发酵工业无菌技术ppt课件.ppt
四、发酵工业无菌技术,一 概述,发酵工业无菌技术,在工业微生物培养过程中，只允许生产菌存在和生长繁殖，不允许其他微生物共存，因此所有发酵过程，必须进行纯种培养；特别是在种子移植过程、扩大培养过程以及发酵前期，如果杂菌一旦侵入生产系统，就会在短期内与生产菌争夺养料，严重影响生产菌正常生长和发酵作用，以致造成发酵异常。所以整个发酵过程必须牢固树立无菌观念，强调无菌操作。,一 发酵工业的无菌处理,一 概述,发酵工业无菌技术,除了设备应严格按规定保证没有死角，没有构成染菌可能的因素外，必须对培养基和生产环境进行严格的灭菌和消毒，防止杂菌和噬菌体的污染。在好氧发酵时，通入发酵系统的空气，如果夹带有各类其他的微生物。这些微生物便会在培养系统合适的条件下大量繁殖，从而干扰纯种培养过程的正常进行，甚至使培养过程彻底失败导致倒罐，造成严重的经济损失。空气除菌不彻底是发酵染菌的主要原因之一。,一 概述,发酵工业无菌技术,灭菌指利用物理、化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、器具内外的病源微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽抱；,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,二 发酵工业污染的防治策略,污染的危害,染菌是发酵工业的致命伤。轻者培养基利用率下降；产品分离困难；发酵异常；影响产品质量；重者造成“倒罐”；造成严重经济损失，扰乱生产秩序，影响生产计划。,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,在现有的技术条件下要做到完全不染菌是不可能的。目前要做的是要提高生产管理水平，尽可能防止发酵染菌的发生，而且一旦发生染菌，要能尽快找出其污染的原因，并采取相应的有效措施，把染菌造成的损失降低到最小。,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,不同染菌对发酵的影响,如：青霉素发酵：污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害大；高温淀粉酶发酵：污染芽孢杆菌和噬菌体的危害较大；,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,不同污染时期对发酵的影响,种子培养期 菌浓低，营养丰富；灭菌；发酵前期 杂菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成；灭菌，重接种；发酵中期 严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成；并罐、提前放罐等；发酵后期 如杂菌量不大，可继续发酵；如污染严重，可采取措施提前放罐；,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,染菌对产物提取和产品质量的影响,过滤：粘度加大；菌体大多自溶；基质残留浓度加大；降低过滤收率。萃取：水溶性蛋白质升高，易发生乳化；离子交换：杂菌易被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换量,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,杂菌污染的防治,2.培养：平板、斜面,3.肉汤培养方法：,用这些方法没有发现染菌并不能肯定未被污染，还应结合其他异常现象来判断，如溶氧水平、CO2排放量、pH值等。,1.镜检：染色（革氏、芽孢、鞭毛等）,染菌的检查与判断,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,正常发酵溶氧曲线；-异常发酵溶氧曲线；-异常发酵光密度曲线；,谷氨酸正常发酵和异常发酵的溶氧曲线,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,发酵染菌率和染菌原因分析,染菌原因分析：,发酵染菌率：一年内染菌批数占总的投料批数的百分率；,发酵染菌率,1.染菌的杂菌种类分析,耐热性芽抱杆菌多是由于设备存在死角或培养液灭菌不彻底。球菌、酵母等可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的。霉菌大多是灭菌不彻底或无菌操作不严格所致。,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,2.发酵染菌的规模分析,大批发酵罐染菌：时期、种类；部分发酵罐(或罐组)染菌：前期可能是种子带杂菌；中后期则可能是中间补料系统或油管路系统发生问题所造成的。个别发酵罐连续染菌和偶然染菌：个别发酵罐连续染菌大多是由设备问题造成的，如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损等。,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,3.不同染菌的时间分析,种子阶段 发酵初期 发酵后期,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,杂菌污染途径及预防,1.