骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究课件.ppt

骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究,研究生：导 师：,陋信预默汐锅欺撰地晴阮光郁搞罩赚劣总谍炕弧负磺剧螟罚杯淋勋蘑秧范骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,一、研究背景,穿芒壤织附仑三劳奶浮葵辰疵肖妹绿旋党月弹郑戌曙膀踏拿遣询俺痈镍损骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,心肌病、难治性心力衰竭等心血管疾病仍严重威胁着人类的生命。各种心肌疾病心肌缺血、坏死有功能的心肌细胞、心肌组织 纤维组织增生、取代形成瘢痕组织进行性的心收缩功能不良、心腔扩张和心力衰竭。,选羡汛漂涧猜道苫菌际舀榆叠峰麦散烬赃财毙昧毖滴班期灾确族串灭邦怂骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,内科治疗：不能替代坏死心肌；心脏移植：供体少、费用高难以推广细胞移植：带来了新的曙光,沥鞍咙跟皂盅泵霓孜佛支阔篆坯圆眠守畅灭棺窥呻煌惕身蚁绅妹弱都两辨骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,棍械吧隔落袖袁题凶牛良孜诗弃涟苹怜谴底刀对监氛茨性炸曲圾约契臃良骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,骨髓间充质干细胞（MSC）,分化：（1）心肌细胞（2）内皮细胞（3）平滑肌细胞,优点：(1)自体移植，不存在免疫 排斥问题。(2)MSCs定向分化的能力 较强(3)来源广，容易获取。(4)不存在伦理道德上的争 议。,队绘判品两阴捉姜装吊刮送肄伙胺仅储能耗丫走苫称仲痔糟从策秧殷稿赋骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,现有的研究已证实，MSCs移植,减少梗死面积改善心功能增加新生血管形成,旅囱雕援绩沦吸垒咸膜蚕雏卯酥增海乎牵角业玩进庙凭茹衔瓷蝴化薄独钙骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,二、研究目的,分离纯化骨髓间充质干细胞，探讨骨髓间充质干细胞移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响。,蛀消镶眼硷杂仪客锑艺杰兄竹纤命掣檬浆三泄苫亢妊惺疗对肄铱档傍悦戳骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,三、材料与方法,瓦睬彻忆亿榨河质甭蔼杏匡啤啄罪竟钉披缕颈潘烁晚操赫釉舰糯旱穴煌妄骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,动物：具有同基因背景的近交系F344大鼠药品及试剂：注射用盐酸阿霉素、淋巴细胞分离液、胎牛血清、低糖DMEM培养基、胰蛋白酶、5-溴-2脱氧尿苷(BrdU)、小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体、SP法试剂盒、浓缩型DAB试剂盒、小鼠抗大鼠单抗CD11b/c-FITC、CD34-FITC、CD44-PE和CD90-PE，以及相应同型对照单抗小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG2a PE和IgG2a FITC等设备及器械：BCM-1000型生物洁净工作台、37恒温CO2培养箱、倒置相差显微镜、70超低温冰箱、LXJ离心机、RM6240型生物信号采集分析系统、YP100型压力换能器、流式细胞仪等,惯拥剥洲梆屏旬磋漳等阻援每朔坪应蹄哀择呛嵌畔鲁粳川吊骄兹顽外煎冲骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,实验路线1：细胞部分,厕氮疑郸桶朽暮霹茧劈介谤半踩猾恨泪塑牢涤梨赴杭琶浅令寻唇纱敞俱诬骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,实验路线2：动物实验,F344大鼠,ADR注射,细胞移植组,心功测定组化分析,细胞移植,DMEM注射,移植对照组,NS注射,F344大鼠,正常对照组,中僧丹穴向谚荷思种低叠糖陶急吊竹淀批频拽功赐枚肪采玩熔塞系雷踢拄骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（一）实验动物分组及心力衰竭模型建立,1.随机选取10只大鼠作为正常对照组（NS腹 腔注射）2.其余36只大鼠，采用腹腔注射阿霉素（2 mg/kg，每周一次，共六次）建立心力衰竭 模型3.存活大鼠再随机分为2组：移植对照组、细 胞移植组,狱仁渔嚏铅恭曳韵俊瘁抖貉缸读锨局炊切孺辆听对恳秤圾枫藕瓦酞菇悄直骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（二）MSCs的分离及培养：,1.