免疫球蛋白宣讲培训课件.ppt

免疫球蛋白宣讲,免疫球蛋白宣讲,第二节 免疫球蛋白的结构,一 、Ig的基本结构,2,免疫球蛋白宣讲,第二节 免疫球蛋白的结构一 、Ig的基本结构2免疫球蛋白宣,（一）、重链和轻链 Ig的两条长链称为重链（Heavy chain, H链）, 含 450-550aa，分子量为50-75kD。 重链可分为、链 Ig的两条短链称为轻链（Light chain, L链） 含214aa，分子量为25kD。可分为和型。,IgM IgG IgA IgD IgE,3,免疫球蛋白宣讲,（一）、重链和轻链 IgM IgG IgA,（二）可变区和恒定区 .可变区：重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，称为可变区（variable region,V区）； VH和VL 。2.恒定区：靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，称为恒定区(constant region, C区)；CH（CH1、CH2、CH3和CH4 ）和CL.,4,免疫球蛋白宣讲,（二）可变区和恒定区 4免疫球蛋白宣讲,高变区（hypervariable region，HVR）： 氨基酸组成和排列顺序特别易变化 VH或VL各3个高变区：HVR1、HVR2和HVR3骨架区（framework region,FR） 高变区之外的区域。 VH和VL各有四个骨架区， FR1、FR2、FR3和FR4表示。,5,免疫球蛋白宣讲,高变区（hypervariable region，HVR）：,互补性决定区（complementarity-determining region，CDR）： VH和VL的3个高变区共同组成Ig的抗原结合部位，故高变区又被称为互补性决定区。,6,免疫球蛋白宣讲,互补性决定区（complementarity-determi,（三）免疫球蛋白的功能区1定义：Ig的H链、L链每隔110个氨基酸由链内二硫键接构成一个能行使特定功能的球形结构，称为Ig的功能区。L链功能区：2个，（VL，CL各一个）H链功能区：IgG，IgA，IgD，4个（V区1个，C区3个）, IgM，IgE，5个（V区1个，C区4个）铰链区：位于CH1、CH2之间。,7,免疫球蛋白宣讲,（三）免疫球蛋白的功能区7免疫球蛋白宣讲,V区,C区,VL+VH区：抗原结合部位（2个）,CH3区：是Ig与多种细胞Fc受体结合的部位.,CL和CH 区：具有同种异型抗体的遗传标记。（2个）,CH2区：IgG的补体结合点和通过胎盘的部位,2.功能区的作用,铰链区：赋予弹性和伸展性.,8,免疫球蛋白宣讲,V区C区VL+VH区：CH3区：是Ig与多种细胞Fc受体结合,二、Ig的其他结构（一）连接链（J链）：富含半胱氨酸得多肽链 由浆细胞合成的一种糖蛋白。 IgA和IgM含有J链 可稳定Ig多聚体的成份（二）分泌片 是分泌型IgA(sIgA）的一个辅助成分， 为一种糖肽，由粘膜上皮细胞合成和分泌。 介导IgA二聚体的转运 保护sIgA的铰链区免受蛋白酶的水解破坏,9,免疫球蛋白宣讲,二、Ig的其他结构9免疫球蛋白宣讲,J 链,分泌片,sIgA,10,免疫球蛋白宣讲,J 链分泌片sIgA10免疫球蛋白宣讲,11,免疫球蛋白宣讲,11免疫球蛋白宣讲,三 Ig的酶解片断,1.木瓜蛋白酶 2个Fab 段：结合抗原 1个Fc段：结合细胞2.胃蛋白酶F(ab)段:双价抗体活性pFc段：无生物学活性,12,免疫球蛋白宣讲,三 Ig的酶解片断1.木瓜蛋白酶12免疫球蛋白宣讲,第三节免疫球蛋白的生物学活性,11.特异性结合抗原,清除病原微生物 ； 2.激活补体（IgG、IgM）；,13,免疫球蛋白宣讲,第三节免疫球蛋白的生物学活性13免疫球蛋白宣讲,3与多种细胞表面Fc受体结合；（1）调理作用（opsonization)：IgG、IgM指抗体促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用。 （2）抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)：IgG、IgA、IgE指表达Fc受体的细胞（ NK细胞、吞噬细胞)通过与抗体Fc段结合直接杀伤被抗体包被的靶细胞。 （3）I型超敏反应：IgE 与肥大细胞、嗜碱性粒细胞Fc受体结合，促使其合成和释放生物活性物质。,14,免疫球蛋白宣讲,3与多种细胞表面Fc受体结合；14免疫球蛋白宣讲,四、穿过胎盘 IgG所独有，是婴儿获得天然被动免疫的主要原因，主要借助胎盘滋养层细胞表面的FcR进行的。五、免疫调节,15,免疫球蛋白宣讲,四、穿过胎盘15免疫球蛋白宣讲,第三节 五类Ig的主要特性,16,免疫球蛋白宣讲,第三节 五类Ig的主要特性16免疫球蛋白宣讲,一、IgG（一） 特性1、存在形式：单体，占血清Ig总量的3/4。2、合成时期：婴儿出生后三个月开始合成。3、半衰期：23天，是所有抗体中半衰期最长的。（二） 生物活性1、是主要的抗感染抗体 2、是补体经典激活途径参与者。3、是唯一可以穿过胎盘的抗体4、具有调理作用和介导ADCC效应的功能。,17,免疫球蛋白宣讲,一、IgG（一） 特性1、存在形式：单体，占血清Ig,四种亚类的IgG分子在血清中的浓度不同，所发挥的生物学特性亦不相同。,18,免疫球蛋白宣讲,IgG 分 子 的 四 种 亚 型IgG1IgG4IgG3,二、IgM（一）特性1、存在形式：五聚体，占血清Ig总量的10%，是分子量最大抗体。 mIgM 是 BCR 2、合成时期：胎儿晚期已能合成，最早合成和初次免疫应答中最早出现的抗体。3、半衰期：5天，（三） 生物活性1、具有强大的调理、激活补体及杀菌作用 。3、不能介导ADCC效应。4、ABO血型天然抗体。,19,免疫球蛋白宣讲,二、IgM19免疫球蛋白宣讲,20,免疫球蛋白宣讲,IgM J 链IgM 抗,三、IgA（一） 特性：1、存在形式：单体（血清型）和双体（分泌型）；其中分泌型主要分布于呼吸道、消化道及初乳等分泌液中。2、合成时期：婴儿在出生46个月才能合成IgA。（二） 生物活性1、是机体局部粘膜防御感染的重要因素（分泌型IgA）。2、具有中和毒素作用（血清型IgA）。3、辅助婴儿抵抗呼吸道、消化道感染（初乳中含分泌型IgA）,21,免疫球蛋白宣讲,三、IgA（一） 特性：1、存在形式：单体（血清型）和双,四、IgD（一） 特性1、存在形式：单聚体，仅占血清Ig总量的1%。2、合成时期：较晚。 3.半衰期：3天（二） 生物活性1、成熟B细胞的重要表面标志。2、血清中IgD的功能尚不清楚。,22,免疫球蛋白宣讲,四、IgD（一） 特性1、存在形式：单聚体，仅占血清Ig,五、IgE（一） 特性1、存在形式：单聚体，仅占血清Ig总量的0.002%。2、合成时期：最晚合成的抗体。（三） 生物活性1、引发型过敏反应。2、抗寄生虫的主要抗体。,23,免疫球蛋白宣讲,五、IgE（一） 特性1、存在形式：单聚体，仅占血清Ig,第四节Ig的基因及抗体的多样性,一、Ig的基因结构 1.Ig轻链基因结构（1）Ig 型轻链基因：V、J、C 小鼠：350 5 1 人：100 5 1（2）Ig型轻链基因：V、J、C 小鼠：2 4 4 人：2 6 6,24,免疫球蛋白宣讲,第四节Ig的基因及抗体的多样性一、Ig的基因结构 24免疫,2. Ig重链的基因结构 V、D、J、C小鼠：300-1000 20 4 8 人： 75-250 30 6 11,25,免疫球蛋白宣讲,2. Ig重链的基因结构25免疫球蛋白宣讲,26,免疫球蛋白宣讲,26免疫球蛋白宣讲,27,免疫球蛋白宣讲,27免疫球蛋白宣讲,二、Ig基因重排由于Ig基因成簇存在，编码完整的功能性Ig多肽链必须通过基因重排。,28,免疫球蛋白宣讲,二、Ig基因重排28免疫球蛋白宣讲,重链胚系基因,重链基因重排,初始RNA转录,mRNA,新合成多肽,29,免疫球蛋白宣讲,重链胚系基因重链基因重排初始RNA转录mRNA新合成多肽29,轻链基因的重排、RNA处理和蛋白质表达的过程,30,免疫球蛋白宣讲,轻链基因的重排、RNA处理30免疫球蛋白宣讲,(二)抗体多样性机制: 1.组合多样性：Ig基因库中众多V、D、J、C基因家族成员极端多样性的排列组合；2.连接多样性：基因重排过程中可出现不同的连接点； 3.体细胞突变：已成熟的B细胞受抗原刺激后，在发育过程中重排基因所发生的突变。4. L链H链相互随机配对。,31,免疫球蛋白宣讲,31免疫球蛋白宣讲,小鼠Ig多样性（举例）,32,免疫球蛋白宣讲,多肽链基因片段数V区基因重组方式重排和随机配对后推算的多样性,第五节 抗体的应用免疫学检测,免疫学检测是以特异性抗原-抗体反应为基础的检测方法。