身体功能训练对体育院校武术套路学生相关身体素质及专项技术影响的实验研究硕士论文答辩课件.ppt
扬州大学硕士学位论文答辩,论文题目：身体功能训练对体育院校武术套路学生相关 身体素质及专项技术影响的实验研究,研 究 生：宋远凤 研究方向：民族传统体育科学 指导教师：邱瑞瑯 教授 2015年5月 扬州,内容,据调查，成人的NAFLD发病率为20%33%，女性患者要明显高于男性，儿童患病率为2.6%，肥胖或 2型糖尿病患者中NAFLD发病率达到 75%，其中在肥胖的儿童中的患病率为52.8%，不同的人种的患病率也存在很大的差异。近年来，我国的NAFLD发病率明显上升，已仅次于病毒性肝炎成为第二大肝病，NAFLD已经严重地影响到我国人民的健康和生活水平。,1.研究背景,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,ANP,肝脏脂肪代谢障碍,ANP,胰岛素抵抗（IR）,ANP,各种原因如肥胖,脂代谢紊乱等,2型糖尿病,游离脂肪酸增加,肝细胞内TG增加而输出量又减少,肝细胞脂肪变性,二次打击,目前对NAFLD研究很多，但其发病具体机制尚未清楚，目前对NAFLD发病机制主要的观点还是“二次打击假说”为主。（1）二次打击假说：,（2）非酒精性脂肪肝与胰岛素抵抗（IR）：IR引起NAFLD的主要原因是脂质过多和高胰岛素血症。发生IR时脂蛋白脂酶活性及脂肪合成能力减弱，导致脂肪组织分解释放出FFA增多，并进入肝脏组织，使得肝脏组织中TG的合成明显增多，TG在微粒体转运蛋白(MTP)催化的反应中，与载脂蛋白结合转化为VLDL,当TG的形成超过其输出以及VLDL的合成障碍时，就会影响其转运，过多的TG便蓄积在肝内，于是就形成脂肪肝。,（3）非酒精性脂肪肝与脂质代谢异常 脂肪酸摄入肝脏内过多，而肝脏内合成脂蛋白代谢发生障碍，FFA通过激活信号通路诱导肝细胞发生凋亡，使得肝细胞的脂质排泄速度受限，脂质就会出现沉积，过多的脂质沉积导致脂肪肝的发生。（4）非酒精性脂肪肝与氧化应激和脂质过氧化损伤 外源性高脂饮食使血清FFA增加，使线粒体氧化速度加快，进而增加了活性氧(ROS)的产出。当肝细胞内活性氧（ROS）的产生及其作用超过SOD、GSH、维生素E抗氧化体统清除自由基能力时，便产生氧应激导致过氧化损伤，当肝细胞氧化应激反应所产生的损害超过肝脏自身防御能力时，会导致肝脏NAFLD的发生。,（5）其他因素对脂肪肝的影响：经研究表明脂肪肝与人体的瘦素、脂联素、TNF-a、细胞性内毒素等细胞因子有着密切的关系。1.2有氧运动对非酒精性脂肪肝的影响和机制 目前已有研究证明,耐力性运动对脂肪肝的预防和延缓具有重要的作用。不同运动强度对肝脏脂质及脂肪病变的影响,有明显的预防效果。多数研究都集中在运动对脂肪肝预防作用方面,而运动对脂肪肝治疗方面的研究报道较少。,（1）有氧运动对非酒精性脂肪肝的影响（2）有氧运动对改善非酒精性脂肪肝的机制（3）有氧运动可以改善脂质代谢（4）有氧运动可以改善胰岛素抵抗（5）有氧运动可以改善机体抗氧化能力,1.4消脂散对非酒精性脂肪肝的影响和机制（1）调节血脂代谢，改善IR。（2）降低血清和肝脏MDA含量,增强红细胞和肝脏SOD的活性,同时增强GSH的活性,从而提高抗氧化能力,抑制脂质过氧化物,预防脂质代谢紊乱。（3）保护SOD活性和抑制氧化低密度脂蛋白的形成发挥减轻氧化脂蛋白中的MDA和氧化低密度脂蛋白对肝细胞损伤的作用。,1.5 PPAR-在脂肪肝发病中的作用（1）降低中性脂质在高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白之间的交换，促进低密度脂蛋白的清除；（2）增加脂蛋白酯酶的活性，促进TG的分解；（3）减少脂肪酸、甘油三酯和极低密度脂蛋白的产生；（4）调控氧化过程中脂肪酸代谢酶的基因转录，上调脂肪酸氧化相关蛋白的基因表达，下调脂质合成的基因；,2、研究对象与方法,2.1 研究对象 选用清洁级5周龄雄性SD大鼠（南京青山实验动物研究中心提供）60只，体重140g-160g。