考研科目 动物生物化学 第3章 蛋白质ppt课件.ppt

第三章 蛋白质的结构与功能,1.蛋白质的功能、分类、化学组成及初级结构2.蛋白质的高级结构3.蛋白质结构与功能的关系4.蛋白质的物理化学性质5.蛋白质的分离提纯,本章主要内容,重点：氨基酸及蛋白质化学结构与性 质；蛋白质结构与功能关系。难点：氨基酸的两性电解质性质；蛋 白质高级结构；血红蛋白的协 同效应。,(1)蛋白质功能的多样性,催化功能,结构组成,储存运输功能,运动功能,防御功能,营养功能,调节功能,遗传信息,1.蛋白质的功能、分类、组成及结构,蛋白质存在于所有的生物细胞中，是构成生物体最基本的结构物质和功能物质。 蛋白质是生命活动的物质基础，它参与了乎所有的生命活动过程。, 按形状可将蛋白质分为： 纤维状蛋白质：多为结构蛋白，毛发、丝等，多不溶于水，支撑保护作用。 球状蛋白质：具有广泛的生物学功能。如酶、蛋白类激素等，溶解度好。,（2）蛋白质的分类,简单蛋白（simple protein）：仅有蛋白质组成，水解后产生各种氨基酸。 根据溶解度的不同：清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白、精蛋白合硬蛋白等7种。, 按结构和功能可分为：,结合蛋白（conjugated protein）：在蛋白质分子中除了含有氨基酸成分外，还要有其他的成分的存在，才能保证其正常生物活性的蛋白质。 分子中包含蛋白质和非蛋白质（辅基）两部分。,（3）蛋白质的化学组成, 元素组成：蛋白质是一类含氮有机 化合物。 碳 50-55% 氢 6.0-8.0 氧 20-23 氮 15-17% 硫 03-2.5% 微量元素（磷、铁、碘、锌和铜等）,蛋白质的含氮量,大多数蛋白质的含氮量接近于16%，这是蛋白质元素组成的一个特点，是凯氏定氮法测定蛋白质含量的计算基础。 蛋白质含量=蛋白氮 6.25 蛋白质系数：即1克氮所代表的蛋白质的克数,即6.25。, 蛋白质的基本结构单位氨基酸,蛋白质经酸、碱和酶处理后，使其彻底水解得到产物为氨基酸，组成蛋白质的常见20种氨基酸中除脯氨酸外，均为-氨基酸：,不变部分,可变部分,碳原子,蛋白质分子量的变化范围很大，从大约六千到一百万道尔顿（Da），可高达数百万甚至数千万。, 蛋白质的大小与分子量,单体蛋白质（monomeric protein）:由一条多肽链组成，如溶菌酶和肌红蛋白。 寡聚（oligomeric）或多聚(multimeric)蛋白质：由两条或多条多肽组成，如血红蛋白和己糖激酶。 亚基或亚单位（subunit） ：每条多肽链。, 氨基酸结构和构型,结构通式,各种氨基酸的区别在于侧链R基的不同,蛋白质中常见的氨基酸有20种。 除脯氨酸（亚氨基）以外，与羧基（-COOH）相邻的-碳原子（C）上都有一个氨基（-NH2），称为-氨基酸。,不变部分,可变部分,-氨基酸的立体异构体,除甘氨酸外，其余19种氨基酸的碳原子均是手性碳原子每一种氨基酸都有D-型和L-型，天然蛋白质中所有氨基酸均为L型。, 编码氨基酸：组成蛋白质的20种氨 基酸 非编码稀有氨基酸 非蛋白质氨基酸, 氨基酸的分类,蛋白质的20种常见氨基酸,编码氨基酸：20种常见的氨基酸,按其R侧链极性和所带电荷的不同，分为四大类： 不带电荷极性氨基酸 ：Gly, Ser, Thr, Cys,Tyr,Asn,Gln 带负电荷极性氨基酸 ： Asp, Glu 带正电荷极性氨基酸 ： His, Arg, Lys 非极性氨基酸：Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Met,在中性pH条件下, 蛋白质中稀有氨基酸,没有相应的三联体遗传密码。由编码氨基酸经羟基化、甲基化、磷酸化等修饰形成的衍生物。 例如：胶原蛋白和弹性蛋白中的 4-羟脯氨酸 、5-羟赖氨酸等。,胶原蛋白和弹性蛋白的组成部分与血液凝固有关参与细胞生长和调节功能,作用, 非蛋白氨基酸,广泛存在于各种细胞和组织中，呈游离或结合态，但并不存在蛋白质中的一类氨基酸，大部分也是蛋白质氨基酸的衍生物。 