆四达实验仪器厂酶标仪 上海科华生物工程股份有限公司.轮转式切片机一德国公司倒置相差显微镜一?日本公司微量移液器 法国公司.型智能放免咖马测量仪一一上海核所日环光电仪器有限公司实验方法.型糖尿病大鼠模型的建立适应性喂养周后,从只雄性大鼠中随机抽取只为正常对照组,其余只用作造模。正常对照组给予标准大鼠饲料喂养,其余大鼠给予高糖高脂饲料猪油%,蔗糖%,胆固醇.%.胆酸盐%,常规饲料.%喂养。周后,造模大鼠空腹小时腹腔注射小剂量链脲佐菌素/用前以.的./枸橼酸缓冲液配成%的浓度,正常对照组仅注射相同剂量的枸橼酸缓冲液作为对照。周后,测大鼠血压,大鼠禁食后,取血测血糖、血脂、血胰岛素,并计算胰岛素敏感指数,主要以空腹血糖大于./且伴有胰岛素敏感性降低者.判定为型糖尿病大鼠成功模型。.动物分组、给药将成模的型糖尿病大鼠随机分为模型组、优降糖./组、黄连素/剂量组和黄连素./剂量组。各给药组灌服相应剂量的药物,正常对照组、模型组同时灌服等容量生理盐水。组均每天灌胃一次,连续周。.型糖尿病治疗作用指标试验过程中观察记录大鼠的体重、尿量、饮水、进食、血压;处死大鼠后测定血糖、血脂、血胰岛素,主动脉弓部作病理切片。血压测量:大鼠适当固定,用小型热风机给大鼠尾部加热,以扩张局部血管。将血压计的压脉套至大鼠尾部近心端处,高敏脉搏换能器置于尾巴中上/处,换能器表面对准尾巴腹侧,用尼龙扣带固定,松紧以换能器用手推不动为好。待大鼠一时性扰动过后打开记录系统,可见有脉搏波出现注意区分脉搏波还是其他干扰波,调节放大器敏度使脉搏波足够大,一般以为宜,用充气球使压脉套内的压力升高到脉搏波完全消失再加压升高,然后通过充气球阀门缓慢放气,逐渐减低压脉套内压力,从开始放气到管道内压力为一般维持时间秒钟。仔细观察脉搏波从被阻断到再次出现第一个波的时间,这第一个波出现时所对应的压力即为收缩压。血糖检测:尾尖用%的药用酒精消毒后剪尾取血,用超越.型血糖仪检测血糖。血脂检测:各组大鼠心脏取血,置。恒温水浴箱水浴分钟,转/分台式离一机离心分钟,取上清液,由全自动生化分析仪检测、。胰岛素放免法检测:按下表操作表胰岛素检测单位:.标准品 混匀标本 抗血清 混匀,。温育 分离剂 .小时,任管取三管测总.末管 温育标本管 半小时混匀,室温放置分钟,离心转/分分钟,吸去上清液,测各管沉淀的放射性计数。制备病理切片:取大鼠,%戊巴比妥钠腹腔注射/麻醉,打开胸腔,取主动脉弓部放于%甲醛中固定小时。脱水后用石蜡包埋、切片,经二甲苯脱蜡× ,%乙醇洗去二甲苯,%、%、%乙醇各,自来水洗,苏木精染色,自来水洗,%盐酸酒精分色,自来水洗,%氨水返蓝,自来水洗,伊红染色,自来水洗,%、%、%乙醇各脱水,%乙醇脱水,二甲苯×,中性树脂封片。.治疗作用机制相关指标给药周后,检测大鼠血清、.、.仅、脂联素。放免法检测:按下表顺序加样:表 检测单位:“”标准管 非特异 标准管 样品管义励管管剂“”标准标准品样品.抗体充分摇匀后,温育分钟 分离试剂充分摇匀后,室温放置分钟后转/分离心分钟,弃上清液后,测总及沉淀物放射性计数.秒。白介素放免法检测:按下表操作:.表加液程序“一 试剂 样品一缓冲液?一标准液待测样品抗血清.充分混匀放置分离剂充分混匀,室温放置,离心,吸弃上清液,测各管沉淀数肿瘤坏死因子.