具有很高的灵敏度和能快速提供检测结果等优点。,33,免疫球蛋白宣讲,第五节 抗体的应用免疫学检测免疫学检测是以特异性抗原-,抗原抗体反应的特点特异性抗原抗体反应的可见性适当的比例和浓度可逆性,34,免疫球蛋白宣讲,抗原抗体反应的特点34免疫球蛋白宣讲,应 用,1、利用已知抗原检测未知抗体,（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病： 伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。（2）检测自身抗体诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关节炎等。,2、利用已知抗体检测未知抗原,（1）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物半抗原;,35,免疫球蛋白宣讲,应 用1、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物,抗原或抗体的检测方法,凝集反应沉淀反应免疫标记技术,36,免疫球蛋白宣讲,抗原或抗体的检测方法 凝集反应36免疫球蛋白宣讲,（一）凝集反应（agglutination）,颗粒性抗原（红细胞、细菌等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。,1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集,细菌的鉴定和血型的检查,一、 传统免疫分析,37,免疫球蛋白宣讲,（一）凝集反应（agglutination） 颗,2、间接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗体混合出现的凝集现象。,检测病原体可溶性抗原，病原体感染后产生的抗体,38,免疫球蛋白宣讲,2、间接凝集（indirect agglutination）,（二）沉淀反应（precipitation）,可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。,免疫比浊法,39,免疫球蛋白宣讲,（二）沉淀反应（precipitation）,1、单向免疫扩散（single immunodiffusion）：可溶性抗原在含相应抗体的琼脂凝胶中进行的扩散，为一种半定量试验。,环的直径与抗原含量成正相关,40,免疫球蛋白宣讲,1、单向免疫扩散（single immunodiffusio,2、双向免疫扩散（doule immunodiffusion）：抗原与抗体在琼脂板中相互扩散而形成一定类型的沉淀线的方法。常用于抗原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。,一致,部分一致,不一致，有多种成分,41,免疫球蛋白宣讲,2、双向免疫扩散（doule immunodiffusion,3、免疫电泳（immunoelectrophoresis）,常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。,1）简易免疫电泳先将抗原样品在琼脂中进行电泳分离，可将蛋白质抗原分子分成不同的区带，然后将抗血清加入琼脂板横槽中，使二者进行双向扩散，当比例合适时即形成特异性的沉淀线，,42,免疫球蛋白宣讲,3、免疫电泳（immunoelectrophoresis）常,2）对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术,43,免疫球蛋白宣讲,2）对流免疫电泳(counter immunoelectro,3）火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis)，抗原在电场下通过含有一定量抗体的琼脂凝胶，并于抗体发生反应，形成沉淀带。可定量分析。