H2N-CH2-CH2-COOH H2N-CH2-CH2-CH2-COOH,-丙氨酸,-氨基丁酸,细胞壁的重要组成部分（D谷氨酸、D-丙氨酸）。 重要的代谢物前体和中间产物（胍氨酸、鸟氨酸）。 传递神经冲动的神经递质（-氨基丁酸）。 抗菌杀虫。,作用,（4）氨基酸的主要的理化性质,无色晶体、有味（甜、鲜、苦）或无味，不同强度溶于水、稀酸、稀碱，但不溶于任何有机溶剂。 除甘氨酸外，氨基酸均含有一个手性-碳原子，因此都具有旋光性。氨基酸的比旋光度是物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据。, 物理性质：,天然蛋白质分子的20种氨基酸，以色氨酸和酪氨酸对紫外光有较强的光吸收。其吸收峰在280nm左右，以色氨酸吸收最强。, 紫外吸收性质：,氨基酸分子是一种两性电解质。 氨基酸分子中同时带有可解离的弱碱性基团（-NH3 - NH4+）和弱酸性基团（- COOH- COO -）。, 氨基酸的两性解离与等电点,氨基酸的两性解离,氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子。 两性离子（zwitterion）:带有数量相等的正负两种电荷的离子。,两性离子,C,H3N+,H,R,C,R,COOH,C,H2N,H,R,氨基酸溶液在某一特定的pH时，正负电荷数量相等，净电荷为零，在直流电场中，既不向正极移动，也不向负极移动。这时的pH值称为该氨基酸的等电点。,等电点(Isoelectric point,PI）,pH=pI,pHpI,pHpI,氨基酸的兼性离子,阳离子,阴离子,中性分子,酸性溶液：pHpI，氨基酸带负电荷，电 泳时向正极移动。 在一定PH值范围内，氨基酸溶液的PH值离等电点越远，氨基酸所带的净电荷愈大。,I与pH的关系,氨基酸在等电点时，由于静电引力的作用，溶解度最小，容易发生沉淀。 pI是氨基酸的特征常数。分离、纯化和鉴定AA。,氨基酸等电点的确定：,酸碱滴定（滴定曲线）,根据pK值计算：等电点等于两性离 子两侧pK值的算术平均数。,pI = ,pK1+pK2,2, 氨基酸的化学反应,与印三酮：蓝紫色物质，氨基酸定 量和定性分析。2，4二硝基氟苯：黄色化合物， 蛋白质末端氨基酸分析。巯基：与金属（Hg、Ag）离子结合,蛋白质结构层次,（5）蛋白质的化学结构,是指多肽链上各种氨基酸残基的排列顺序，又称蛋白质的初级结构，蛋白质的共价结构。, 蛋白质一级结构的概念,(1) 初级结构(primary structure),一个氨基酸的氨基(NH2)与另一个氨基酸的羧基(COOH)缩合脱去1分子水形成的酰胺键，称为肽键。, 肽键(peptide bond)：,由2个氨基酸分子缩合而成的肽，含一个肽键，称为二肽。 含3个以上氨基酸的肽，称为多肽（Polypeptide）。 由多个氨基酸残基彼此连接而成的链状多肽，称为多肽链（Ploypeptide chain）。,二肽、多肽和多肽链,上图为： 丝氨酰-甘氨酰-酪氨酰-丙氨酰-异亮氨酸, 氨基酸残基(amino acid residue),多肽链上的每个氨基酸，由于形成肽键而失去了一分子水，成为不完整的分子形式。称为氨基酸残基(amino acid residue),组成蛋白质的多肽链数目; 多肽链的氨基酸数目、种类和顺序; 多肽链内或链间二硫键的数目和位置; 其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序。,C末端,C末端,N末端,N末端, 蛋白质的一级结构的组成, 蛋白质的一级结构的命名,从N末端氨基酸残基开始依次命名。