【放免法检测:按下表操作:?表 加样程序肛一 试剂 样品缓冲液 标准液一待测样品抗血清? 充分混合,放置 分离剂充分混匀,放室温,离心,吸弃上清,测各管沉淀数脂联素酶标检测:将试剂盒内各试剂取出,室温放置至少分钟。冻存血清样品平衡至室温。将浓缩洗涤剂置于。恒温孵育箱中孵育分钟后,与蒸馏水:倍稀释使用。取出酶标板,依照次序对应分别加入.的标准品于空白微孔中。分别标记样品编号,加入.样品于空白微孔中。在标准品孔和样品孔中加入的酶标记溶液,混匀秒钟。±孵育反应分钟。用稀释后洗涤剂洗板次,每次静置.秒钟。每孔加入底物、液各.。亘下避光孵育反应分钟。每孔加入.终止液,终止反应,混合秒钟,确保所有蓝色孔变为黄色,分钟内用酶标仪在处读值。.统计方法计量资料以均数士标准差土表示,采用.软件统计分析,组间差异采用单因素方差分析,.为差异有显著性。挂 电当口 木型糖尿病大鼠模型建立型糖尿病造模组经过周高糖高脂饲料喂养及腹腔注射小剂量链脲佐菌素/后除去死亡的大鼠外死亡率:.%,死亡原因可能与剂量略偏大造成大鼠血糖偏高有关,剩余大鼠的血糖、胰岛素、血脂均明显升高见表、表,并且出现多饮,多食,多尿,体重减轻三多一少症状见表,精神萎靡不振,毛发无光泽,反应迟缓。表造模后正常对照组与造模组血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数比较历,注:与正常组比较.;:与正常组比较. .,尸.:表造模后正常对照组与造模组血压、血脂比较、注:与正常组比较.;:与正常组比较. .尸.: 表造模后正常对照组与造模组饮食、饮水、尿量、体重比较, 注:与正常组比较.;:与正常组比较. .尸.:对型糖尿病的治疗作用.大鼠的症状变化药物干预周后,大鼠的型糖尿病三多一少明显改善见表。表药物干预后正常对照组与造模组饮食、饮水、尿量、体重比较,注:与正常组比较.; :与正常组比较.;?:与模型组比较.; :与模型组比较.:与优降糖组比较., :与优降糖比较.;:与黄连素高剂量组比较.,:与黄连素高剂量组比较.。 .,.: ;.,. :. ;.,.? ? 尸.大鼠空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素敏感指数变化模型组大鼠空腹血糖与正常组相比明显升高,差异有高度显著性.;优降糖组与模型组相比血糖明显降低,差异有高度显著性.,与正常组相比,差异无显著性.;黄连素高剂量组与模型组相比血糖明显降低,差异有显著性尸.,与正常组相比,差异有显著性.;黄连素低剂量组与模型组相比,差异无显著性尸.,与正常组相比,差异有显著性尸.。各药物治疗组之间比较:优降糖组大鼠空腹血糖与黄连素高剂量组相比,差异有显著性尸.,与黄连素低剂量组相比差异有显著性氏.;黄连素高剂。量组大鼠空腹血糖与黄连素低剂量组相比,差异有显著性尸.模型组大鼠空腹胰岛素与正常组相比明显升高,差异有高度显著性尸.;优降糖组与模型组相比空腹胰岛素明显降低,差异有高度显著性尸.,与正常组相比,差异无显著性胗.;黄连素高剂量组与模型组相比空腹胰岛素明显降低,差异无显著性胗.,与正常组相比差异有显著性.;黄连素低剂量组与模型组相比空腹胰岛素有所。