抗体的种类.ppt

第一节 抗体的种类,免疫学教研室,抗原刺激B细胞后分化增殖为浆细胞合成和分泌的,能与抗原发生特异性结合并具有多种免疫功能的球蛋白。,1、抗体（antibody,Ab),免疫学教研室,2、免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig),将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，统称为免疫球蛋白。包括骨髓瘤、巨球蛋白血症等患者血清中尚未证实有抗体活性的异常免疫球蛋白、免疫球蛋白亚单位等。,免疫学教研室,免疫球蛋白是化学结构上的概念抗体是生物学功能上的概念抗体都是免疫球蛋白并非所有的免疫球蛋白都具有抗体活性,3.Ab与Ig的区别,4 抗抗体和抗独特型抗体,1 以免疫球蛋白作为抗原免疫动物产生的抗体。2 以免疫球蛋白独特型作为抗原免疫动物产生的抗体。,5单克隆抗体,概念：一个B细胞针对一个抗原决定簇所产生的一种特异性抗体，称为单克隆抗体特点：高特异性、高均一性应用：广泛,6基因工程抗体,嵌合抗体CDR（互补决定区）移植抗体单链抗体,7人源化抗体,全人源化抗体 人骨髓瘤细胞和人淋巴细胞杂交瘤细胞产生抗体人源化抗体,8单克隆和多克隆抗体的比较和用途,特异性,敏感性,均一性,McAb,PcAb,低,差,无,高,强,有,1、用于免疫学检测，辅助临床诊断,2、McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原,3、标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等,4、制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。,免疫学教研室,第二节 免疫球蛋白的结构,免疫学教研室,一、基本结构,由四条多肽链(重链及轻链各两条)经二硫键连接起来,免疫学教研室,(一)重链（heavy chain),分子量5575KD，由420-460个氨基酸组成。根据重链特性的不同，可将其分为、五种。据此将免疫球蛋白分为五类。,免疫学教研室,N端第1个功能区为重链的可变区(variable region of heavy chain,VH)VH中的31-35、50-65、95-102段为超变区（hyper variable region,HR),重链的功能区之一:可变区,重链的功能区之二:恒定区,IgG与IgA的重链恒定区可分为三个功能区(CH1，CH2，CH3)IgM IgE重链恒定区多一个CH4区。,免疫学教研室,CH1：遗传标志CH2：与补体活化及通过胎盘有关CH3：固定组织细胞CH3与CH4：可与Fc受体结合,重链的恒定区作用,绞链区的作用,CH1与CH2之间存在有绞链区，对木瓜酶及蛋白酶敏感，具有很好的弹性，可以自由展开至180度。,免疫学教研室,(二)轻链,可分为链及链两种。同一单体中两条轻链是相同的，但不同的分子中其组成不同，人体内免疫球蛋白中链占65%，链占35%。功能区:可变区(VL):超变区及抗体互补决定区恒定区(CL),分子量为22.5KD，由213-216个氨基酸组成。,二、酶解片断,免疫学教研室,单体绞链区，水解产物为 2个Fab片段及一个Fc片段。Fab片段(抗原结合片段):含有一条完整的轻链及重链的一部分，能与相应抗原特异结合，但是单价性的（只能结合抗原，不能凝集或沉淀）。Fc片段(可结晶片段):不能与抗原结合，但具有多种生物学活性，结合补体、固定细胞、通过胎盘等。,1.木瓜酶,免疫学教研室,2.胃蛋白酶,作用于绞链区的第一个二硫键的下方酶解后形成F(ab)2及pFc两个片段。F(ab)2：是两个Fab由一个二硫键结合在一起形成的双体，经还原后便分解为两个Fab，F(ab)2具有双价抗体活性,与抗原结合后能形成沉淀或凝集。pFc：小分子肽，不具有任何生物学活性。