种子带菌及防止：,带菌的原因无菌室的无菌条件不符合要求；培养基灭菌不彻底；操作不当。,种子带菌的防止种子带杂菌是发酵前期染菌的原因之一。在每次接种后应留取少量的种子悬浮液进行平板、肉汤培养，借以说明是否是种子中带杂菌。严格技术规范种子培养的设备和装置,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,无菌室 室内布置应尽量简单，通常用30瓦紫外线灭菌灯照射2030分钟，配合使用化学灭菌药剂；无菌室内无菌度的要求是：把无菌培养皿平板打开盖子在无菌室内放置30分钟，根据一般工厂的经验，长出的菌落在3个以下为好。,灭菌锅 灭菌操作时需要注意排气管是否畅通；,二 发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌技术,2.无菌空气带菌及防止；,3.培养基和设备灭菌不彻底导致的染菌及防止：原料 蒸汽压力 设备死角,5.操作不规范引起的染菌,4.设备渗漏引起的染菌及防止；,第十一章 工业发酵染菌的防治,发酵染菌的拯救与处理,1.种子培养期染菌的处理：灭菌，倒种；,2.发酵前期染菌的处理：灭菌，接种；,3.发酵中后期染菌的处理：发酵控制，提前放罐；,4.染菌后对设备的处理：彻底灭菌；,三 发酵工业的无菌技术,发酵工业无菌技术,三 发酵工业的无菌技术,灭菌的方法有：干热灭菌法，湿热灭菌法，火焰灭菌法，电磁波、射线灭菌法，化学药品灭菌法及过滤除菌法。根据灭菌对象和要求不同选用不同的方法。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,生产中需要解决的问题：,杀灭培养基中的杂菌,避免培养基中营养成分的破坏,发酵生产中主要采用湿热灭菌的方法,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,湿热灭菌原理,微生物的热阻,每一种微生物都有一定的最适生长温度范围，如一些嗜冷菌的最适温度为5l 0；大多数微生物的最适温度为2537；另有一些嗜热菌的最适温度为5060。,表征不同微生物对热抵抗能力强弱的指标。指微生物在某一特定条件(主要是温度和加热方式)下的致死时间。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,当微生物处于最低限温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质体和酶的基本成分蛋白质发生不可逆的变化，即凝固变性，使微生物在很短时间内死亡。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,湿热灭菌就是根据微生物的这种特性进行的。杀灭细菌营养体采用较低温度即可；而芽孢细菌的芽孢能经受较高的温度。一般讲，灭菌的彻底与否以能否杀死芽孢为标准。,杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间。在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,由于一般细菌、芽孢细菌、微生物细胞和微生物孢子，对热的抵抗力不同，因此，它们的致死温度和致死时间也有差别。微生物的这种对热的抵抗力常用“热阻”表示。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,相对热阻：指在相同条件下两种微生物热阻的比值。芽孢的热阻特别高的原因：芽孢具有吡啶二羧酸，能增强对热抵抗力;芽孢厚而且结构致密，热不易透过;芽孢的游离水分少，蛋白质含水量较营养细胞蛋白质含水量低。在实际生产中，不能完全了解杂菌的数量和类型，以相对热阻大的芽孢作为灭菌的依据。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,微生物热致死是指微生物受热失活直到死亡，微生物受热死亡主要是由于微生物细胞内酶蛋白受热凝固，丧失活力所致。,在一定温度下，微生物受热后，其死活细胞个数的变化如化学反应的浓度变化一样，遵循单分子反应速率理论。,微生物热死灭动力学方程：对数残留定律,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,在微生物受热失活的过程中，微生物不断被杀死，活菌数不断被减少。因此，微生物热死速率即微生物个数减少的速度与任一瞬间残存的菌数成正比。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,用 N 表示活菌个数，则活菌的减少率(死亡率)与 N 呈线性关系即：,K：比热死亡速率常数，min-1,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,在恒定温度下，将方程积分，边界条件为：t：t0= 0 t = t；N：N = N0 N = N；,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,灭菌操作中，为达到一定的灭菌要求，即 N/N0 为某值，如 10-16。