降低,但差异无显著性尸.,与正常组相比,差异有显著性尸.各药物治疗组之间比较:优降糖组大鼠空腹胰岛素与黄连素高剂量组相比,差异有显著性.,与黄连素低剂量组相比差异有显著性尸.;黄连素高剂量组与低剂量组相比差异有显著性.。模型组大鼠与正常组相比明显降低,差异有显著性.;优降糖组与模型组相比明显升高,差异有高度显著性.,与正常组相比,差异无显著性胗.;黄连素高剂量组与模型组相比明显升高,差异有高度显著性.,与正常组相比差异有显著性尸.;黄连素低剂量组与模型组相比胰岛素敏感指数差异无显著性.,与正常组相比,差异有显著性尸.。各药物治疗组之间比较:优降糖组与黄连素高剂量组相比,差异有显著性.,与黄连素低剂量组相比差异有显著性.;黄连素高剂量与低剂量组相比差异有显著性尸.见表。表 型糖尿病大鼠各组空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素敏感指数相关指标 ,注:与正常组比较.; :与正常组比较.;卑:与模型组比较.: :与模型组比较.:与优降糖组比较., :与优降糖比较.;:与黄连素高剂量组比较.,:与黄连素高剂量组比较.。.,: .;:?.,.;., ., ? 尸.大鼠血脂、血压的变化模型组大鼠与正常组相比明显升高,差异有高度显著性尸.;优降糖组与模型组相比降低,但差异无显著性尸.,与正常组相比,差异有高度显著性尸.;黄连素高剂量组与模型组相比明显降低,差异有显著性尸.,与正常组相比,差异有高度显著性.;黄连素低剂量组与模型组相比降低,差异有显著性.,与正常组相比,差异有显著性尸.。各药物治疗组之间比较,差异均无显著性尸.。模型组大鼠与正常组相比明显升高,差异有高度显著性尸.;优降糖组与模型组相比差异无显著性尸.,与正常组相比,差异有显著性.;黄连素高剂量组与模型组相比明显降低,差异有显著性.,与正常组相比,差异有显著性.;黄连素低剂量组与模型组相比明显降低,差异有显著性.,与正常组相比,差异也有显著性尸.。各药物治疗组之间比较:优降糖组与黄连素高剂量组和低剂量组相比,明显升高,差异有显著性尸.;黄连素高剂量组与低剂量组相比,差异无显著性尸.。见表。表大鼠总胆固醇和甘油三酯的变化:与正常组比较.;注:与正常组比较.;:与模型组比较.掌:与模型组比较.;:与优降糖比较.;:与优降糖组比较.,:与黄连素高剂量组比较.,:与黄连素高剂量组比较.。.,.;: . :幸.,. ;.,., ?各组大鼠血压差异均无显著性.。见表。表大鼠血压的变化注:与正常组比较.; :与正常组比较.;?:与模型组比较.; :与模型组比较.:与优降糖组比较., :与优降糖比较.;:与黄连素高剂量组比较.,:与黄连素高剂量组比较.。: .,.;谢 叮.,. :., ;谢 .,曲一 尸.大鼠主动脉病理变化主动脉弓,光镜下可见正常对照组大鼠主动脉内膜光滑完整,主要由单层排列的内皮细胞组成,中膜平滑肌斜形排列,外膜可见少量平滑肌细胞和神经、血管等;模型组大鼠动脉内皮细胞排列疏松,中膜纤维组织及平滑肌细胞有不同程度增生,胞内可见散在脂肪空泡;优降糖组大鼠、黄连素高剂量组大鼠及黄连素低剂量组大鼠主动脉病变有不同程度减轻见图。,:薅誊鬟爹、,?一一:¨:; .,、.一:”.,.,“ :。