,免疫学教研室,三 免疫球蛋白的血清型,免疫球蛋白生化本质上属于大分子蛋白质（具有抗体活性及表位）根据其本身具有的多种抗原决定簇(表位）可采用血清学方法(相应的抗体)加以鉴定，称为免疫球蛋白的血清学类型同种型、同种异型和独特型,免疫学教研室,（一）、同种型,同一种系的所有个体的免疫球蛋白所共有的抗原特异性。根据免疫球蛋白H链的抗原决定簇不同，可分为不同的类、亚类。根据L链的抗原决定簇不同，将其分为型及亚型。,免疫学教研室,1、类与亚类,根据CH链结构的差异可将免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五大类,每大类又可以分为若干个亚类。,免疫学教研室,2、型及亚型,根据免疫球蛋白CL链的结构可将免疫球蛋白分为及两个型。,免疫学教研室,（二）、同种异型,同种系的不同个体之间,同一类、亚类、型、亚型的免疫球蛋白，在结构上可能会有一个或数个氨基酸的差异,称为同种异型。反应在CH、CL上一个或数个氨基酸的差异，是由不同个体的遗传基因决定的，又叫遗传标志。IgG1,IgG2,IgG3重链的遗传标志称为Gm因子，位于CH1CH3之间。Am因子：IgA2链；Km因子：链。,免疫学教研室,（三）、独特型,同一个体内不同的B细胞产生的免疫球蛋白,由于重链及轻链的可变区(尤其是超变区)氨基酸组成的差异,导致的抗原特异性为Ig的独特型。,免疫学教研室,四 各类免疫球蛋白的结构,一、Ig M,由五个单体免疫球蛋白经J链及二硫键连接而成,免疫学教研室,二、Ig A,血清型:单体结构分泌型:由J链连接的双体再加上一个分泌片组成。分泌片可以保护粘膜分泌液中蛋白酶对其的破坏作用。,免疫学教研室,三、Ig G、IgD、IgE,免疫学教研室,五、Ig的功能,一、结合抗原抗原抗体特异性结合B细胞表面抗原受体（膜抗体）二、结合补体三、结合Fc受体四、具有抗原性,第二节 抗体的产生,1.感应阶段：B2细胞通过BCR识别TD-Ag的构象决定簇，此为第一信号。Ig和Ig把第一信号传递到胞内，协同受体CD19和CD21辅助第一信号的传递。,体液免疫的发生过程,2.反应阶段：（1）通过受体介导的内吞作用，抗原内化，经加工、处理形成MHC-抗原肽复合物递呈到B细胞表面。（2）B细胞与Th2间的相互作用为B细胞的活化提供第二信号:主要为CD40-CD40L,Th细胞与B细胞的相互作用,B细胞对Th细胞的作用1.在再次应答过程中，B细胞加工、递呈抗 原给Th细胞2.B细胞为Th细胞提供协同刺激分子：B7Th细胞对B细胞的作用1.活化的Th细胞为B细胞活化提供共刺激分子 CD40LCD402.Th细胞产生细胞因子（IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13）辅助B细胞的增殖和分化,B细胞在生发中心的分化成熟,生发中心：活化B细胞进入原始淋巴滤泡暗区：分裂中的生发中心母细胞和少量的滤泡树突状细胞明区：分散的生发中心细胞和众多滤泡树突状细胞,体细胞高频突变和Ig亲和力的成熟:1）体细胞高频点突变:每次细胞分裂所产生的每个子代细胞的抗原受体会有一个突变的氨基酸，这样就产生了IgV区的多样性2）抗体亲和力的成熟：由低亲和力到高亲和力逐渐提高的现象抗体的类别转变：Ig类别的转换和记忆性B细胞的产生,3.效应阶段：浆细胞产生抗体发挥效应。（1）中和作用（2）激活补体（3）调理作用（4）ADCC（5）参与超敏反应（6）选择性传递,_ 初次应答 再次应答_ 潜伏期 长 短 高峰浓度 低 高 维持时间 短 长 Ab类型 主要为IgM 主要为IgG Ab效价 低 高 亲和力 低 高_,三、抗体产生的一般规律,第三节 抗体的制备,1免疫原制备2 免疫程序3 免疫动物4抗血清分离5 抗体纯化,抗血清制备,免疫抗原制备,纯化抗原佐剂如何,免疫程序,动物选择免疫剂量免疫途径免疫时间,血清采集,小白鼠采血家兔采血山羊采血采血时间血清的分离和保存,抗体纯化,盐析透析层析,单克隆抗体制备,杂交瘤细胞产生的只针对一个抗原表位的抗体。,杂交瘤细胞,杂交瘤细胞,杂交瘤细胞,杂交瘤细胞,杂交瘤细胞,