,44,免疫球蛋白宣讲,3）火箭免疫电泳(rocket immunoelectro,用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性,荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明（红色荧光）,放射性同位素： 125I、131I,酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶,免疫荧光检测法（IFA）,放射免疫检测法（RIA）,酶免疫检测法（EIA）,二、现代免疫分析-免疫标记技术,45,免疫球蛋白宣讲,用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提,1抗体制备。多克隆抗体单克隆抗体，2标记物与标记方法。 放射性同位素、酶、荧光分子、化学和生物发光系统。,免疫分析基本环节,46,免疫球蛋白宣讲,1抗体制备。免疫分析基本环节 46免疫球蛋白宣讲,3分析方式设计：非竞争方式、竞争方式；直接法、间接法；标记抗原、标记抗体；均相、非均相4.信号检测。与相应的标记物对应。主要为分光光度法、荧光光度法、化学发光检测法。,47,免疫球蛋白宣讲,3分析方式设计：非竞争方式、竞争方式；直接法、间接法；,（一）、放射免疫分析 (Radioimmunoassay RIA) 利用放射性同位素的测量方法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素分析技术。特点： 灵敏度高、特异性强、样品用量少、标记物容易制备以及放射性强度容易检测,48,免疫球蛋白宣讲,（一）、放射免疫分析 (Radioi,1.放射免疫分析必需的基本试剂：抗体：作为标记药物和非标记药物竞争结合的蛋白。标记药物：提供可检测的信号(响应值)（放射性）。非标记药物：在标准曲线制备时是药物标准品，在样品中则为被测药物分离剂分离结合与游离部分,49,免疫球蛋白宣讲,1.放射免疫分析必需的基本试剂：49免疫球蛋白宣讲,结合相,游离相,2.基本原理：RIA是标记抗原和未标记抗原对有限量抗体的竞争性结合。,50,免疫球蛋白宣讲,结合相游离相2.基本原理：RIA是标记抗原和未标记抗原对有限,标记药物(S*)+抗体(Ab) 标记药物-抗体复合物(S*-Ab) F* P-B* B* F*、B*分别是游离的和与抗体结合的标记药物浓度，它们可通过产生的信号(如放射性、光吸收、荧光发射)强度反映出来(用仪器检测)。,51,免疫球蛋白宣讲,51免疫球蛋白宣讲,非标记药物（S） F +标记药物(S*)+抗体(Ab) 标记药物-抗体复合物(S*-Ab) F* P-B-B* B* 非标记药物-抗体复合物(S-Ab) B随着S的加入，它对S*同Ab的结合则起竞争抑制作用，表现为使B*减少、使F*增加，并且只要S加入一定量，便有对应的F*和B*信号强度值，因此可建立S量(浓度)与响应值(F*和B*的信号强度)之间的函数关系，作成剂量反应曲线。,52,免疫球蛋白宣讲,非标记药物（S）52免疫球蛋白宣,免疫分析中各种竞争结合抑制曲线示意图,53,免疫球蛋白宣讲,免疫分析中各种竞争结合抑制曲线示意图53免疫球蛋白宣讲,54,免疫球蛋白宣讲,54免疫球蛋白宣讲,3.标准曲线的绘制与样品测定步骤,取标准抗原，用无放射活性的空白血清或血浆稀释成58个系列浓度。加入定量标记抗原，其总放射性(T)应能满足准确测量的需要。加入定量的已稀释好的特异抗体，其抗体的量应满足灵敏度的要求。将标准抗原、标记抗原、特异抗体与缓冲液混匀后，在适当条件下温育，待反应平衡后测定总计数率(T)。,55,免疫球蛋白宣讲,3.标准曲线的绘制与样品测定步骤取标准抗原，用无放射活性的空,加入分离剂，使结合部分(B)与游离部分(F)分离。测定各管结合部分或游离部分的计数率。标准曲线通常以标准抗原(待测药物标准品)的浓度为横坐标，以结合率(B)为纵坐标作图。 纵坐标B的计算：将与抗体结合的标记药物的放射性强度(B)与加入的标记药物总放射性强度(T)比较，即B=(BT)100；,56,免疫球蛋白宣讲,加入分离剂，使结合部分(B)与游离部分(F)分离。56免疫球,57,免疫球蛋白宣讲,57免疫球蛋白宣讲,例：125IRIA(DCC沉淀法)测定血清中地高辛浓度,待测血清样品50l样品管中;含不同浓度地高辛标准品的血清50l标准曲线各管中;50l 空白人血清零标准管.