:,.?: .:一,.:一乙吣:一、.:、?一图模型组大鼠主动脉弓病理学改变染色髓、;盘;.图优降糖组大鼠主动脉弓染色×忸图黄连紊高剂量组主动脉弓病理学改变染色日。.二。:.,.。:一?.;.:. .?:.:.,.、,:奄:?之.;:;一:了:.:。二,二图黄连素低剂量组大鼠主动脉弓病理学改变染色%。机制相关指标变化、几.、吓的变化模型组大鼠与正常组相比明显升高,差异有高度显著性.经优降糖治疗后,与模型组相比【降低,差异有显著性,与正常组相比,差异有高度显著性. ;经黄连素高剂最组治疗后,与模型组相比降低,差异有显著性.,与正常组相比,差异有高度显著性 ;经黄连索低剂量组治疗后,与模型组相比.降低,差异有显著性 ,与正常组相比,差异有高度显著性 。各药物治疗组之间相比,差异无显著性。模型组大鼠与正常组相比明显升高,差异有高度显著性叭;经优降糖治疗后,与模型组相比明显降低,差异有高度显著性尸 ,与正常组相比,差异有显著性.;经黄连素高,剂量组治疗后,与模型组相比明显降低,差异有高度显著性与正常组相比,差异有高度显著性尸 :经黄连素低剂量组治疗后,与模型组相比明显降低,差异有高度显著性川,与正常组相比,差异有高度显著性氏.。各药物治疗组之间相比,差异无显著性.。模型组大鼠.与正常组相比明显升高,差异有高度显著性尸.;经优降糖治疗后,与模型组相比.明显降低,差异有高度显著性尸.,与正常组相比,差异有高度显著性尸.:经黄连素高剂量组治疗后,与模型组相比.明显降低,差异有高度显著性尸.,与正常组相比,差异有高度显著性尸.:经黄连素低剂量组治疗后,与模型组相比.明显降低,差异有高度显著性尸.,与正常组相比,差异有高度显著性氏.。各药物治疗组比较:优降糖组与黄连素高剂量组相比,差异无显著性胗.,与黄连素低剂量组相比,.明显降低,差异有显著性.;黄连素高剂量组与低剂量组相比,.明显降低,差异有高度显著性.。见表。表大鼠反应蛋白、白介素和肿瘤坏死因子【的变化 ,注:与正常组比较.; :与正常组比较.;?:与模型组比较.; :与模型组比较.:与优降糖组比较., :与优降糖比较.;:与黄连素高剂量组比较.,:与黄连素高剂量组比较.。.,尸.: ; 幸.,. :.;., ., ? 尸.大鼠脂联素的变化模型组大鼠与正常组相比明显降低,差异有高度显著性.;经优降糖治疗后,与模型组相比升高,差异有显著性尸.,与正常组相比,差异有高度显著性.;经黄连素高剂量组治疗后,与模型组相比明显升高,差异有高度显著性.,与正常组相比,差异有高度显著性.;经黄连素低剂量组治疗后,与模型组相比升高,差异有显著性.,与正常组相比,差异有高度显著性.。各药物治疗组之间相比,差异无显著性尸.。见表。表大鼠脂联素的变化注:与正常组比较.; :与正常组比较.;?:与模型组比较.; :与模型组比较.:与优降糖组比较., :与优降糖比较.;:与黄连素高剂量组比较.,:与黄连素高剂量组比较.。 .,尸.: ;. :?.,., ; ., ?尸.论讨型糖尿病是从胰岛素抵抗为主伴胰岛素相对不足到胰岛素分泌不足为主伴胰岛素抵抗的病理过程。型糖尿病的病因尚未完全阐明,目前公认糖尿病是一种在环境因素如生活方式的改变的作用下由多个基因分别或相互作用所导致的复杂遗传病。