则所需灭菌时间即可由下式求出：,该式叫做对数残留公式,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,若要求灭菌后绝对无菌，即N = 0 ，则从公式可以看出灭菌时间将等于无穷大。在生产上，通常取 N = 10-3 个/罐 为计算标准，即微生物污染降低到处理 1000 罐中只残留 1 个活微生物的程度，此数已能满足生产的要求；,这样对于不同 N0 的培养基，其灭菌时间不同，即 t = t (N0) 。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,根据,在给定的温度条件下，t 与 ln N0/N 呈直线关系，其斜率为 -1/K ；当 N0 给定后，t 决定于 K ；K 除了决定于菌体的种类及存在形式外，还是温度的函数。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,非对数残留定律：菌体循序死亡模型,某些菌体受热死亡的速率不符合对数残留定律。将其N/N0对灭菌时间t在半对数坐标中标绘得到残留曲线不是直线，这主要是菌体以芽孢形式存在的原因。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,对耐热性的微生物芽孢死亡规律的描述，具有代表性的模型为Prpkop & Humphey提出的“菌体循序死亡模型”。该学说认为：芽孢的死亡是渐进的，由耐热的芽孢（R型）转变为死亡的芽孢(D型），需经过敏感的中间过程（S型）。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,灭菌温度、时间选择,温度对化学反应的影响特别显著,主要是影响速度常数,Arrhenius 方程(1889),四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,表明：ln K 与 1/T 之间呈直线关系，其斜率为 E/R，在不同 T 时做灭菌试验，求得相应的 K 值，即可求出E。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,以上可以看出：E 同 T 一起决定 K 值，即：,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,以上结论非常重要：在生产上，可利用菌体死灭反应与营养成分被破坏反应的 E差距来作为工艺选取的依据。,通常，菌体死灭反应的E 约在200400 KJ/mol，而维生素被破坏的E 约在8100 KJ/mol，灭菌中，温度升高，菌体死灭速度的增加远大于营养成分被破坏的增加；这就是高温短时间灭菌的依据。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,K(min-1),1/T(K),嗜热脂肪芽孢杆菌,维生素B1,a,b,A,B,C,D,当温度从ab时维生素破坏的K值增加为AB；而芽孢杆菌死灭的K值增加为CD；其增加幅度远大于维生素被破坏程度的增加；,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,影响培养基灭菌的因素除了所污染杂菌的种类、数量、灭茵温度和时间外。培养基成分、pH值、培养基中颗粒、泡沫等对培养基灭菌也有影响。,影响培养基灭菌的其他因素,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,(1)培养基成分 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质增加微生物的耐热性，高浓度有机物会包于细胞的周围形成一层薄膜，影响热的传递，因此在固形物合量高的情况下，灭菌温度可高些；例如，大肠杆菌在水中加热60-65便死亡；在10糖液中，需704-6min，在30糖液中需7030min。低质量分数(1-2)的NaCl溶液对微生物有保护作用，随着质量分数的增加，保护作用减弱，当质量分数达8-10以上则减弱微生物的耐热性。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,(2)pH值 pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值6.0-8.0，微生物最耐热：PH6.0、氢离子易渗入微生物细胞内从而改变细胞的生理反应促使其死亡。所以培养基pH值愈低，灭菌所需的时间愈短，,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,(3)培养基中的颗粒 培养基中的颗粒小，灭菌容易，颗粒大，灭菌难。一般含有小于1mm 的颗粒对培养基灭菌影响不大，但颗粒大时，影响灭菌效果，应过滤除去。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,(4)泡沫 培养基的泡沫对灭菌极为不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使传热困难，热难穿透过去杀灭微生物。对易产生泡沫的培养基在灭菌时，可加入少量消泡剂。对有泡沫的培养基进行连续灭菌时更应注意。