药物分析第十一章甾体激素类药物分析ppt课件.ppt

高职高专系列教材配套电子教案,高等教育出版社,高等教育电子音像出版社,主编 张骏 方应权,（第2版）,药物分析,第十一章 甾体激素类药物分析,甾体激素类药物的分类 肾上腺皮质激素 雄性激素 蛋白同化激素 性激素 孕激家 雌激素各种甾体激素结构上的差异主要在于其取代基的种类、位置和数目，双键的位置和数目以及C10上有无角甲基等。,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,二、鉴别试验,三、杂质检查,四、含量测定,本 章 内容,一、药物结构与性质关系分析,基本母核环戊烷骈多氢菲,第十一章 甾体激素类药物分析,（一）肾上腺皮质激素（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素 （三）孕激素（四）雌激素（五）其它激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,返 回,（一）肾上腺皮质激素,第十一章 甾体激素类药物分析,本类药物的结构特点：（1）具有21个碳原子（2）A环具有4-3-酮基的，-不饱和羰基结构（3）C17具有-醇酮基并多数有-羟基（4）C10、C13具有角甲基；C11具有羟基或酮基（5）其它：有些皮质激素具有1，6、9-卤素，16-羟基，6、12、16、16-甲基等。,一、药物结构与性质关系分析,（一）肾上腺皮质激素,第十一章 甾体激素类药物分析,在结构上，肾上腺皮质激素可以认为是皮质酮的衍生物。,一、药物结构与性质关系分析,3,皮质酮,（一）肾上腺皮质激素,第十一章 甾体激素类药物分析,例如，氢化可的松、醋酸地塞米松、曲按西龙、地塞米松磷酸钠等等。,一、药物结构与性质关系分析,氢化可的松,（一）肾上腺皮质激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,返 回,（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,常用的雄性激素为睾丸素的衍生物。例如，甲睾酮（甲基睾丸素）、丙酸睾酮和苯丙酸诺龙等。,（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,第十一章 甾体激素类药物分析,本类药物的结构特点：（1）具有19个碳原子（2）蛋白质同化激素具18个碳原子（C10上无角甲基）（3）A环具有4-3-酮基；（4）C17上无侧链，多数是一个-羟基，有些是由该羟基形成的酯，有些具有-甲基。,一、药物结构与性质关系分析,（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素,返 回,（三）孕激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,孕激素也称为黄体激素或孕酮，其典型药物为黄体酮。典型的药物有黄体酮、醋酸甲羟孕酮（安宫黄体酮）等。其结构如下：,（三）孕激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,本类药物的结构特点：（1）具有21个碳原子（2）环具有4-3-酮基（3）C17上甲酮基，有些具有-羟基，与醋酸、己酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羟孕酮等）；还有些具有6、6-甲基、6-甲基、6-氯。,返 回,（四）雌激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,雌激素又称为卵泡激素。主要是雌二醇及其各种酯和炔雌醇及其衍生物。其典型药物的主要结构如下：,（四）雌激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,本类药物的结构特点：（1）具有18个碳原子（2）A环为苯环（3）C3上具有酚羟且有些形成了酯或醚（4）C10上无角甲基（5）C17具有-羟基或酮基，有些羟基形成了酯，还有些具有乙炔基。,返 回,（五）其它激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,除上述四种甾体激素外，中国药典（2010年版）还收载了口服避孕药物，如炔诺酮(norethisterone)、炔诺孕酮(norgestrel)、炔孕酮（ethisterone）等，其典型结构药物结构如下：,（五）其它激素,第十一章 甾体激素类药物分析,一、药物结构与性质关系分析,药物的结构特点：（1）多数在A环上具有4-3-酮基，与黄体酮和睾酮一致（2）有的在C17具有-羟基、-乙炔基或甲酮基（3）有的在C10上无角甲基，与雌激素相同。,返 回,返 回,（一）与强酸呈色反应 （二）官能团的反应（三）氧化还原反应（四）沉淀反应（五）药物或衍生物熔点,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,（六）薄层色谱法（七）高效液相色谱法（八）紫外分光光度法（九）红外吸收光谱法,返 回,（一）与强酸呈色反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,1.许多甾体激素能与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，其中以与硫酸的呈色反应应用较广。 2.试剂：硫酸的呈色反应中最常用的试剂为甲醇和乙醇，而稀释反应体系的试剂常为稀硫酸或水。 3.应用实例：以氢化可的松的鉴别为例取本品约2mg ，加硫酸2ml 使溶解，放置5 分钟，显棕黄色至红色，并显绿色荧光；将此溶液倾入10ml水中，即变成黄色至橙黄色，并微带绿色荧光，同时生成少量絮状沉淀。,返 回,（二）官能团的反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,1.酮基的呈色反应：甾体激素分子中，大多在C3和C20位上含有酮基，能与羰基试剂肼发生呈色反应，产生有色物质腙。原理：,常用的试剂：2,4二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼。,H,2,N,N,H,N,O,2,N,O,2,H,2,N,N,H,C,O,N,（二）官能团的反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,2.