近年来越来越多的证据证明炎症在胰岛素抵抗和胰岛细胞损伤的发生过程中起至关重要的作用。型糖尿病发病机制与炎症因子的关系是当前研究的热点。型糖尿病动物模型胰岛素抵抗是型糖尿病的主要始发因素,贯穿于型糖尿病发生、发展的全过程。动物是否发生胰岛素抵抗是区分型和型糖尿病动物模型的关键。建立理想的动物模型在型糖尿病研究中起着至关重要的作用。目前还没有一个完全统一的糖尿病模型分类标准,一般分为自发型、实验型和转基因型糖尿病模型三类。. 自发型型糖尿病模型未经任何有意识的人工处理,在自然状态下发生或通过遗传育种培养而保留下来的,以高血糖伴胰岛素抵抗为主要特征的糖尿病动物称为自发型型糖尿病模型。目前用于研究型糖尿病的自发型动物模型有小、鼠?、小鼠、肥胖大鼠黑线仓鼠 、大鼠. 、嗜,和沙肥鼠 ?大鼠。自发型型糖尿病动物因其来源相对较少,饲养、繁殖条件要求高,动物昂贵等缺点,限制了其在科学研究中的应用和普及。目前多应用实验性型糖尿病动物模型来进行糖尿病防治的研究。.实验性型糖尿病动物模型用各种物理或化学方法损伤胰脏或胰岛细胞导致胰岛素缺乏,或用各种拮抗剂对抗胰岛素的作用,均可因其实验性糖尿病或实验性高血糖。如外科手术性、免疫性、病毒性、激素性和化学药物性糖尿病等,是应用于药理学研究的经典方法。由于药物诱导的糖尿病模型具有发病率高、造模时间短、发病时间整齐和病情严重程度较统一等特点,近年来已成功诱导出类似人类型糖尿病的动物模型,提高了研究结果的实用价值。.单纯高脂高糖饮食诱发的型糖尿病给实验动物过量的食物如高蛋白、高脂、高糖饮食,可使动物胰岛细胞负荷过重而发生萎缩,从而引起糖尿病,建立伴胰岛素抵抗的高血糖动物模型。张丽锋等【】给予大鼠脂肪热比为%的饲料,喂养周,等【给予大鼠高糖饮食周,席守引等以高脂高蔗糖饲料喂养贵州小香猪个月,动物都出现胰岛素抵抗。.高脂高糖饮食联合化学药物诱发的型糖尿病链脲佐菌素、四氧嘧啶、环丙庚哌和水合阿脲,其中应用最为广泛的是。是一种广谱抗生素,具有抗菌、抗肿瘤作用及诱导糖尿病的不良反应。的分子结构有一个高活性的葡萄糖侧链,使胰岛细胞对其进行错误性识别,并进入细胞内,其余部分则是的毒性基团,对胰岛细胞产生毒性作用,破坏细胞,研究表面胰岛细胞的凋亡在糖尿病的发生和发展中起着非常重要的作用【。高脂高糖饲料喂养诱导出胰岛素抵抗后,腹腔或尾静脉注射低剂量可制备出较为可靠的伴胰岛素抵抗的糖尿病模型大鼠。施红【、郭啸华先后采用高脂高糖饲料喂养,然后腹腔注射低剂量的,成功制备出糖尿病大鼠模型。洪丽莉等【选大鼠,先喂以高脂高糖饲料周,同时饮%的果糖水,导致胰岛素抵抗,继以小剂量/腹腔注射次,周后诱导建立型糖尿病模型。先给予注射低剂量的,然后加喂高热量饲料也可建立型糖尿病大鼠模型。刘欣秋等【】在实验中采用这种方法,周后建成型糖尿病大鼠模型。.转基因型型糖尿病胰岛素信号转导是一个复杂的过程,将胰岛素信号转导通路中的某个基因敲除或用/系统与基因打靶技术相结合,可以得到组织或细胞特异性靶基因被敲除的动物模型。如.小小鼠表现为胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足不能引起巨细胞代偿性增生,无法对抗胰岛素抵抗,从而引发型糖尿病,但单个巨细胞胰岛素分泌正常甚至升高。