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,分批灭菌的设计,ln(N0 / N1),四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,升温和降温阶段 K 是 t 的函数，保温阶段K 为定值。为便于计算，将整个灭菌过程按上述三个阶段划分后分别进行计算，即：,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,即整个灭菌过程由三块积分面积构成。其中升、降温阶段的温度是时间的函数。,升温阶段：,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,保温阶段：,降温阶段：,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,有一发酵罐内装 40 m3 培养基、在 121 温度下进行实罐灭菌。原感染程度为每 1 mL 有 2 l05 个耐热细菌芽抱，12l 时灭菌速度常数为 1.8 min-1。求灭菌失败机率为 0.001 时所需要的灭菌时间。,例1,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,实际上，培养基在加热升温时(即升温阶段)就有部分菌被杀灭，特别是当培养基加热至 100 以上，这个作用较为显著。因此，保温灭菌时间实际上比上述计算的时间要短。严格地讲，在降温阶段也有杀菌作用，但降温时间较短，在计算时一般不考虑。,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,例 1 中，灭菌过程的升温阶段，培养基从100 、上升至 121 ，共需 15 min 。求升温阶段结束时，培养基中芽孢数和保温所需时间。,例2,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,在升温阶段，培养基温度不断升高，菌死亡速率常数也不断增大，速率常数与温度的关系由Arrhenius 方程关联，当以某耐热杆菌的芽孢为灭菌对象时，此时 A 1.34 1036 S-1 ；E2.84 104 J/mol，因此，对数残留表达式可以作如下变化：,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,利用上式可求得不同温度下的灭菌速率常数。若欲求得升温阶段(如温度从Tl升至T2)的平均菌死亡速率常数，可以用下式求得,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,式中的积分值可利用图解积分法求得，,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,若培养基加热时间(一般以 100 至保温的升温时间) t 巳知Km 已求得、则升温阶段结束时，培养基中残留菌数(N)可从下式求得,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,以上可见：灭菌主要是在保温过程中实现的，在升温的后期和冷却的初期，培养基的温度很高，因而对灭菌也有一定贡献,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,在灭菌过程中，必需设计出灭菌过程的操作时间和温度，首先根据培养过程对培养基无菌程度的要求提出无菌判据ln N/N0,然后依据所使用的灭菌设备，和设计出的灭菌温度和时间来计算出实际的ln N/N0，看能否达到开始提出的无菌要求。,分批灭菌的设计方法,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,连续灭菌,连续灭菌采用连消塔时，可在20-30s达到顶定灭菌温度，由维持罐来保持必需的杀菌时间；采用喷射杀菌设备，蒸汽直接喷入生培养液，温度几乎立即上升到预定杀茵温度，由保温段管子的长度来保证必要的杀菌时间。采用扳式换热器、可在20s内达到杀菌温度、经保温保持必要的杀菌时间，然后在板式热交换器另一段20s内冷却到发酵温度.,四 发酵培养基及设备管道灭菌,发酵工业无菌技术,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,五 空气除菌,空气是一种气态物质的混合物，除氧和氮外，还含有惰性气体、二氧化碳和水蒸气等。此外，尚有悬浮在空气小的灰尘，主要由构成地壳的无机物质微粒、烟灰、植物的花粉以及种类繁多的细菌和其他微生物所组成。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,空气除菌的目的及重要性,在好氧深层培养中，微生物细胞的繁殖代谢需要溶解氧，因为有氧氧化对生物体来说是能量放出最多的途径。 现在深层培养都是纯种培养，培养基接种之前都经过灭菌，通入的氧气也应是无菌的。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,通入的氧气（空气）的量有多大？,举例：一个 50 m3 的发酵罐，装填系数 0.7，通气量0.8 v v m，170h 周期，那么每个培养周期需通入：,170600.80.750 = 2.86105 m3 空气,每m3大气中约含有 103104 个微生物，多为细菌及孢子，也有真菌、酵母和病毒。在工程上如何解决向培养液提供大量无菌空气的问题？