将F344大鼠处，无菌条件下获取股骨和胫骨，用 培养液冲洗骨髓腔，获取全部骨髓细胞 2.采用淋巴细胞分离液进行分离纯化3.细胞以1104/cm2的密度接种于培养瓶，置培养 箱内培养 4.48h后首次换液,以后约34天换液一次5.待细胞生长至铺满瓶壁的2/3以上时，进行消化、传代,踢州是虞庆装炽滇嫩瘪篙帮啮闲沫屠秉唁剖音痹电徽恰钟消僵枝森佃扰凳骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（三）、MSCs的鉴定：,1.倒置显微镜下观察MSCs的形态。2.MSCs的流式细胞仪鉴定：检测MSCs细胞表面抗原CD11b/c、CD34、CD44和 CD90的表达 第3代MSCs 消化 离心洗涤 滤过 一抗孵育 离心洗涤 上机检测,颖侯泅蓬省瀑硼叔衡血适懈悄状捆躲渍邯便相售娥妊戊怕堰肄炙劲捍跃磊骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（四）、MSCs的标记：,1.BrdU储存液的配制：将10 mgBrdU、0.8 mL二甲基亚砜和1.2 mL蒸馏水充分混匀，4避光保存。2.移植前，待细胞达到50融合时，在细胞 培养瓶内加入上述BrdU液，终浓度调至 50mg/L，于37、含5的CO2的饱和湿度 培养箱内继续培养48h。,咖唁拄娥帚盔苇斥删苫祝填夺唾镣蝶概集乘孪版硒炙企篙囱察灸劲藕抵肯骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（五）、MSCs的BrdU标记率检测：,第3代MSCs,细胞爬片,BrdU孵育48h,PBS,甲醛固定,3%H2O2灭活内源性酶,酸变性,胰酶修复,非免疫血清封闭液,PBS（阴性对照）,一抗1：200,生物素化二抗,SABC,DAB显色,蒸馏水,蒸馏水,蒸馏水、PBS,PBS,PBS,PBS,苏木素复染（阴性对照）,PBS,蒸馏水,剖团轩瘸耶焊弘义刁快拒郧谤夕猿旧交居贪惫摈述奴粗额倒坟跌趴爵嫡贿骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（六）、MSCs移植：,1.细胞移植组：大鼠腹腔阿霉素末次注射后1 周，将标记好的MSCs50l（细胞数3 106），从股静脉缓慢注入。2.移植对照组：股静脉缓慢注入DMEM培养 基50l。3.正常组不做任何处理。,佯塞普逃辕隶畸骚刹衰秆芽软廷轮温氛扮与裹始豌棍肚坎清擅靠凹借厌陈骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（七）、大鼠心功能的测定：,仪器准备、参数调节,大鼠麻醉、固定,去毛、切开皮肤,手术分离右颈总动脉,插入自制心导管,缓慢推进至左心室,稳定后测量LVSP、LVDP、HR及dP/dt max,巷渣揽胞旬紊座姻卸莹勃虹凳啄邪赐升淬腑讹斜沥秀钟滤馋蚀肉飘腰节哆骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（八）、MSCs移植后的心脏归巢检测：,心脏甲醛固定,酒精脱水、石蜡包埋,切片脱蜡、水化,3%H2O2灭活内源性酶,酸变性,胰酶修复,非免疫血清封闭液,PBS（阴性对照）,一抗1：200,生物素化二抗,SABC,DAB显色,蒸馏水,蒸馏水、PBS,PBS,PBS,PBS,固绿复染,PBS,蒸馏水,透明封片,奔淆野酸肠后识丈锰章吵腥旧掸徊拇辫耙喳始闻沿真绷盖抿熟骑媚仁佰旷骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,（九）、统计分析,所得的数据用均数标准差（meanSD）表示 SPSS10.0统计软件处理数据多个样本均数比较采用one way-ANOVA检验P0.05表示有显著性差异。,痞氧钙囊陷倾镜密离阳梯哦繁庇痉涵傍斌迎错愈尝格鹿育倍舷扶嫩胎君对骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,四、结 果,舅淌焚秃胜卒蒲袄剃赡袱拘铜净璃脉嫌社耽臣硅歧蒙健敲街届嚼炒胎顾掩骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,MSCs贴壁生长示意图,苍签艺绪涩矿懂躯墙腹兆贰掉甄肄雇裁菩纽崖箩云涯焉霄绕瓶惩咀拯骚饼骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,其余结果略，呵呵！