动物合格证号为：Sexk(浙20080033),2.2 运动方式 HE组与HZE组大鼠每天进行60min无负重有氧游泳运动，游泳缸体积为1506070cm3，水深60cm,内壁光滑，水温311，HE组与HZE组适应性游泳1周，第一天游泳10min，以后每天递增10min至60min，第二周开始每天游泳60min，每周6次，直至游满10周。,2.3 高脂饲料与“消脂散”的配方及用量 高脂饲料配方的组成:80.5%的基础饲料，14%的猪油，2%的胆固醇，0.5%的胆盐，3%的麻油，购于南通立默生物科技有限公司。消脂散配方的组成:制何首乌、山楂、白术、泽泻、柴胡、水侄（炒）、冬瓜皮、荷叶、决明子、生大黄、黄芪、三七。在每次训练的上午，对HZ组和HZE组大鼠以1ml/100gBW（浓度为0.8g/ml）剂量的中药灌胃，其余各组灌服等量的生理盐水。,2.3 生化指标测试 为避免急性运动的影响，大鼠运动后24小时后取样，取样前一天，大鼠均禁食12小时，自由饮水。大鼠用2的戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，各组大鼠取血后迅速取部分肝大叶组织，迅速放于经0.1%DEPC处理的无RNA污染的去离子水中，漂洗去血渍，立即放入液氮中冷冻，-70保存，预备测肝脏的各项指标和预备作RT-PCR。,3 荧光定量PCR法测定大鼠肝脏PPAR-mRNA的表达 3.1肝脏组织总RNA的制备,热 变 性,引物退火,延伸反应,SYBR Green I 染料法作用机理,2.4 PPAR-扩增引物设计,2.5 反转录反应,2.6 实时荧光定量PCR反应,实事荧光定量PCR反应按照TaKaRa公司生产的SYBRPremix Ex TapTM要求进行，具体反应体系如下（20l）：,2.7 RNA的提取结果,RNA的提取结果如图所示，通过甲醛变性胶检测后，提取的RNA完整性好，没有降解，可以进行下一步操作。,3.1 10周实验前后4组大鼠体重变化,3、研究结果与讨论,通过双因素方差分析，从第2周开始一直到第5周，HF组体重均高于C组，但是从第5周开始，HF组体重均低于C组，在6-9周龄运动可以显著降低大鼠体重，而“消脂散”以及有氧运动联合消脂散可以降低大鼠体重，但是差异不显著。,3.2 10周实验前后4组实验大鼠肝脏重量和肝指数,与C组相比高脂膳食组使得大鼠肝脏重量显著增加。而有氧运动和“消脂散”均能有效地抑制大鼠肝脏重量的增加并且有氧运动和“消脂散”有明显的交互作用。与C组相比，高脂膳食使得大鼠肝体比（肝体比肝脏质量体重）增大显著显的。而单独有氧运动、服用“消脂散”以及有氧运动联合“消脂散”均能明显抑制大鼠肝体比的增加，并且有明交互作用。,3.3 实验大鼠肝功能指标的变化,HF组大鼠血清ALT水平有上升的趋势显著；且HF组大鼠血清AST和LDH活性显著升高。有氧运动或“消脂散”均可以显著地降低高脂饮食大鼠血清AST、ALT 和LDH的活性，而且有氧运动和服用“消脂散”对于降低高脂饮食大鼠血清ALT和LDH活性均具有显著的交互作用，从而使它们的活性进一步降低。,3.4实验大鼠血清中TC、TG和FFA水平的影响,与C组相比，高脂饲料使得HF组大鼠血清TG、TC水平明显增高；有氧运动或“消脂散”均能显著地降低高脂饮食大鼠血清TG、TC的水平，而且有氧运动和“消脂散”对降低高脂饮食大鼠血清TG、TC水平具有显著的交互作用 与C组相比，HF组大鼠血清FFA水平明显增高；在高脂饮食的同时进行有氧运动训练或服用“消脂散”能够显著地降低高脂饮食大鼠血清中FFA含量，同时有氧运动联合“消脂散”对进一步降低肝组织中FFA水平具有显著的交互作用。