,中文氨基酸残基命名法：中文单字表示法：丝-缬-酪-天冬-谷胺三字母符号表示法：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln单字母法：S-V-Y-D-Q, 蛋白质一级结构的测定,拆分多肽链,断开多肽链内的二硫键,测定每一肽链的氨基酸组成,鉴定多肽链的N-末端和C-末端,裂解多肽链为较小的肽段,测定各肽段的氨基酸序列,利用重叠肽确定多肽链中氨基酸的顺序,确定二硫键的位置,蛋白质测序的重要方法,N末端测定,二硝基氟苯（DNFB）法：肽游离末端NH2与DNFB反应生成DNP-肽，最后水解生成黄色DNP-氨基酸。,丹磺酰氯（DNS）法：用DNS取代DNFB，生成DNS-氨基酸。,苯异硫氰酸（PITC）法：生成PTH-氨基酸，从肽上断裂下来。,肼解法：最重要的化学方法，肽与肼反应，除C-末端氨基酸游离外，其它氨基酸转变为氨基酸酰肼化物。,还原法：C-末端氨基酸用硼氢化锂还原成相应的-氨基醇。,羧肽酶法：最有效、最常用。,C末端测定,2 蛋白质的高级结构,（1）肽单位平面结构和二面角（2）二级结构（3）超二级结构（4）结构域（5）三级结构（6）四级结构,蛋白质的构象（Conformation）,构象（Conformation）：指蛋白质分子中所有原子和基团在空间的排布，又称为空间结构或三维结构。 原子或基团由单键旋转可能形成的不同的立体结构。这种空间位置的改变并不涉及共价键的破裂。,蛋白质的构型（Configuration）,指在相同结构式的立体异构体中原子或基团在空间的取向。 构型只有共价键的破裂才能互变（氨基酸D型变L型）。,维持蛋白质分子构象的化学键,氢键、范德华力、疏水作用力、离子键和二硫键等, 肽单位（peptide unit）,肽单位或肽单元：肽链主链上的重复结构，C-CO-NH-C。,（1）肽单位和二面角,A 肽键的键长是0.1325nm,比CN单键(0.144nm)短些，比C=N双键(0.124nm)长些。肽键具有部分双键的性质，不能自由旋转。 B 肽单位是刚性平面结构，肽单位上的6个原子都位于同一个刚性平面上，称为酰胺平面(amideplane)或肽平面。,肽单位的特征,C 在肽单位上，除Pro外，CO与NH或者C一C与C一N，呈反式排布。, 肽单位与二面角(dihedral angle),C原子位于相邻二个肽平面的交线上，C原子上的C-N和C-C2键都是单键。 肽平面1围绕C-N单键旋转，其旋转角度用表示； 肽平面2围绕C-C2单键旋转，其旋转的角度用表示。 和称为二面角。,肽键平面与二面角示意图,从C向N看，顺时针形成的角度为正值。,多肽链折叠的空间限制,肽平面绕C-N和C-C2键旋转。和可以取-180至+180之间的值。 但和的大小受肽链骨架和R基影响。,由同一个原子连接的两个肽键处于同一个平面的构象中，和角度定位0度。,（2）蛋白质的二级结构,蛋白质的二级结构是指多肽链本身（主链骨架）的折叠和盘绕方式。 二级结构的形式：-螺旋、-折叠、-转角。 不规则的无规卷曲。,1950年美国Pauling等人在研究纤维状蛋白质时，提出了-螺旋，后来发现在球状蛋白质分子中也存在-螺旋。,-螺旋（3.613-螺旋）,A 每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈，每圈螺旋的高度为0.54nm，即每个氨基酸残基沿轴上升0.15nm，螺旋上升时，每个残基沿轴旋转100。,-螺旋结构的要点如下：,0.15nm,B 相邻的螺圈之间形成氢链，氢键封闭环包含13个原子(3.613-螺旋)。,C -螺旋有右手螺旋和左手螺旋之分，天然蛋白质绝大部分是右手螺旋，到目前为止仅在嗜热菌蛋白酶中发现了一段左手螺旋。 D与-碳原子相连的R侧链位于螺旋的外侧，对螺旋的形成和稳定有较大影响。,-折叠（-sheet strand）,C -折叠有平行和反平行的两种形式:,正常的Prion蛋白含有大量的螺旋,病变的Prion蛋白含有更多的折叠,螺旋和折叠的转换,-转角 (-turn)也称发夹结构 或称U形转折,-转角：指蛋白质的分子的多肽链经常出现180的回折，在回折角上的结构就称-转角。 -转角由四个氨基酸组成，第一个氨基酸残基的C=O 与第四个氨基酸残基的 N-H之间形成氢键。,1,2,3,4,1,2,3,4, 无规卷曲,无规卷曲是指没有规律性的肽链结构，但许多蛋白质的功能部位常常处于这种构象区域。