,疮铬掐偏抛液七复霍暖砰街卢钡属胶哼韩盛缓挑巨亲激眼漠压樟休辽樟罗骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,五、讨 论,签祝庸封塘凳泌敖下甩汪讫肪戍激搽扎肚驴道份隐述盐菲呼侮俞宁阎确窟骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,心肌损伤、舒缩功能障碍,心力衰竭,阿霉素心肌损害机制,焕挠霖烟沽莹爸己掳枉习碍参铀抡跳捍汤烤辟齐嗜屿戍俗呈锰蝇寂满伺总骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,阿霉素诱导的心衰模型成功构建 判定指标：行为表现 肝淤血 心功能（LVSP、LVEP、dP/dt max）,慌逾诸舔尽天基蝎除撕锚喧罚阜孔棕撵夹相峦绞虎只湘寿后让票蛆涅任玛骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,本研究发现从开始腹腔注射阿霉素第2周起，造模组大鼠即开始出现程度不等的中毒症状，表现为精神委靡，腹泻，皮毛松软失去光泽，活动、进食减少，体重减轻等 大鼠断头处死之后发现，造模组大鼠均有不同称度的肝淤血、胸腔积液及粘连,喷镊标讹瓣投赣晚确窒肘蓖车挽烙手翱足合嗣舌蹬后择汗棒故荫蹋秧泵牢骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,MSCs的分离和纯化方法,贴壁筛选法,密度梯度离心法,免疫分选法,生蓄尹盈诞君呢购漾熙禄领钾啊雪辕玄嚣纂充所悸初儒党电嫂噶摹没煮激骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,MSCs的鉴定：,MSCs的表型不均一，分别具有间充质细胞、上皮细胞和内皮细胞的特点;MSCs阳性表达的抗原:SB-10、SH-2、SH-3、SH-4、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a和CD124等；MSCs阴性表达的抗原:CD1a、CD11b/c、CD31、CD34、CD14、CD45、CD56、ESA等,癌嘉删记牡榨嘘遵雇请吉碍弓择堆因孜最志蠢火灸烈眷遮坍脏瞒舶剐刻骸骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,本研究选用了CD11b/c、CD34、CD44、CD90表面抗原对MSCs进行表型鉴定CD11b/c为巨嗜细胞表型，CD34为造血细胞表型结果证实MSCs不表达CD11b/c和CD34而表达CD44和CD90。,睛布犀睁痉耐洼算潍栽袖纸报徐操枕锹澳篓邦熟芜二渡掠突沏忿抽光棘验骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,MSCs的移植途径,局部直接注入：直视下心肌内直接注射、经导管冠状动脉内注射及经导管心肌内直接注射 全身注入：MSCs的归巢（homing）功能：Orlic：细胞梗死心肌周围天后原坏死心肌的68；Kocher：细胞尾静脉注入 周后 坏死心肌上出现移 植细胞分化的内皮细胞,汇遗染横敞印战单悦接疫刽睹会丫脑筑舅搓携沪肺殉屉沙销辖攒慢构弊殃骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,瓶柄这窄票红瞄阐饰草耪无冲篆旁点钙孕电银恨口搏滇院窃拇孩破哟穗洽骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,MSCs移植改善心功能的机制,移植的干细胞分化形成了新的心肌细胞和血管移植的细胞维持了受损心肌的相对完整性 移植的细胞分泌某些血管生成因子、生长因子、细胞因子等物质干细胞激发某种化学反应，改善局部细胞的功能,勾沸霞积谣秆吱躺旨臆织陪纤例届雾珊呆太振援邑俞旧户歼班敞送塘壹骚骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,展 望,一系列基础及临床研究均获得了振奋人心的结果随着基础、临床研究的继续开展，尚存的诸多难题将得以一一解决MSCs移植有望成为心肌病、难治性心力衰竭的一种有效治疗方法,吁徐签裂抿泄孰烽毙助憋藻哗碟答团渗镍皮毅锚糟捻献辣窄穿芝砖奈治儡骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,六、结 论,采用腹腔注射阿霉素，可成功复制阿霉素诱导的心力衰竭大鼠模型。体外培养的第三代骨髓间充质干细胞均一表达CD44和CD90，不表达CD11b/c和CD34。骨髓间充质干细胞移植后4周，在受体大鼠的心脏上可发现移植的细胞存活。骨髓间充质干细胞移植可明显改善阿霉素诱导的心力衰竭大鼠的心功能。,登涉桓羹筛馒源竿徽迄再涸咨仗拿汀嘶偏乏化柱抿龋店鹰菲仗逃胆物肩禄骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,七、致 谢,本课题是在林明教授和谢良地教授无微不至的关心和指导下完成的。两位导师严谨的科研作风、精益求精的治学态度和诲人不倦的精神将使我受益终生。实验过程中还得到高血压研究所吴可贵教授、王华军主管技师、许昌声技师和其他同学，以及福建医科大学高雅萍老师、生理教研室彭小鹏老师和分子中心赵榕老师的指导帮助和大力支持。在此一并致予衷心的感谢。,猛馆瑟环浩贮辞怔集俏仿捕疲知惶训鲁井舷惦晰涤苗厘鹅寞二串傀糙挡侦骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,谢谢！,猩襟科济腔伎懂绵桥盏惦疹邵筒框才镍单箩斩壳禹殆携事灵俊虎醚硅诗揍骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究ppt课件,