综上所述,不同类型型糖尿病模型各有其优点和缺点。腹腔或静脉注射复制型糖尿病的方法操作简单,但所需时间比较长,结合本校实验条件,本试验采用高糖高脂饮食联合化学药物的方法造模,以缩短模型出现时间,提高模型成功率,从大鼠血糖、饮水量、饮食量、尿量、体重、血压、血脂指标证明造模成功,具有高血糖、高血压、高血脂、胰岛素抵抗、大血管病变的特点。对型糖尿病大鼠的治疗型糖尿病严重影响着人类的健康、生活质量及生命安全,其基本病理是胰岛细胞分泌胰岛素相对不足,引起糖代谢紊乱,导致一系列慢性病变,如高脂血症、心脑血管病、外周血管性疾病、高血压等。现代治疗观点已从已往的单纯控制血糖转为降糖、降脂、降压、改善胰岛素抵抗等多环节治疗,中药在此方面显示了优越之处。.对“三多一少”的改善血糖升高会因渗透性利尿作用而引起多尿,体内水分丢失,病人口渴思饮,饮水量明显增加以补充体液;由于胰岛素不足,肝糖原和肌糖原贮存减少,细胞摄取和利用葡萄糖不足,大部分葡萄糖随尿排出,体内缺乏能源,病人常感饥饿感、多食,以补偿丢失的糖分;由于葡萄糖不能被利用,脂肪和蛋白质消耗增多,引起乏力和体重减轻。遂出现“三多一少”的症状。本研究结果显示:模型组大鼠有“三多一少”的症状,经黄连素高低剂量组治疗后症状均明显改善,除饮食量优降糖组优于黄连素高剂量,饮水量优降糖组和黄连素高剂量组优于黄连素低剂量组外,其余各给药组之间作用大致相当。.降糖作用高血糖可降低粒细胞的粘附功能、趋化功能和吞噬作用使机体的免疫功能降低;干扰线粒体的代谢途径,超氧化物和氧自由基产生增加。严重高血糖,当血糖./,可使细胞内严重脱水,导致意识障碍、癫痫样抽搐、颅内出血和中枢性高热等神经系统损伤,病情加重,病死率增高。本研究结果显示:经黄连素高低剂量组治疗后,血糖均有所降低,但其作用弱于优降糖,黄连素两剂量组间降糖作用无显著差异,说明黄连素有明显的降血糖作用,其机制可能是通过抑制肝脏的糖异生和/或促进外周组织的葡萄糖酵解而产生降血糖作用。.降脂作用糖尿病患者常伴脂代谢紊乱,这也是其合并心、脑等大血管合并症的重要原因之一,而后者又是糖尿病致死、致残的主要原因。因此纠正糖尿病患者脂代谢紊乱,有助于防治大血管合并症的发生与发展。本研究结果显示:各给药组降低作用大致相当,黄连素高剂量组和低剂量组降低的作用优于优降糖组,但黄连素高剂量组和低剂量组之间无显著差异。黄连素降脂作用可能是其明显升高肝脏超氧化物歧化酶活性,降低肝脏过氧化脂质水平,提高机体抗氧化及清除自由基能力,促进脂类的代谢而显著降低糖尿病大鼠的血脂水平【”。.胰岛素抵抗改善作用胰岛素抵抗是指机体组织或靶细胞对胰岛素的作用缺乏正常反应,即其敏感性和反应性降低的一种病理生理状态,表现为外周组织尤其是肌肉、脂肪组织对葡萄糖的利用障碍。早期胰岛细胞高能代偿性地增加胰岛素分泌以弥补其效应不足,但久而久之胰岛素细胞的功能会逐渐衰竭,导致糖耐量异常和糖尿病发生。本研究结果显示:优降糖组与模型组相比胰岛素敏感指数明显升高,差异有显著性.,黄连素高剂量组与模型组相比胰岛素敏感指数明显升高,差异有显著性尸.,黄连素低剂量组与模型组相比胰岛素敏感指数明显升高,差异有显著性尸.。其中优降糖组大鼠胰岛素敏感指数与黄连素高剂量组相比,差