各管中依次加入保温液100l抗体溶液100l125I标记的地高辛(溶液)100l摇匀在室温(1525)放置30min-计数器测定各管的总计数T(即加人的协I总放射性剂量)在电磁搅拌(或手摇)下，迅速向各管内加人1ml工作液(全部加完控制在5min内)，摇匀离心10min(3000r/min)倾去上清液-计数器测定各管中沉淀的计数F(游离协I地高辛放射性强度)计算出标准曲线各管和样品各管的结合率。,58,免疫球蛋白宣讲,例：125IRIA(DCC沉淀法)测定血清中地高辛浓度,（二）酶免疫分析（enzyme immunoassay） 标记物为酶，酶本身并不能直接产生信号，必须要有其他试剂如底物、辅酶等的参与才能完成酶反应，从而引起吸收光谱等的变化供测定。 常用的酶为： 辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、-半乳糖苷酶。,59,免疫球蛋白宣讲,（二）酶免疫分析（enzyme immunoassay）5,60,免疫球蛋白宣讲,酶 底 物显色反应 测定波长 辣根过氧化物酶 邻苯二胺四甲,1. 均相酶免疫分析，EMIT法（enzyme multipled immunoassay technique） 基本原理：酶标药物与未标记药物互相竞争有限量的抗体(Ab)，测定小分子抗原。 酶标抗原(AgE)同抗体(Ab)结合后，所形成的酶标抗原一抗体结合物(AgEAb)可使酶的活性发生改变(增强或减弱)； 可直接通过测定酶活性的变化，求出样品含量的方法。,61,免疫球蛋白宣讲,1. 均相酶免疫分析，EMIT法（enzyme multip,62,免疫球蛋白宣讲,62免疫球蛋白宣讲,2.酶联吸附免疫分析（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）属于非均相免疫分析的代表，普遍应用于各领域。基本原理：是将过量抗体（抗原）包被于载体上，通过抗原抗体反应使酶标记抗体（抗原）也结合在载体上，经洗涤去除游离的酶标记抗体（抗原）后，加入底物显色，定性或定量分析有色产物确定待测物的存在与含量的检测技术。,63,免疫球蛋白宣讲,2.酶联吸附免疫分析（enzyme-linked immun,1）双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检样品，再加酶标抗体，加底物显色应用： 二价或二价以上的较大分子抗原测定 如乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等,64,免疫球蛋白宣讲,1）双抗体夹心法64免疫球蛋白宣讲,65,免疫球蛋白宣讲,65免疫球蛋白宣讲,获得待分析物的未标定抗体,将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体,洗涤除去未结合的抗体及杂质,加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点,洗涤并除去未结合的封闭蛋白,加受检标本（抗原）形成固相抗体抗原复合物,洗涤除去其他未结合的物质,加酶标抗体生成抗体待测抗原酶标记抗体的复合物,彻底洗涤未结合的 酶标抗体,加底物进行酶催化反应,根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定,66,免疫球蛋白宣讲,获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相洗涤除去未结合的加,2）间接法方法：利用酶标记的抗抗体以检测已与固相上抗原结合的受检抗体应用： 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定,67,免疫球蛋白宣讲,2）间接法67免疫球蛋白宣讲,68,免疫球蛋白宣讲,68免疫球蛋白宣讲,包被,反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体,1,2,3）竞争法方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。 应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）,69,免疫球蛋白宣讲,包被反应123）竞争法方法：用已知抗体包被，加入待测血清，,70,免疫球蛋白宣讲,70免疫球蛋白宣讲,ELISA试剂盒,71,免疫球蛋白宣讲,ELISA试剂盒71免疫球蛋白宣讲,72,免疫球蛋白宣讲,72免疫球蛋白宣讲,（三）胶体金免疫快速检测法,1.