,核糖核酸酶分子中的二级结构,-螺旋,(3)蛋白质的超二级结构,超二级结构（super secondary structure）：在蛋白质中经常存在由若干相邻的二级结构单元按一定规律组合在一起，形成有规则的二级结构集合体，又称基序或模体（motif）。,多肽链在二级结构或超二级结构的基础上，进一步卷曲折叠成为相对独立、近似球形的具有一定功能的三维实体称为结构域 。,(4) 结构域（structure domain）,Ag结合部位,补体结合部位,型胶原酶的结构域,(5) 三级结构,蛋白质的三级结构是指在二级结构基础上，多肽链再进一步折叠盘绕成紧密的球状结构。只适用于球蛋白。 三级结构是指多肽链中所有原子的空间排布。,肌红蛋白：含8个螺旋，5个无规转曲,(6)蛋白质的四级结构,四级结构:指相同或不同的亚基按照一定的排布方式聚合而成的聚合体。包括亚基的种类、数目、空间排布以及相互作。 亚基（subunit）：构成蛋白质四级结构的、每条具有三级结构的多肽链。,血红蛋白(hemoglobin)的四级结构,四个亚基组成，2个-亚基，2个-亚基，每个亚基由一条多肽链与一个血红素辅基组成 。,蛋白质分子的结构层次,3 蛋白质结构与功能的关系,（1）蛋白质一级结构与功能的关系, 多肽的结构与功能的关系 在不同生物体中行使相同或相似功能的蛋白质，称为同功能蛋白质。 它们的氨基酸序列具有明显的相似性，这种现象称为序列同源，有明显序列同源的蛋白质，也称同源蛋白质。,一级结构相似，可能会有相同的功能；一级结构有差异，功能会不同。,（ADH）,（OX）, 同功能蛋白质结构的种属差异,脊椎动物胰岛素分子的51个氨基酸残基中，只有24个氨基酸残基始终保持不变,这些始终不变的氨基酸残基，称为保守氨基酸残基(保守残基)。,胰岛素一级结构比较,细胞色素C一级结构与分子进化,（1）亲缘关系越近，AA顺序的同源性越大。 不同生物与人的细胞色素C相比较AA差异 黑猩猩 0 鸡、火鸡 13 牛猪羊 10 海龟 15 狗驴 11 小麦 35 粗糙链孢霉 43 酵母菌 44（2）尽管不同生物间亲缘关系差别很大，但与 细胞色素C功能密切相关的AA顺序保守不变 （26个AA）。,细胞色素C进化树,分子病(molecular disease):指蛋白质分子中由于AA排列顺序与正常蛋白质不同而发生的一种遗传病(基因突变造成的)。, 一级结构的变异与分子病,血红蛋白AA顺序的细微变化正常人： HbA N6 Glu病 人 ： HbS N6 ValHbA Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys （带负电荷亲水基团） HbS Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys （不带电荷疏水基团）,镰刀状细胞贫血病：,病人体内血红蛋白的含量乃至红细胞的量都较正常人少，红细胞的形状为新月形，即镰刀状，,细胞壁薄，脆性大，易涨破而发生溶血； 细胞粘滞加大，易栓塞血管； 由于流速较慢，输氧机能降低，使脏器官供血出现障碍，从而引起头昏、胸闷而导致死亡。,临床表现：, 一级结构断裂与功能激活,有些蛋白质常以无活性的前体形式产生和贮存。在机体需要时，切去部分肽段之后，才变成有活性的蛋白质。 如参与蛋白质消化的各种蛋白酶原（Proenzyme） 、参与血液凝固的凝血酶原、糖代谢的激素原（Prohormene）等。,胰岛素原与胰岛素（牛胰岛素原的激活）,血红蛋白变构与运输氧的功能,血红蛋白的分子结构血红蛋白与氧分子的结合血红蛋白的变构效应,（2）高级结构与功能的关系, 血红蛋白的分子结构, 血红蛋白与氧分子的结合,无氧存在时，生成去氧血红蛋白； 亚基之间由盐键相互连接，使三、四级结构受到了较大的约束，形成紧密构象，导致与氧的亲和力下降，成为低亲和力型（紧张态）。,有氧存在时，能够与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)。 