,3.5实验大鼠肝脏中TC、TG和FFA水平的影响,与C组相比较，HF组大鼠肝组织内TC和TG水平显著升高；有氧运动或服用“消脂散”均能显著地降低高脂膳食大鼠肝脏组织内TC和TG水平，而且有氧运动和“消脂散”对降低高脂膳食大鼠肝脏中TC和TG水平具有明显的交互作用。与C组相比，HF组大鼠肝内FFA水平明显增高；在高脂膳食的同时进行有氧运动训练或服用“消脂散”能够显著地降低高脂饮食大鼠肝组中FFA含量，同时有氧运联合“消脂散”对进一步降低肝组织中FFA水平具有显著的交互作用。,3.6实验大鼠肝脏中SOD和MDA含量以及 SOD/MDA变化的影响,与C组相比，HF组大鼠肝组织中SOD活力下降显著，且MDA 含量显著上升，从而导致SOD/MDA显著降低。有氧运动运动或服用“消脂散”均能使高脂饮食大鼠肝组织中SOD活性显著升高，MDA含量显著降低，从而使SOD/MDA显著升高；而且有氧运动训练联合“消脂散”对高脂膳食大鼠肝组织中SOD活性进一步升高，MDA含量进一步降低，具有显著的交互作用。,3.7目的基因和内参基因的扩增曲线,PPAR-和-actin基因的扩增曲线。由图可知，两个基因的溶解曲线只有单峰，说明引物的特异好，没有非特异性扩增和引物二聚体的形成。,3.8目的基因和内参基因的溶解曲线,PPAR-和-actin基因的扩增曲线。由图可知，两个基因的溶解曲线只有单峰，说明引物的特异好，没有非特异性扩增和引物二聚体的形成。,3.9 目的基因和内参基因的标准曲线及表达量,目的基因PPAR-的标准曲线为：Y=-2.997X+20.554，拟合度R2=0.9932，扩增效率E=115.61%，-actin的标准曲线为：Y=-3.181X+16.050，拟合度R2=0.9949，扩增效率E=106.23%。目的基因与内参基因的扩增效率基本一致。,3.9实验大鼠肝脏中PPAR-mRNA的表达,与C组相比，高脂膳食组大鼠肝组织中PPAR-mRNA表达量显著降低，有氧运动和“消脂散”均能使高脂饮食大鼠肝组织中PPAR-mRNA表达量显著升高，而且有氧运动联合“消脂散”使高脂饮食大鼠肝组织中PPAR-mRNA表达量升高有明显的交互作用。,4.1 实验证实10周的高脂饮食成功地复制出大鼠非酒精性脂肪肝模型。4.2 有氧运动和“消脂散”对高脂饮食大鼠脂肪肝的形成具有显著的干预作用，且两者具有明显的交互作用。4.3 脂肪肝的形成与脂肪代谢紊乱有关，有氧运动和“消脂散”通过显著改善高脂饮食大鼠的脂肪代谢来干预脂肪肝的形成。4.4 有氧运动和“消脂散”可以改善高脂饮食大鼠肝组织中氧自由基代谢，预防肝细胞的损伤，从而起到保护肝脏功能的作用。4.5有氧运动和“消脂散”可以有效地提高高脂膳食大鼠肝脏中PPAR-mRNA表达量，同时有氧运动和“消脂散”对高脂膳食大鼠肝组织中PPAR-mRNA表达量升高有显著的交互作用。,4、结论,首先，我要衷心地感谢导师李宁川教授。三年来，李老师无论在学习还是生活上都给我无微不至的帮助和关怀。在此，谨以此文，向恩师致以我最衷心的感谢和崇高的敬意！在本论文完成过程中，感谢扬州大学体育学院金其贯教授和施洪飞教授对我实验的指导和关心。同时感谢动物科学与技术学张根喜老师、赵秀华博士和魏岳博士在RT-PCR实验时的帮助；以及体育学院的潘缈琛、陈小燕、李玲、徐惠、陈慧和周盛强等同学在整个动物实验、样本处理和生化指标测试过程中给予的帮助。在此，谨以此文，向他们致以深深的谢意！在研究生的三年学习期间，感谢体育学院各位领导和老师给予我的帮助和指导。感谢我的家人、朋友和同学们对我的支持！最后，感谢所有和我共同生活学习的老师、同学和朋友，愿我们的明天更加辉煌灿烂！,致谢,恳请各位专家提出宝贵意见,谢谢,