双抗体夹心法-大分子抗原,73,免疫球蛋白宣讲,（三）胶体金免疫快速检测法1.双抗体夹心法-大分子抗原 73,74,免疫球蛋白宣讲,74免疫球蛋白宣讲,75,免疫球蛋白宣讲,75免疫球蛋白宣讲,样本加到S区，进入B区和B区的金标抗体发生免疫反应，再层析到T线位置时，如果样本中含有待测抗原，则T线不显色或显色很淡，C线显色，这样得到的是阳性结果。当待测样本中不含抗原时，再层析到T线位置时，则T线显色，C线也显色，得到阴性结果,S,B,T,C,D,2.竞争抑制法,76,免疫球蛋白宣讲,样本加到S区，进入B区和B区的金标抗体发生免疫反应，再层析到,能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗HIV抗体的检测。,（四）免疫印迹法,77,免疫球蛋白宣讲,第五节 抗体生成技术,整体水平抗体生成技术,细胞工程抗体生成技术,基因工程抗体生成技术,多克隆抗体（抗血清）,单克隆抗体,嵌合抗体、改形抗体,组合抗体库技术,噬菌体抗体库技术,Ig基因转基因小鼠,抗体真核表达技术,78,免疫球蛋白宣讲,第五节 抗体生成技术整体水平抗体生成技术细胞工程抗体生成技术,一、多克隆抗体（polyclonal antibody） 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体.存在问题特异性差, 用于免疫学检测容易出现交叉反应,79,免疫球蛋白宣讲,一、多克隆抗体（polyclonal antibody）79,传统抗血清,抗 原,免 疫,所有抗体混合,1,2,3,4,脾 脏,淋巴結,B 細胞,制备过程,80,免疫球蛋白宣讲,传统抗血清抗 原免 疫所有抗体混合123412341234脾,传统抗血清的交叉反应,专一性反应,沒有反應,交叉反应,+,-,?,1 2 3 Ag A,x y z Ag B,1 2 0 Ag A,81,免疫球蛋白宣讲,传统抗血清的交叉反应专一性反应沒有反應交叉反应+-? 1,二、单克隆抗体（monoclonal antibody） 通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.,82,免疫球蛋白宣讲,二、单克隆抗体（monoclonal antibody）8,可生产有用抗体的 淋巴細胞 若与 癌细胞融合，则形成稳定而可培养的细胞株。,癌细胞可培养生长,浆细胞B cell可分泌抗体,融合瘤Hybridoma,细胞融合,两组染色体混在一起,也可以培养生長产生专一性抗体,一個 B cell 只产生一种抗体,83,免疫球蛋白宣讲,可生产有用抗体的 淋巴細胞 若与 癌细胞融合，则形成稳定而可,抗体,-a,-b,-c,-d,-a -b -c -d,抗原決定基,BALB/c,a,b,b,c,d,传统抗体 (抗血清) 是所有抗体的混和,脾脏产生各种 B 細胞,免疫前要先把抗原作成乳剂,免疫,抗原,采血后可得传统抗血清,已建立之小鼠骨髓癌细胞株,由脾脏收集 B 細胞,免疫后的脾脏,约在两月內注射五到八次,Ag X,制备过程,84,免疫球蛋白宣讲,抗体-a-b-c-d-a -b -,细胞融合,AgX,AgX,ELISA,HAT,PEG Cell fusion,融合瘤细胞,d,d,abcd,abcd,+,+-,X,-d,-c,-b,-a,+,-,-d,分株培养筛选,单抗,传统抗体 (抗血清),试验专一性,对抗原的反应,无法分辨,完全不同,85,免疫球蛋白宣讲,-d细胞融合-a-b-c-dAgAgELISAHATPEG,免疫球蛋白宣讲培训课件,McAb 在治疗中存在的问题（障碍）：1.McAb均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗体（HAMA），加速了排斥反应。2.完整的抗体分子的相对分子质量过大，难以穿透实体组织，达不到有效的治疗浓度。解决问题的方法或途径基因工程技术,87,免疫球蛋白宣讲,McAb 在治疗中存在的问题（障碍）：87免疫球蛋白宣讲,三、基因工程抗体(Genetic engineering antibody) 根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。 