任务二水中大肠菌群数的测定精课件.ppt
综合实训三,水中菌落总数及大肠菌群数的测定,任务二,水中大肠菌群数的测定,综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定 任务二,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,水中总大肠菌群的测定,?,检验依据：,GB/T5750.12-2006,?,方法：,多管发酵法,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 水中总大肠菌群,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,总大肠菌群,?,总大肠菌群,37、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏,阴性、无芽孢杆菌,粪大肠菌群（耐热,-,）,?,总大肠菌群,非粪大肠菌群,EC,肉汤,44.5,士,0.5,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群 ?,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,总大肠菌群,?,MPN,（,most probable number,）,最可能数或最近似数,?,总大肠菌群,MPN,100mL,水样中所含的总大肠菌群的最近似数,或最可能数,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群 ?,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,指示菌（总大肠菌群）,?,指示菌,应具有的条件,和肠道致病菌的来源相同,在外界环境中的生存时间长,检验方法比较简便,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 指示菌（总大肠,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,实验目标,?,掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法,?,掌握水源水总大肠菌群的测定方法,?,判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生,质量,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验目标 ?掌,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,实验内容,1,2,3,1,培养基制备,乳糖发酵试验,分离培养,乳糖发酵试验,证实试验,4,5,结果分析与报告,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验内容 1,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,实验器材,?,水样,生活饮用水、水源水,?,培养基,乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基,?,试剂,革兰氏染色液、稀释剂等,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验器材 ?水,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,实验器材,?,其他,无菌工作台、酒精灯、稀释液、灭菌吸管、,灭菌试管、小倒管、试管架、接种环、恒,温培养箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香,柏油、平皿、天平、电炉等,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验器材 ?其,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,培养基制备,?,乳糖发酵管,双料管,单料管,放置,小倒,管并,排气,?,伊红美兰平板,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 培养基制备 ?,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,检验程序,生活饮用水,接种,乳糖发,酵试验,水源水,稀释,与,接种,分离培,养,证实试,验,结果报,告,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 检验程序 生活,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,一、乳糖发酵（初发酵）试验,?,自来水,直接接种,10mL,水样于双料培养基，每个水,样共接种,5,管,?,水源水,加大稀释度，每个稀释度接种,5,管，每个,水样共接种,15,管,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 一、乳糖发酵（,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,各,10ml,乳,糖,发,酵,试,1ml,验,水样,各,1ml,各,1ml,1:10,稀,释水,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 各10ml 乳,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,一、乳糖发酵（初发酵）试验,?,培养,36士l,24h,士,2h,?,观察产酸产气情况,不产酸产气,产酸产气,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 一、乳糖发酵（,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,第二天,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 第二天,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,二、分离培养,?,产酸产气的发酵管,分别转种,EMB,平板,（分区划线）,36士l,24h,士,2h,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 二、分离培养,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,第三天,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 第三天,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,三、证实试验（复发酵试验）,?,观察,EMB,平板菌落形态,深紫黑色、具有金属光,泽的菌落,紫黑色、不带或略带金,属光泽的菌落,淡紫红色、中心较深的,菌落,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 三、证实试验（,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,一半进行涂片、染色、镜检,另一半进行接种,（证实试验用）,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 一半进行涂片、,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,三、证实试验（复发酵试验）,?,只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,才接种乳糖蛋白胨管,36士l,24h,士,2h,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 三、证实试验（,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,第四天,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 第四天,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,四、结果报告,?,观察乳糖发酵管产气情况,产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在,?,查,MPN,检索表,根据证实为总大肠菌群阳性的管数,?,报告每,100ml,水样中的总大肠菌群最可能,数（,MPN,）,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,四、结果报告,?,5,管法结果见表,1,，,15,管法结果见表,2,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,四、结果报告,表,1,用,5,份,10mL,水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（,MPN ),5,个,10mL,管中阳性管数,最可能数（,MPN,）,0,1,2,3,4,5,2.2,2.2,5.1,9.2,16.0,16.0,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,四、结果报告,表,2,总大肠菌群,MPN,检索表,(,部分）,（总接种量,55.5mL,，其中,5,份,10mL,水样，,5,份,1mL,水样，,5,份,0.1mL,水样）,总大肠,总大肠,菌群,菌群,接种量,/ mL,/(MPN/,/(MPN/,10ml,管,1ml,管,0.1ml,管,10ml,管,1ml,管,0.1ml,管,100mL),100mL),0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,1,2,3,4,5,2,2,4,5,7,9,1,1,1,1,1,1,0,0,0,0,0,0,0,1,2,3,4,5,2,4,6,8,10,12,接种量,/ mL,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,四、结果报告,?,稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数,表,2,采用,3,个稀释度（,10mL,、,1mL,和,0.1mL),每,个稀释度,5,管,表,2,内所列接种量如改用,100mL,、,10mL,和,1mL,时，,表内数字应相应降低,10,倍；如改为,1mL,、,0.1mL,和,0.01mL,时,则表内数字应相应增加,10,倍。其余可类推。,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,四、结果报告,?,所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大,肠菌群未检出。,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,注意事项,1.,无菌操作。,2.,每递增稀释一次，即换一支,1mL,灭菌吸管。,3.,培养基使用前应先检查培养基内小倒管中有无,气泡。,4.,接种量在,1ml,及以下时用单料培养基，接种量超,过,1ml,时用双料培养基。,5.,检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过,15min,。,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 注意事项,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,习题作业,1.,判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染,程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，,该指示菌应具备的条件有哪些。,2.,总大肠菌群和粪大肠菌群有什么区别？如何,区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 习题作业,项目九,综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,习题作业,3.,检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过,15min,，为什么？,4.,单料和双料培养基有什么区别？什么时候使,用双料培养基？,5.,生活饮用水的菌落总数、总大肠菌群标准是,多少？畜禽饮用水总大肠菌群标准是多少？,项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 习题作业,