三、四级结构发生较大的变化，维持四级结构的键断裂，三级结构也发生变化，构象由紧密型变成松弛型，提高了氧的亲和力，成为高亲和型（松弛态）。,紧张态,脱氧血红蛋白与氧合血红蛋白构象的转变,氧分压高,氧分压低,松弛态,低亲和力型,高亲和力型, 血红蛋白的变构效应,肌红蛋白存在于肌肉细胞中，和血红蛋白亚基的三级结构非常相似，肌红蛋白的主要功能似储存氧。,肌红蛋白对氧的亲和力很高，只要小量增加氧的浓度（氧分压），肌红蛋白可以迅速全部被氧饱和，其曲线上升到顶部，成为一条双曲线。,血红蛋白中的4个亚基与氧分子的亲和性不同。氧分子与血红蛋白的一个亚基结合后，引起其构象发生改变，这种变化在亚基之间传递，改变了其它亚基与氧的结合能力。,血红蛋白开始时由于氧浓度较低，对氧的亲和力较低，曲线升高较慢。 随着氧浓度增加，结合氧增加，曲线斜率也增加，当全部饱和后，曲线处于水平，曲线呈“S”状。,血红蛋白与肌红蛋白的氧结合曲线,蛋白质四级结构与功能的关系：变构效应,多亚基的寡聚蛋白质分子或酶中，效应剂作用于某个亚基，引发其构象改变，继而引起其它亚基构象和功能的改变，导致蛋白质或酶的生物活性的变化，这种作用称为变构作用，这样的效应剂也称变构剂。,变构作用（allosteric effect ）,在肺部，有利于脱氧血红蛋白结合更多的氧。 在肌肉中，有利于氧合血红蛋白释放更多的氧，满足肌肉中的生物氧化。,血红蛋白S曲线的意义：,4 蛋白质的理化性质,（1）蛋白质变性(denaturation): 在理化因素作用下, 蛋白质分子内的二硫键和非共价键被破坏, 天然构象发生变化, 引起蛋白质理化性质和活性的改变。,变性本质: 空间构象的改变或破坏, 不涉及一级结构的改变和肽键断裂。 变性因素： 物理（热、紫外线、高压、剧烈振荡等）和化学因素（酸、碱、有机溶剂、重金属盐等）。, 生物活性的丧失：催化能力、生理调节 作用、Ag和Ab结合能力。 物理性质的改变：溶解度降低,粘度增加，扩散系数降低；不能形成结晶。 化学性质改变：易被酶降解。,蛋白质变性特征:,蛋白质变性有些是可逆的，在除去变性的因素后，蛋白质可以从伸展状态恢复到折迭状态，恢复蛋白质原有的活性。,蛋白质的复性（renaturation),核糖核酸酶的变性与复性,去除变性剂并缓慢氧化,天然构象,尿素，-巯基乙醇,变性状态,变性的利用： 高温高压消毒 紫外消毒 酒精消毒变性的预防： 低温、防强酸、强碱重金属等。,（2）新生肽的折叠,新生成的蛋白质需要其他蛋白质（分子伴侣）的参与才能形成正确的构象。 热休克蛋白,（3）蛋白质是两性电解质,蛋白质分子中，除N端和C端的-羧基外，还有许多可解离的侧链（-羧基-羧基)，在一定条件下，上述基团的解离可以使蛋白质带电。 蛋白质的等电点。,（4）蛋白质的胶体性质,蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。, 中性盐沉淀反应：盐析 有机溶剂沉淀反应 ：同时降低介电常数 重金属盐沉淀反应 ：蛋白质分子与铜、 汞、银等结合为不溶性蛋白盐而沉淀。 生物碱试剂的沉淀反应 ：蛋白质在 pHpI时带正电荷, 与苦味酸、磷钨酸、 鞣酸、三氯醋酸等结合沉淀。,（5）蛋白质的沉淀反应,（6）紫外吸收与成色反应,蛋白质中的Tyr、Trp和Phe残基在近紫外区有光吸收，使蛋白质在280nm有最大光吸收，这一特征可用于蛋白质的定量检测。,蛋白质的颜色反应,OH,N,5 蛋白质分离提纯,蛋白质分离的一般程序:前处理、粗分级和细分级。 第一步前处理(pretreatment)：首先要求把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来的天然状态，生物活性。 电动捣碎机，匀浆器、超声波破碎等。,当提取蛋白质混合物后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白质与其它杂蛋白质分离开来。 