甲酮基的呈色反应 ：,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,亚硝基铁氰化纳,芳香醛,呈色,黄体酮,其他甾体,亚硝基铁氰化纳,蓝紫色（灵敏、专属）,淡橙色或不显色,（二）官能团的反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,3.有机氟的呈色反应 ：,含氟的甾体激素药物,氧瓶燃烧,F,茜素氟蓝,硝酸亚铈,显蓝紫色,返 回,（三）氧化还原反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,1.碱性酒石酸铜的反应 ：,皮质激素的C17-醇酮基具有还原性,碱性酒石酸铜,Cu2O（橙红色）,（三）氧化还原反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,2.与氨制硝酸银的反应 ：,皮质激素的C17-醇酮基具有还原性,氨制硝酸银,Ag（黑色）,返 回,（四）沉淀反应,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,含炔基的甾体激素,硝酸银,银盐沉淀,返 回,（五）衍生物熔点,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,黄体双酮肟 ,m.p.235240,（五）衍生物熔点,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,m.p.约182,苯丙酸诺龙,盐酸氨基脲,苯丙酸诺龙的缩氨脲衍生物,丙酸睾丸酮,醇制KOH,丙酸睾丸酮的水解产物,m.p. 150156,返 回,（六）薄层色谱法中国药典（2010年版）收载的炔诺孕酮雌醚片、丙酸睾酮注射液等均采用薄层色谱法进行鉴别。,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,（七）高效液相色谱法通过比较供试品和对照品保留时间的一致性，进行鉴别,（八）紫外分光光度法,本类药物的分子中存在共扼结构（,和,）,，具紫外吸收。,如：-3-酮 max240nm；苯环：280nm,苯环,返 回,（九）红外吸收光谱法,第十一章 甾体激素类药物分析,二、鉴别试验,中国药典上收载的甾体激素类药物的红外光谱图要求与对照图谱一致 。,返 回,三、杂质检查,（一）有关物质（二）游离磷酸盐（三）残留溶剂的检查（四）硒（五）乙炔基,第十一章 甾体激素类药物分析,返 回,三、杂质检查,来源：原料、中间体、异构体、降解产物。特点：结构相似、可能存在多个甾体杂质。方法（具一定的分离能力）：薄层色谱法（多采用高、低浓度对比法）高效液相色谱法（多采用不加校正因子的主成分自身对照法）TLC判定方法：规定杂质斑点数目； 比较杂质斑点颜色HPLC判定方法：大多规定杂质峰面积,（一）有关物质,第十一章 甾体激素类药物分析,三、杂质检查,薄层色谱法（多采用高、低浓度对比法） 醋酸去氧皮酮中“有关物质”的检查 取本品，加三氯甲烷-甲醇（91）溶解并制成每1ml中约含10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，分别加上述溶剂稀释制成每1ml中约含0.1g的对照溶液（1）与每1ml中约含0.2g的对照溶液（2）摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（7715：8：1.2）为展开剂，展开，晾干，在紫外灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液（1）所显的主斑点比较不得更深，如有1个斑点深于对照溶液（1）的主斑点，与对照溶液（2）所显的主斑点比较，不得更深。,（一）有关物质,第十一章 甾体激素类药物分析,三、杂质检查,2.高效液相色谱法（多采用不加校正因子的主成分自身对照法） 炔诺酮中“有关物质”的检查 取本品，以甲醇溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。用含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高度约为满量程的10%，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰面积的和不得大于对照溶液主蜂面积。,（一）有关物质,第十一章 甾体激素类药物分析,返 回,三、杂质检查,地塞米松磷酸钠为地塞米松与磷酸形成的磷酸酯二钠盐，所以在其生产和贮存过程中可能引入磷酸盐，因此中国药典对地塞米松磷酸钠进行游离磷酸盐的检查。 原理： 方法：对照品法,（二）游离磷酸盐,第十一章 甾体激素类药物分析,磷钼酸铵,740nm,三、杂质检查,第十一章 甾体激素类药物分析期律,（二）游离磷酸盐,地塞米松磷酸钠中游离磷酸盐的检查精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20放置3050分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。,返 回,三、杂质检查,第十一章 甾体激素类药物分析,（三）残留溶剂的检查,药典中的残留溶剂系指在原料药、辅料以及制剂生产中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机挥发性化合物。除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合中国药典残留溶剂测定法的规定。,返 回,三、杂质检查,第十一章 甾体激素类药物分析,（四）硒,剧毒,来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢原理与方法,药物,氧瓶燃烧,Se6+,盐酸羟胺,Se4+,pH2.02,2，3-二氨基萘试液,4，5-苯并苯硒二唑,环己烷,max378nm,返 回,三、杂质检查,（五）雌酮（乙炔基）,第十一章 甾体激素类药物分析,返 回,乙炔基的检查：利用硝酸银与乙炔基反应，生成硝酸，再用氢氧化钠滴定液滴定生成的硝酸，电位法指示终点,四、含量测定,高效液相色谱法紫外分光光度法比色法,第十一章 甾体激素类药物分析,四、含量测定,（一）高效液相色谱法特点：样品用量少、灵敏度高、分离效能好、快速固定相：为十八烷基硅烷键合硅胶流动相：大多是甲醇和水组成的混合液 检测：可采用紫外检测器于240nm或280nm波长检测，（因为大多甾体激素都具有4-3-酮及苯环等共轭结构）,第十一章 甾体激素类药物分析,返 回,四、含量测定,（二） 紫外分光光度法 4-3-酮基和苯环的共扼系统，于紫外光区有特征吸收4-3-酮基 max：240nm波长附近 皮质激素 雄性激素 孕激素 苯环 max：280nm波长附近 