,工业上利用过滤方法制备大量无菌压缩空气，用过滤介质阻隔微生物。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,空气中微生物的数量与环境有密切的关系。一般干燥寒冷的北方，空气中含微生物量较少，而潮湿温暖的南方空气中含微生物量较多，城市空气中的微生物含量比人口稀少的农村多，地平面空气微生物含量比高空多。,空气中的微生物,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,空气中的微生物是依附在尘埃上的，空气中的尘埃数与细菌数的关系如下式。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,分布规律：,微生物在空气中的分布情况与空气环境因素有关，空气质量愈好，微生物的种类及数量愈低。发酵工厂通常采用高空采气的方法。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,空气除菌方法,各种不同的培养过程，鉴于其所用菌种的生长能力强弱、生长速度的快慢、培养周期的长短以及培养基中pH值差异，对空气灭菌的要求也不相同。所以，对空气灭菌的要求应根据具体情况而定。但一般仍可按10-3的染菌概率来设计。空气净化的方法大致有如下几种。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,1.加热灭菌2.辐射灭菌3.化学灭菌4.静电除尘5.介质过滤,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,压缩 空气的压缩过程可看作绝热过程，压缩后的空气温度与被压缩的程度有关。例15的空气由1105Pa 被压缩到 3105Pa（绝压）,则温度上升到121 ；如果压缩比更大，压缩空气的温度就更高。,若将高温压缩空气通入空气过滤器，可能引起过滤介质的炭化或燃烧，而且增大反应罐的降温负荷，给培养温度的控制带来困难，因此要将压缩空气降温。,压缩空气的冷却及除水除油,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,一般用列管式冷却器进行冷却，空气走壳程，冷却水走管程，传热系数大约在 60120 J/m2s。,冷却 相对湿度、湿含量 X（湿度）：,空气中水蒸汽分压与同温度时的饱和水蒸汽压力之比称为相对湿度。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,PW：空气中水蒸汽的分压,PS：同温度下水蒸汽的饱和蒸汽压,每 1kg 干空气中所含有的水蒸汽的 kg 数称为空气的湿含量。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,如果将1的湿空气冷却，开始一段时间 X 不变，则 PW 也不变，但由于饱和水蒸汽压PS 随空气温度下降而下降，因此相对湿度逐渐增大。当相对湿度 升高到 1 时，空气中的水蒸汽已饱和，这时的温度称为:露点。,如果气体温度继续下降，空气中的水蒸汽开始冷凝成水，空气的相对湿度保持为1，湿含量 X 则开始下降，所以冷却过程可分为二段。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,压缩空气经冷却会有水滴出，混在空气中，如果使用活塞式空气压缩机，空气中还混杂有油滴（润滑油），为了保证空气过滤器的效能，必须除去空气中的水份和油滴。,第一段 T 第二段 ：T 1 （不变）=1 X 不变 X 下降 等湿冷却 减湿冷却,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,旋风分离器可分离空气中的滴液，但效果差。丝网除雾器对于直径5m的滴液，除雾效率可达99%，丝网除雾器的阻力降很小，丝网除雾器通常用不锈钢丝网、铜网或塑料网填充。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,加热 经过冷却的空气的相对湿度是100%，会把过滤介质浸湿，所以通入总过滤器前要降低 ，采用的方法是加热使 下降到 5060%。 T到发酵温度 X不变,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,理想的空气除菌流程应具备的特点,空气净化一般是把吸气口吸入的空气先经过压缩前的过滤，然后进入空气压缩机。从空压机出来的空气(一般压力在 l.96 105 Pa以上，温度 120-150 )。先冷却到适当的温度(20-25)除去油和水，再加热，最后通过总过滤器和分过滤器除菌，从而获得洁净度、压力、温度和流量都符合要求的无菌空气。,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,低湿空气：,高空采气,无油润滑压缩,贮罐,冷却器,总过滤器,分过滤器,净化空气,发酵罐,五 空气除菌,发酵工业无菌技术,高湿空气：,高空采气,无油润滑压缩,贮罐,冷却器,总过滤器,分过滤器,净化空气,发酵罐,油水分离器,除雾器,发酵工业无菌技术,作业,1.试根据对数残留定律，如何确定培养基的灭菌时间?工业生产中采用高温瞬时灭菌的依据。2.比较分批灭菌与连续灭菌的优缺点。3.结合本地实际，设计一空气净化流程并对其进行分析。,