一般用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等。,第二步 粗分离 (roughfractionation),样品经粗分级以后，一般使用层析法包括凝胶过滤，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析等进一步提纯。必要时还可选择电泳法。,第三步 细分级 (finefractionation),蛋白质的分离,（1）根据分子大小不同的分离方法（2）利用溶解度差别的分离方法（3）根据电荷不同的分离方法（4）蛋白质的选择吸附分离（5）亲和层析,A 沉降速度法 一种蛋白质分子在单位离心力场中的沉降速度是定值，称为沉降常数。用S表示。 110-13秒作为沉降系数的单位。, 根据蛋白质的分子量分离,B 凝胶过滤法（分子筛）,C 透析与超虑,透析（dialysis）：由于蛋白质不能通过半透膜，利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 超虑（uitrafiltration）: 利用压力或离心力强行使水分子和其他小分子通过半透膜，达到浓缩和脱盐的目的。,D 密度梯度离心（density gradient）,蛋白质在具有密度梯度的介质中离心，质量和密度大的颗粒比质量小的颗粒沉降的快，并且每种蛋白颗粒沉降到与自身密度相等的介质密度时，停滞不前，最后在离心管中分成各自独立的区带。,A 蛋白质两性解离和等电点 各蛋白质的pI不同，可通过电泳方法分离混合蛋白质。, 利用溶解度差别的分离方法,盐溶（salting in）:中性盐增加分子表面电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加。 盐析(salting out)：盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度下降并先后析出（高盐破坏水膜、中和电荷, 蛋白质聚集沉淀）。,B 盐溶和盐析,C 有机溶剂分级分离法：降低介质的介电常数，与蛋白质争夺水化水。,D 温度沉淀：温度对溶解度有影响，低温稳定，高温不稳定。在0-40，大部分的球状蛋白质溶解度随温度升高而增加。, 根据电荷不同的分离方法,A 电泳（electrophoresis）: 在外电场的作用下，带电颗粒向着与其电性相反的电极移动。泳动速度主要决定于它所带的净电荷量以及颗粒的大小和形状。,清蛋白 1 2 ,血清蛋白电泳图谱,SDSPAGE电泳,是一种以离子交换树脂作支持剂层析法。由于不同物质与树脂间的静电吸引不同，使不同物质依次被洗脱下来而得到分离。,B 离子交换层析, 蛋白质的选择吸附分离,吸附层析(adsorption chromatography)： 某些物质，例如极性的硅胶和氧化铝以及非极性的活性炭等的粉末具有吸附能力，能够将其他种类的分子吸附在其粉末颗粒的表面，而吸附力的强弱又因被吸附的物质性质不同而异。, 亲和层析,将待纯化的蛋白质的特异配体通过适当的化学反应共价连接到琼脂糖凝胶一类的载体表面的功能基团上，当蛋白通过层析柱时，待纯化的蛋白质被吸附在配体上，然后通过特异的相应配体溶液把蛋白质洗脱下来。,琼脂糖凝胶,连接臂,配体分子,杂蛋白分子（不被吸附）,洗涤除去,亲和洗脱,思考题,1.蛋白质的功能。2.蛋白质的构象和构型。3.蛋白质的结构层次。4.以血红蛋白为例，说明蛋白质结构与功能的关系。5. 等点电、分子伴侣、两性电解质、简单蛋白质、结合蛋白质、肽平面、肽单位、盐溶、盐析、别构效应、协同效应、亚基。6.蛋白质分离纯化的一般步骤及主要技术。,本章参考资料,1. 王镜岩 主编生物化学高教出版社，2002,第3版2. 周顺伍 主编动物生物化学中国农业出版社，1999, 第3版3. 郭蔼光 主编基础生物化学高等教育出版社，2001, 第1版4. 汪玉松等 主编现代动物生化中国农业出版社， 2001,第2版5. 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