雌激素,第十一章 甾体激素类药物分析,返 回,四、含量测定,（三） 比色法 四氮唑比色法异烟肼比色法Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法,第十一章 甾体激素类药物分析,四、含量测定,（三） 比色法 四氮唑比色法原理： 17位-醇酮基（具还原性）,第十一章 甾体激素类药物分析,四氮唑盐,OH-,有色的甲臢,比色,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 四氮唑比色法四氮唑盐的种类： 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)，其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲簪，max在480490nm，也称红四氮唑（RT）,+2e,OH-,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 四氮唑比色法四氮唑盐的种类： 蓝四氮唑（BT），即3,3-二甲氧苯基-双-4,4-93,5-二苯基)氯化四氮唑，其还原产物为暗蓝色的双甲膳，max在525nm左右。,C,l,-,+,C,N,N,N,N,O,C,H,3,+,-,C,l,C,N,N,N,N,O,C,H,3,+4e,OH-,H,C,N,N,N,N,O,C,H,3,H,C,N,N,N,N,O,C,H,3,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 四氮唑比色法醋酸泼尼松龙乳膏的含量测定精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，水浴，搅拌使醋酸泼尼松龙溶解，置冰浴中放滤过，滤液置100ml容量瓶中,同法提取3次,滤液并入容量瓶,无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取醋酸泼尼松龙对照品20mg，精密称定,置100ml量瓶中，无水乙醇稀释至刻度, 摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试液与对照液各1ml, 分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25暗处放置4550min，485nm的波长处分别测定吸光度。计算醋酸泼尼松龙乳膏中醋酸泼尼松龙的百分标示含量。,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 四氮唑比色法讨论：（1）溶剂和水分的影响含水量5%反应V含水10%A含水30%几无反应,无水乙醇,醛 A,无醛无水乙醇,(2) 碱的种类及加入顺序的影响,具还原性,先加四氮唑盐溶液，再加碱液为好 原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接触后，有部分分解。,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 四氮唑比色法讨论：(3) 温度与时间的影响 一般说来，呈色速度随温度增高而加快 。BP：在30反应1小时中国药典(2005年版)：多数在25暗处反应4045分钟。(4) 空气中氧及光线的影响 对光敏感，在暗处显色。TTC法形成的甲臢对空气中氧敏感，使颜色强度，稳定性。BP规定：加入试剂后，要往容器中充N2。,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 四氮唑比色法讨论（5）基团影响 C21：-羟基（C21-OH） 21 -OH酯化后较母体羟基反应速度慢， 即：游离体酯类如：可的松醋酸可的松 简单酯复杂酯， 醋酸酯磷酸酯琥珀酸酯三甲基醋酸酯,返 回,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 2.异烟肼比色法原理：酮基,H+,异烟肼,缩合,黄色异烟腙，比色,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 2.异烟肼比色法讨论：(1) 溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M：1M时，获最大吸收度。,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 2.异烟肼比色法讨论：(3)水分、温度、光线和氧的影响 甾体激素与异烟肼的缩合反应为可逆反应，所以H2OA温度，逆反应加速。 于密闭并不吸水的条件下，光与氧对反应不产生影响。 (4)关于反应的专属性在该反应条件下， 对43酮具有一定的专属性，室温下，30反应完全。 C20酮基反应慢， C17酮基反应慢； C11酮基不反应,返 回,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 3. Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法Kober反应：指雌激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应）,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 3. Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法铁酚试剂法 铁酚试剂的组成 硫酸亚铁铵 浓硫酸 过氧化氢 苯酚浓硫酸和过氧化氢的作用是将2价铁氧化成3价铁,四、含量测定,第十一章 甾体激素类药物分析,（三） 比色法 3. Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法铁酚试剂法三价铁的作用 A能够加快黄色生成的速度 B能促进黄色向红色的转变 C能增加红色的稳定性 苯酚的作用 A可消除反应产生的荧光 B能够促进红色的生成,第十一章 甾体激素类药物分析,【课堂活动】如何配制浓度为20gml的丙酸倍氯米松的乙醇溶液？,答案,第十一章 甾体激素类药物分析,答（答案不唯一）：精密称取丙酸倍氯米松约10mg，置50ml 量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置50ml 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。即得。,主编：,撰稿教师：（以姓氏为序）,制作：,责任编辑：,电子编辑：,谢谢观看，再见！,