血液中乙醇的测定 顶空气相色谱法SFZ JD0107001.doc

发 布中华人民共和国司法部司法鉴定管理局司法鉴定技术规范SF/Z JD010700120162016-9-22实施2016-9-22发布血液中乙醇的测定顶空气相色谱法目 次前言I1 范围12 规范性引用文件13 原理14 试剂和材料15 仪器16 测定步骤27 结果计算3附录A （资料性附录） 乙醇对照品和内标气相色谱图4附录B （资料性附录） 校准曲线5前 言本技术规范按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本技术规范的附录A和附录B为资料性附录。本技术规范由司法部司法鉴定科学技术研究所提出。本技术规范由司法部司法鉴定管理局归口。本技术规范起草单位：司法部司法鉴定科学技术研究所。本技术规范主要起草人：卓先义、刘伟、向平、沈保华、卜俊、马栋、严慧。本技术规范所代替规范的历次版本发布情况为：SF/Z JD01070012010。血液中乙醇的测定顶空气相色谱法1 范围本技术规范规定了血液中乙醇的顶空气相色谱测定方法。本技术规范适用于血液中乙醇的定性及定量分析。本技术规范的方法检出限为0.01mg/mL；定量下限为0.05mg/mL。2 规范性引用文件下列文件对于本技术规范的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本技术规范。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本技术规范。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）GA/T 122 毒物分析名词术语3 原理本法利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平行操作的乙醇对照品比较，以保留时间进行定性分析；以峰面积为依据，用内标法定量。4 试剂和材料除另有说明外，水为GB/T 6682规定的二级水。4.1 乙醇色谱纯。4.2 乙醇标准溶液精密称取适量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇标准储备溶液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为3个月。4.3 叔丁醇色谱纯。4.4 叔丁醇溶液精密称取适量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇储备液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为12个月。将储备液用水稀释，得40.0g/mL叔丁醇内标工作液，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。5 仪器 5.1 气相色谱仪配火焰离子化检测器（FID）。5.2 顶空进样器配1mL定量进样环。5.3 样品瓶10mL，顶空自动进样器用。5.4 硅橡胶垫5.5 铝帽5.6 密封钳5.7 精密移液器5.8 自动稀释仪6 测定步骤6.1 样品处理用精密移液器或自动稀释仪取待测血液0.10 mL及0.50 mL 40.0g/mL 叔丁醇内标工作液，加入样品瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀。6.2 测定6.2.1 顶空气相色谱测定参考条件a） 色谱柱（1）：DB-ALC1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛细管柱或相当者；柱温：恒温40°C； 色谱柱（2）：DB-ALC2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛细管柱或相当者；柱温：恒温40°C；b） 载气：氮气，纯度99.999%，流速8mL/min；c） 进样口温度：150°C；d） 检测器温度：250°C；e） 加热箱温度：65°C；f） 定量环温度：105°C；g） 传输线温度：110°C；h） 气相循环时间：3.5min；i） 样品瓶加热平衡时间：10.0min；j） 样品瓶加压时间：0.10min；k） 定量环充满时间：0.10min；l） 定量环平衡时间：0.05min；m） 进样时间：1.00min。6.2.2 定性测定样品溶液按照顶空气相色谱测定条件测定，以叔丁醇为内标，记录色谱峰的保留时间。将待测样品色谱峰的保留时间与乙醇标准对照品的保留时间比较，相对误差在±2%内，空白对照样品内标物色谱峰正常而无乙醇的色谱峰，一般可以认为待测样品中含有乙醇；必要时，选择不同的色谱条件或用气相色谱-质谱法确证。如果内标物色谱峰正常，而无乙醇的色谱峰时，可认为检验结果为阴性。乙醇对照品和内标气相色谱图，参见附录A。6.2.3 定量测定本方法采用内标法校准曲线法或内标法单点校正法定量测定。6.2.3.1 内标法校准曲线法采用内标-校准曲线法测定（见附录B）。将乙醇对照品溶液进样，以乙醇和内标峰面积比为纵坐标，乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对待测样品进行定量，所测样品中乙醇的浓度值应在线性范围内。6.2.3.2 内标法单点校正法待测血液样品乙醇浓度在标准溶液浓度的±30%内可用单点法定量。6.3 平行试验按以上步骤对同一待测样品进行平行试验。单柱单检测器两份样品测定结果按两份样品的平均值计算，双样相对相差不得超过10（有凝血块的血样不超过15）。双样相对相差按式（1）计算： | C1 - C2|双样相对相差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100 （1） C式中：C1、C2¾¾两份样品平行定量测定的结果；C ¾¾两份样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。双柱双检测器两份样品测定结果的相对标准偏差RSD（%）若不超过5时（有凝血块的血样不超过10%），结果按两份样品结果的平均值计算。7 结果计算血液中乙醇浓度测定采用内标法校准曲线法定量或按式(2)计算： A´ Ai´c C = ¾¾¾¾¾¾ （2） A´Ai 式中：C¾¾血液样品中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；A¾¾血液样品中乙醇的峰面积；A¾¾标准溶液中乙醇的峰面积；Ai¾¾标准溶液中内标物的峰面积；Ai¾¾血液样品中内标物的峰面积；c¾¾标准溶液中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)。附录A （资料性附录）乙醇对照品和内标气相色谱图A.1 按色谱柱（1）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图A.1。叔丁醇(2.09)乙醇 (1.43)图A.1 按色谱柱（1）条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图A.2 按色谱柱（2）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图A.2。叔丁醇(2.03)乙醇 (1.51)图A.2 按色谱柱（2）条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图附录B （资料性附录）校准曲线配制乙醇浓度为0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL的水溶液，按6.1和6.2项下分析，每一浓度点取2份，以乙醇与内标叔丁醇的峰面积比对乙醇浓度做标准曲线。按色谱柱（1）条件测得的标准曲线方程为 X = 1.0761 C - 0.0162（r = 0.9997），按色谱柱（2）条件测得的标准曲线方程为 X = 1.0655 C - 0.0177（r = 0.9997）。式中X为乙醇与叔丁醇的峰面积比值，C为乙醇工作溶液浓度(mg/mL)。