主要包括 嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体等。,88,免疫球蛋白宣讲,三、基因工程抗体(Genetic engineering,1 人一鼠嵌合抗体(Chimeric Antibodies),人一鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。,89,免疫球蛋白宣讲,1 人一鼠嵌合抗体(Chimeric Antibodies),2人源化抗体(humanized antibody,把鼠抗体的CDR序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体称CDR移植抗体或改型抗体，也就是人源化抗体。,90,免疫球蛋白宣讲,2人源化抗体(humanized antibody,小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最小识别单位等几种。,3 小分子抗体,(1)Fab 由完整的轻链和Fd组成，大小为完整分子的1/3。,91,免疫球蛋白宣讲,小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最小识别,Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。,(2)Fv 或 ScFv,Fv,ScFv,连接肽,92,免疫球蛋白宣讲,Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。(2,即为VH，约为完整分子的1/12。它只由一个结构域构成，故称单域抗体。单域抗体尽管亲和力有所降低，但仍保持着原单抗的特异性。,(3)单域抗体,VH,93,免疫球蛋白宣讲,即为VH，约为完整分子的1/12。它只由一个结构域构成，,4 双特异抗体,双特异性抗体(bispecific antibody,BSAb)是指能同时识别2种抗原的抗体。抗体融合蛋白 将抗体分子片段与其他蛋白融合，可得到具有多种生物学功能的融合蛋白，这些融合蛋白能利用抗体的特异性识别功能将某些生物活性导向特定部位。,94,免疫球蛋白宣讲,4 双特异抗体双特异性抗体(bispecific ant,抗体库技术是用基因工程方法把人或其他动物的全部抗体的轻、重链可变区基因克隆出来，在原核载体上表达，然后筛选出所需的特异基因和抗体。,5 抗体库技术,95,免疫球蛋白宣讲,5 抗体库技术95免疫球蛋白宣讲,重点掌握1.抗体和免疫球蛋白的概念、2.免疫球蛋白的基本结构、功能区及其功能、3.抗体的生物学活性、了解：五类免疫球蛋白的特点与功能。,96,免疫球蛋白宣讲,重点掌握96免疫球蛋白宣讲,4.ELISA法的主要类型及基本原理5.胶体金免疫快速检测法的主要类型及基本原理6.多克隆抗体及单克隆抗体,97,免疫球蛋白宣讲,4.ELISA法的主要类型及基本原理97免疫球蛋白宣讲,5种免疫球蛋白的划分是根据：（ ）AH链和L链均不同 BV区不同 CL链不同 E连接H链的二硫键位置和数目不同下列备选答案中，错误的是: A.抗体都是免疫球蛋白B.Ig单体分子一般是二价C.一种浆细胞产生的抗体分子与其表面抗原识别受体具有 相同的抗原结合特性D.铰链区连接免疫球蛋白的H链和L链E.超变区位于免疫球蛋白的可变区内,DH链不同,98,免疫球蛋白宣讲,5种免疫球蛋白的划分是根据：（ ）AH链和L链均不同,能与肥大细胞结合的Ig是：IgA B. IgD D. IgG E. IgMIgG分子中能与巨噬细胞上受体结合的功能区是：A. CL B. CH1区 C. CH2区与抗原结合后，激活补体能力最强的Ig是A. IgA B. IgG C. IgM D. IgD,C. IgE,D.CH3区,E.IgE,99,免疫球蛋白宣讲,能与肥大细胞结合的Ig是：C. IgED.CH3区E.IgE,用ELISA双抗体夹心法检测血清中甲胎蛋白（AFP），应选择的固相包被物是: （ ） A.已知AFP B.酶标记AFP D.酶标记抗AFP抗体 E.待检血清酶联免疫吸附试验间接法所用的酶标记物是 A.酶标记抗体 B.酶标记抗补体C3b抗体C.酶标记抗原,C.抗AFP抗体,D.酶标记抗抗体,100,免疫球蛋白宣讲,C.抗AFP抗体D.酶标记抗抗体100免疫球蛋白宣讲,